FAKToRy ovltvNulici FREKVENcI MTKRoJADER

FAKToRy ovltvNulici FREKVENcI MTKRoJADER

5-6/2070
OCHRANAOVZDUSI
MTKRoJADER
ovltvNulici FREKVENcI
FAKToRy
DETIV OSTRAVE
U ASTMATICKTCH
Andrea Rdssnerov|,Mitada Sp6tov5, PavelRiissnerJr.,Zuzana NovilkovS,tvo Solansk!',Radiml. Srdm
nV en, v.v.i.,Praha,[email protected]
tJstavexperimentdlnimediciny
ABSTRAKT
V t6to studiijsme sezamdiilina studiumvlivuvdku,pohlavi,kouieni, piijmu vitaminfl,genetic\fchpolymorfismria oxidadnihopoSkozenina frekvencimikrojaderu skupiny175 d5ti (8L astmatic\fch
skupinabyla
6- 15let.Studovan6
a 94 kontrolnich)z Ostr'avyvevdku
v listopadu2008,kdy pnimdrn6hladinabenzo[a]pyrenu
sledov6na
(BtalP) mdien6staciondrnimmonitoringembyla 11,4+ 9,8 nglm3.
Byly studovdnygenetickepo$morfismymajicivztahk metabolicke
aromatichichuhlovodikti(PAU)a jejich deaktivacipolycyklickfch
analiuy
toxifikaci.Vfsledkyziskan€sryrZitim automatick6obtazovf,
mikrojaderbylysrovndvfnys publikovanfmiridajiziskanlfmivizu6lnlmhodnocenim.
Klltovf slova:Astma,automatick| obrazov6 analyza,ddli, geneticlgi
ovzduSi
polymorfismus,
mikrojddra,oxidadnipoikozeni,znediStdni
0voo
testu
AnalyzapoSkozeniDNA s vyuZitimmikronukleov6ho
je rutinndpouZivanou
metodikouv cel€iaddstudii.Drikazem
test"do inslov,,micronucleus
tohom0Zeblit zadilniklidovfch
pfibliind
5500stuPubMed,kter6obsahuje
temetovddatab6ze
omezime
vyhled6v6ni
dii s pouZitimt6tometodiky.PokudnaSe
qfsledek
blidostaneme
a,,exposure((,
dal5imslovem,,human"
po
prov6ddnd
cestudie
Zicisek 1000.Thtoskupinapiedstavuje
profesion6lnim
expozicim,
l6m svdtdvevztahuk nejrfizndj5im
expoziciionizujicimuzilieni,tabdkovdmukouii, pesticidrim,
alei l6div.
ovzduSi,
znedi5t€ni
poprvd
sahajiaZdoroku1959,kdybylametodika
Koienyanallizy
aberaci[1]. Vpnam
pouiita pro hodnocenichromozomov.ich
kultivacelidpro dne$nipodobumetodikymd pak piedevSim
B [3],
skfchperifernichlymfocytri[2] a aplikacecytochalasinu
kter,jblokujeodddlenibundk,coZvedek moZnostihodnoceni
po5kozeni
bufikach,kter6jetaktol6pedetegov dvoujadernlich
vateln6.easov6ndrodnosta pracnostmikroskopick€analyzy
v automatizaktenispodival
nov.ifenom6n,
vnesladohodnoceni
ci cel€hoprocesu.Prvnisystdmyvytti,ivajiciautomatickouobrazovouana$zumikrojaderbylytestovdnymezilety 7990a 1996
[4-8], av5akjejich neqihodoubyla piedw5imnizkdridinnost
pfi vyhled6v6niobjektfi, di identifikacidrobnychmikrojader.
posunu.Roz5ifeni
sysOd roku2004v5akdo5lok qiznamndmu
softwarempro hodnocenimikrojader
temuMetafervybaven6ho
svdtajii piineslo
v mnohaIaboratoffch
od firmy MetaSystems
vfsledkfi[9-18]. Mezit6mitopracecelouiadu publikovanlich
a validaci
na optimalizaci
zamdien€
mi jsou zahrnutlpublikace
metodiky[9-11], @kum n6doroqichonemocndnl172,l3l,
ovzduli[14-16]
studievevztahukeznediStdni
biomonitorovaci
naradiadnibiodozimetrii
a pr6cezamdiend
[17,18].Souiasnou
je syst€mod firmy Imstar,
syst6mu
ke zmindn6mu
altemativou
kterlizatimnenipffliSroziiien[19].
THEFREQUENCY
AFFECTING
FACTORS
CHILDREN
IN ASTHMATIC
OFMICRONUCLEI
FROMOSTRAVA
In thisstudyweanalyzedthe ffict of age,gender,smoking,vitamins
and oxidativednmageon thefrequency
intake,geneticpolymorphisms
of 175children(81with asthmaand94conof micronucleiinagroup
trots)fromOstravaaged6- 15years.Thestudygroupwasfollowedin
November2008,whenthe meanof concentrationof benzo[a]pyrene
BIa]P measuredby
stationarymonitoringwas11,4! 9,8 ng/m3,Geneticpolymorphismsrelatedto metabolicactivationof polycyclicaro(PAHs) and their detoxificationwerestudied.We
matic hydrocarbons
analysisof microcomparedtheresultsobtainedbyautomatedimage
nucleiwith publisheddata obtainedbyvisualscoring'
Keywords:Asthma,automatedimageanalysis,children,geneticpolymorphism,micronuclei,oxidativedamage,air pollution
Prvnivfsledkystanovenifrekvencimikojadervevztahuke zneuk6ana[fuou,
obrazovou
mdien6automatickou
di5tdniovzdu5i,
B[a]Pnamdiezalynacitlivostmetodikyk nizlcfmkoncentracim
skupinmdsts\ichstr6Zniku
nfchpfi personilnimmonitorov6niu
skupinbyl
afididi autobustv Praze[14,15].Piianalyzilchtdchto
polycyklick'.ich
aromaticd6lepotvzenvlivhladinkarcinogennich
h.ichuhlovodiku(k-PAU)namdienlfchaZdvamdsicepied odb6materi6lunafrekvencemikojader.Dal5iv.islerembiologickdho
dekverztahukekouieni,kdyn ebylrozdilmuikuidkyanekui6lg,
kter6uv6ddjirizikopouze
bylv souladuspublikovanfmiqfsledky,
pfind5ejici
pr6ce,
souhmnlipiehled
Novd
kufAku
u silnfch
[20].
umoinilarovstudiich,
v
biomonitorovacich
skupin
studovanfch
445 osob
ana$na
Souhmn6
k
vdku
vztahu
nti ana$ntve
[16].
pii
qisledku
zisqisledky
anallize
ziskand
srovnatelnE
zdeukazuje
pohlavi
k
vztahu
to
i
ve
pii
a
hodnoceni
manu6lnim
kanfch
[21].
populadni
skupinyjeprovdrizikzatiZen6
Komplexnihodnoceni
KromdcytogeneddnosvyuZitimcel6iadybiomarkeru
122,231.
dasnfch
patff
biomarkeni
do
kategorie
kter6
tickich vy5etieni,
nddoroqfch
napffklad
riziko
odhadovat
ridinku,umoZfiujicich
mikaZdesitkylet dopiedu,kam patff i stanoveni
onemocndni
indivipii
i
biomarkery
qfunamnou
hodnoceni
roli
rojader,hraji
genetic\ich
patii stanoveni
Dot6tokategorie
duflni vnimavosti.
ovzdu5i
znedi5tdn6ho
polymorfismri.Studievdnujicise vlivu
metabolick6
k
nalidsk6zdravisezamdiujinaenzymymajicivztah
(EPHX),
aktivacixenobiotik,jakoje napfikladepoxidhydrolfuza
(GSTMI,
kampatii glutationS-transferfzy
dijejichdetoxifikaci,
GSf TD . Polymorfismyv genechEPHX, GSTM 1 a GSTT1 byly
i kontrolnichskupin[U-26].
u iady exponovanlich
studovdny
Yyznamnl,shmuti vfsledkrlve vztahuk formov6nimikrojader
piindSirwiew z rcku 2008,zekter6hovyplliv6,Zepolymorfismus
roliv modulacipo5kozeni
genech
hrajepodstatnou
vezmindnlich
chromozomri
[27].
Mezi dal5iintenzivndstudovandbiomarkerypatii biomarkeoxidadniho
po5kozeni.
Tovznikdjakodtisledek
ry oxidadniho
-44-
5-6/2010
OCHRANAOVZDUSI
stresuprisobenimreaktivnichforem kysliku (ROS, reactive Monitoring zneti5t6ni ovzduSI
oxygenspecies)na biomolekuly.Oxidadnistresje vyvol6n
nerovnov6hou
mezihladinamiantioxidantfl
a oxidanttv or- Monitoringznedi5tdni
ovzdu5is vyuZitimpersondlnich
mon!
ganismu.Oxidadnipoikozeni,kter6mriZemit za n6sledek torfi nebylv t6tostudiiaplikovdn.
Odaiezestaciondrniho
mopo5kozeni
bfzi DNA vedouciaZkjedno- di dvouietdzcoqim nitoringuo hladindB[a]Pv Ostravd-Bartovicich
v roce2008
zlomtm [28],peroxidaci
je spo- mdien6Zdravotnimfstavemv Ostravdbylyziskdnztabel6rIipidridi modifikaciproteinfi,
jov6nosevznikemnddoroqfchonemocndni
i nemocidlicha- nihopiehleduCesk6ho
hydrometeorologick6ho
ristavu[31].
cihoa kardiovaskul6rniho
syst6mu[29]. Urovei oxidadniho
poSkozeni
DNA u ddtivdetndpodskupiny
s diagn6zou
asthma Anallza mikrojader
bronchiale
bylajii v na5irepublice
studov6na
u kohortyz Teplic a Prachatic
Kultivacepln6krvebyla zapotatado 24 hodinpo odbdru.Po[30].
Pr6vdasthmabronchiale,kter6je nejdastdj5imzlndtlivym drobnostik pouZivand
metodicekultivacezaloi,en€
na stimuonemocndnim
dlichacichcesta kter6mApiimy vztahk vyvo- laci lymfocytri1 % phytohaemaglutininem
a blokov6nicytol6niimunitnireakceorganismu,
mriZemit zandsledek
zqf5e- kinezeqtochalasinemB [3] a n6sledn6mzpracovilnibyly
jii:
n6oxidadnipo5kozeni
makromolekul.
To sev disledkumtie
diivepublikov6ny
[15].
projeviti zrl.i5enou
frekvencimikrojader.Totobylahlavnihy- Promikroskopickou
analyzubylapouZitafluorescendnd
barvepot€za,kteroujsmev naSistudiitestovali.
n6sklasvyuZitimDAPI,kter6bylodoporudeno
pro automaticCilemna5istudiebylozjistit miru po5kozeni
DNA u astma- kouobrazovou
ana$zumikrojader[10].Hodnoceni
byloproveticklicha kontrolnichddti z Ostravy-Radvanic
a Ostravy- denos pomociautomatick6ho
skenovaciho
syst6mu
Metafer4,
Bartovic,oblastis nejvy55imi
koncentracemi
k-PAUv eesk6 Verze3.2.7(MetaSystems)
a mikroskopu
Axio ImagerZ1 (Carl
republice,a kde bylo v letech 2001 ai:2007 zaznamenlno Zeiss)vybaven6ho
fluorescendnim
filtrem pro DAPI barven6
vlrazn1zvlieni bronchi6lniho
astmatuu ddti.Soudasnli
ce- preparlg a motorizovanyi,rn
stolkem[9]. Vyhled6v6nidvoulostdtniprtmdrje 8-1.0 o/o,
nicm6ndna Ostravskudosahuje jadernfchbundk(DB) bylo provedenopii celkovdmzvdt5eni
nemocnost
at 30 %.Zdejii hodnotyk-PAUndkolikan6sobnd 100kr6t.Nastaveniparametrupro ryhled6v6niDB a detekci
pievy5ujihladinyzji$fovan6
v Praze.Hodnocenijsme pro- mikrojader
odpovidajici
klasifik6toru
MicroNuc,
verze3.5.704,
vedli s vyuZitimautomatickdobrazov1anali'zymikrojader bylojiZ pops6nodiive [14]. U v5echvzorkt bylo analyzovdno
celkemu175 d1ti.U sledovanlfch
ddtibylod6leanalyzov6no 3000DB.V5echny
automaticky
vybran6objektys mikroj6drem
oxidadnipoSkozeni
DNA, lipidfi a proteinri.Vliv individu6l- bylykontrolovflny
av piipaddpotiebybylaprovedena
korekce.
ni vnimavostik polutantrimz ovzduiibyl do anal!,2
rovndZ Vlfsledek
jako prumdrnlipodetmikrojader
anal!,zybyl v54fidien
zahrnut.
natisicdvoujadern.lich
bundk(MN/1000DB).
MATERIALA METODIKA
Mdieni hladin kotininu a vitamin0
StudovanSskupina
Hladinykotininuv modi,kten_i
slouZijako markerexpozice
tabdkovdmu
kouii,bylystanoveny
radioimunochemicky
t321.
Studiebyla provedena
v Ostravd-Radvanicich
a Ostravd-Bar- Ddtis hladinoukotininuvy55ineZ450ng/mgkreatininu
byly
tovicichv prubdhulistopadu
2008.Sledovanou
skupinoubylo povaLov1ny
zaaktivnikui6ky.
81 ddti, u kten_ich
bylo diagnostikov6no
asthmabronchiale, Stanoveni
vitaminfiA, E a Cv krevniplazmdprovedla
servisni
a 94 kontrolnichddti.Pnimdrnfvdkridastniktstudiebl u ast laboratoiUKBLDVFN
pomociHPLC[33,34].
matic(ichddti10,4+2,8a u kontrolniskupiny10,8+ 2,6roktt.
podtu175ddti bylo92 chlapctta 83 divek.Podle Analfza genetickfch polymorf ism 0
Z celkov6ho
rtdajizdotazniktpoch6zelo
78 ddtiz nekui6ck'_fch
dom6cnosti
a97 ddtisdilelo
dom6cnost
s 1-5 kouiicimiosobami.
VzorkyDNA byly zisktny ze slin. Pro izolacibyl pouZitkoOd v5echfdastnikribyl ziskdn dotazniko zdravotnimstavu merdnikit ORAgene
DNA (DNAGenotek,
Ontario,Canada).
a Livotnimstylu. Rodidev5echddti podepsaliinformovanf Izolacebylaprovedena
podleprotokoluqirobce.
souhlasa mohlipodle2. Helsinsk6
deklarace
kdykoliukondit Piitomnostdi absenceGSTMLa GSTTLgenribyla urdov6na
fdastve studii.Studiebylaschvdlena
etickoukomisiUstavu spomociTaqMan
Real-Time
PCRmetody
(AppliedBiosystems,
experiment6lni
mediciny
AV CR,v.v.i.
CA,USA;TaqMan
GeneCopyNumberAssay
[PN4331182]).
ho laboratorni analyzybyly odebirdnyvzorky krve, modi Stanovenibylo provedenos vyuiitim syst6mu7900HT\Zora slin. Krevbyla odebir6nado zkumaveks heparinem(pro ky byly rozddlenyna dvd skupiny:GSTMI/GSTTI negativni
anal!,zumikrojader),s Li-heparinem(pro stanovenivitaminu aGSTMI/GSTTIpozitivni(vzorkysminimdlnd1 kopiigenu).
C) a s EDTA(prostanoveni
hladinvitamintA, E a prozji5tdni Polymorfismus
v exonu3 genuEPHX (EPHX3)a exonu4 gepo5kozeni
frovnd oxidadniho
proteinfia peroxidace
lipidri). nu EPHX (EPHX4)[2a]byl stanoven
rovndZpomociThqMan
Odebran6
modslouZila
k ovdieniinformace
o frovni pasivni- Real-Time
PCRmetody@qMan DrugMetabolism
Genotyping
ho kouienistanovenim
kotininua prostanoveni
S-oxo-7,8-di- Assay[C_14938_30
proexon 3 a C_11638783_30
proexon4]).
hydro-2'-deoxyguanosinu
(8-oxodG)v modi.Odebran6
sliny
bylypouZitypro izolaciDNA pro stanovenigenotypri.Vzorky Stanovenioxidainiho po5kozeni
bylyuloZenydo 4 oCa okamZitdtransportovdny
kurlirni sluZboudo laboratoie
Odddlenigenetick6
ekotoxikologie
v praze, Hladina8-oxodGv modibylastanovena
metodoukompetitivkdebylyd6lezpracovdvdny.
ni ELISApodlepopsan6
metodiky[35,36].
-45*
s-6/2070
OCHMNAOVZDUSI
B[a]Pzestaciondrniho podtumdieni61 byla51kr6tpiekrodena.
Obr.'l: Prrlm6rn6
m6siinikoncentrace
Maxim6lninamdiend
monitoringu
v roce2008v Ostrav,E-Bartovicich
hodnotabyla92ng/m3B[alP
35
studoV tabulkf ch 1 a 2j soushrnuty zllJrladni
charakteristiky
vanfchskupinastmatic(icha kontrolnichddti (podtyvzorkt,
30
prtmdry smdrodatn6
odchylky,mediany,maximaa minima)
25
z hlediskavdku,hladinykotininua vitaminriA, C a E. Ztdajfi vyplyv6,Zeobdskupinyjsouvdkovdvyrovnan6.Prflmdrnd
20
hladinakotininuv modibylamirndvy55iu skupinyastmatikri.
€t0 r s
E
Maximdlninamdien€hodnotykotininuv obousledovanfch
10
ukazujina piitomnostddti,jejichZhodnotyodposkupin6ch
vidaji
aktivnim
kuidktim.Z hlediskapiijmu vitamint neni
.
5
provitaminAaE. Piijemvitaminu
rozdilmeziskupinami
C se
0
zddsignifikantnd
vy55iu kontrolniskupiny(p < 0,01).
9 1 0 1 1
t
2
3
4
5
6
7
Piehledpnimdmlfchhodnotfrekvencimikrojaderpro celouslem€sic
dovanouskupinuddti,vdetndfrekvenciprojednotlivepodskuHladiny karbonyloqichskupin v proteinechkrevni plazmy piny (astmaticia kontroly;chlapcia divky;ddtido 10 let a ddti
rodin;kontrolni
byly stanovenymetodounekompetitivniELISA podlepubli- nad10let;astmaticiz kui6clqicha nekuidclc.ich
jsou
postupu[35],s drobnlimimodifikacemi
rodin)
uvedeny
v tabulskupiny
z
kui6c(ich
a
nekui6c\ich
kovan6ho
[37].
nicm6nd
nejsousignifikantni,
Peroxidace
lipidribylastanovena
mdienimhladin15-F2t-isopro- ce 3. Rozdilymezipodskupinami
n6sledujici
frekvencimikrojakitem(Cayman naznaduji
trendy:mimdzqf5enou
stanu(15-F2t-lsoP)
v krevniplazmdkomerdnim
podle
mim6zqfSeni
der
u
astmatichfch
ddti
ve
srovn6ni
s
kontrolou,
MI, USA)
doporudeni
vyrobce[38].
Chemical
Company,
po5kozeni
genetick6ho
materidluu divekve srovn6nis chlapci
(pro kontrolnipodskupinujetentorozdilsignifikantni,chlapStatistick6analiza
ci:2,91+ 1,32MN/1000DB vs.divky:3,39+ 1.,17MN/1000
Statistick6analyzabyla provedenas vyuZitimprogramuSAS DB, p < 0,05),porovn6nimlad5ichddti s vdkoqfmprtmdrem
9.1.3.(SASInstitute,NC, USA). ho data,kter6nemdlanor- 8,0+ 1,2leta star5ichddtis vdkoqfmprflmdrem72,7i 1,5let
Mann- neukazujerr,.finzndj5i
rozdily,porovndniastmatikfia kontrolz kum6lni distribuci hodnot,byl pouZitneparametriclc.i
frekvenceu astmarodinukazujenejvy55i
WhitneySumU-testpii porovn6v6ni
skupin.K anabpevztahri i6ch.icha nekuidclc.ich
po5kozeni
rodina nejniZ5i
byla tikuz kui6clc.ich
u kontrolz nekui6c\ichrodin.
mezihladinoumikrojadera markeryoxidadniho
pouiitabivaridtnilogistick6regrese.
zvlsledkriv tabulk6ch1 a 2, v celkov6stuHodnoceni
vlivu studova- Jakbylonaznateno
d€ti
multiva- dovan6skupin€i v r6mcioboupodskupinbylyhodnoceny
nlich parametnlna riziko astmatubylo analyzovdno
u aktivnichkui6kt. Vtabulce4
shladinoukotininuzji5fovanou
ri6tniIogistickouregresi.
je provedeno
podrobndj5i
rozddleniskupinsohledemnanamdienouhladinukotininu.Ddti s hladinouvy55inei:450ng/mg
kreatininuvytvofilynovoupodskupinuaktivnichkui6ki. Z tazu.i- bulky vyplfv6,ie frekvencemikrojaderu osmi astmatic(fch
Studiebyla provedena
v lokalitd,kdeje t6mdi celorodnd
jakokui6ci,statisticky
qiznamndpieqr5uB[a]P Na obnizku ljsou zndzorndnyjeho ddti,klasifikovanlich
Senfkoncentrace
pii stacion6mimmo- je hodnotuzji5tdnoupro kontrolnikouffciddti (p < 0,05).Rozprfimdm6mdsidnikoncentrace,
zjiStdn6
HladinaI ng/m3 dilyvefrekvencimikrojadermeziastmatikya kontrolamisepii
nitoringuv roce2008v Ostravd-Bartoviciclt
s hodnotami
sniZily,pokudporovndv6me
B[a]l her6 piedstavujehodnotu cilov6hoimisniho limitu odddlenikui6krijeStd
v
uvedenlfmi
tabulce
3.
doroku2012,bylasplndnapouzevdervnu
,pfitemi,zcelkov6ho
Vlisledkyvtabulkfch5 a 6jsoujiZ uv6- skupina
populace
astmatik0
Tab.1: Charakteristika
studovan6
ddny po vyloudenikouiicich ddti. Thbulka 5 shmujefrekvencemikrojader
Smdrodatn6
Median Minimum Maximum
N Prf,mdr
odchvlka
s ruznlim genotypem
v podskupindch
10.4
5.9
15.9
8 1 r0.4
2,8
Vdk(rokv)
studovanlich gent GSTMI, GSTTL
tI.6
t.9
2781,.3
Kotinin(nslmekreatininu)8 1 180.9
5'11..4
a EPHX. Genotypybyly stanovenypro
1.5
0,7
0,2
81
0.7
0,3
VitaminA(mell)
156ddti.ProgenGSTM1 bylapozorovl1..9
1.3.4
63
6.2
2.6
5.7
VitaminC (msll)
vyznamnd
zv'.f5end
hladina
nastatisticky
A a
10.6
23.0
81 11.0
3.1,
VitaminE (msll')
alespoi
mikrojaderu jedincrinesoucich
N - poCetosobveskupind
jednukopii genu.Statisticky
qiznamnli
pro
gen
rovndZ
GSTT1.
byl
tento
trend
Tab.2: Charakteristika
studovan6populace kontrolniskupina
pozorov6n
rozdil
nebyl
Zildny
vyznamy
Smdrodatn6
N Pnimdr odchvlka Median Minimum Maximum
pii porovn6nivariantgenuBPHX.
jednotli(rokv)
Hladinyoxidadnihopo5kozeni
15.6
2,6
11.0
6.0
Vdk
94 10,8
piislu5nfch
(nglms
qich
na
z6kladd
biomolekul
151,0
t3.6
2,9
3345,r
Kotinin
kreatininu)94
515,2
1.,9
markerfi(8-oxodG- markerpolkozeni
0,6
0.2
VitaminA(mell)
93
0.7
0.3
1 ?
t3.4
DNA, karbonylov6skupiny- marker
46
2,8
7.2
VitaminC (msll)
19.9
9.9
3.0
VitaminE (mell)
93 9,8
3,0
oxidaceproteinria l5-F2t-lsoP- marN - poiet osobveskupind
lipidt) jsoushmutyvtakerperoxidace
Wsuorcr
- 46 -
5-6/2010
OCHRANAOVZDUSI
podobndhladinymarkertoxidadniho
bulce6.Vlisledkyukazuji
po5kozeniv
obousledovanfch
skupin6ch.
Vfsledkyvztahri
mezi
frekvencimikrojadera markeryoxidadnihopo5kozeniv cel6
studovan€
skupinds kuidkyi bezkui6kt hodnocen6
svyuiitim
bivaridtnilogistick6regresevtabulce
7 ukazujinasignifikantni
vztahmezihladinoumikrojadera oxidadnimpoikozenimproteint. Vlisledkymultivari6tnilogistick6regrese
v tabulce8 pro
stejn6skupinyukazujiv cel6msouborunamirndzqi5en6riziko
frekvence
mikrojaderu astmatic(fchddti.Parametry
oxidadni
hopo5kozeni
neukazujinavztah
sesledovanou
diagn6zou.
Z na5ichqisledkfiporovn6nipolkozenimezikontrolnimi
1421.
a astmaticlqftmi
ddtmijepatrn6piibliZndstejndexpozice
znedi5proob6skupiny.
tdn6muovzdu5i
Piekvapiqimzji5tdnimv t6to studiibylo kouieni 15 ddti,a to
i tdch,u kteqfchbylodiagnostikov6no
astma.JiZdiivebylaprov6ddnadetn6porovnAvhni
mezikui6kya nekui6kyve vztahu
ke genotoxick6mu
po5kozeni.
Na zdkladdpfudchozichanalyz
je
moi,n6
odek6vat
n6rust
frekvencemikrojaderpouze
[20]
(pr0mdrt sm6rodatn5
Tab.3: Frekvence
mikrojader
odchylka)
na 1000dvoujadernfch
bun6k
Skupina
VSichni
Astmatici
Kontrola
Chlapci
Divky
Ddtido 10let
Ddtinad10let
Astmaticiz kui6ckr?ch
rodin"
Astmaticiz nekuidchfchrodin"
Kontrolvz kui6chfchrodin"
Kontrolvz nekuiSclcich
rodin"
DISKUZE
N
175
81
MN/IOOO
DB
3,24!t,34
3,33!1.,42
hezentovandstudiebyla zamEienana vyhodnocenifrovnd
94
3,t6!1,26
po5kozeni
genetickdho
materi6luu skupinyastmaticlc.ich
ddti
92
3
,1611,31
z Ostrar,y-Radvanic
a Ostravy-Bartovic,
kdekoncentrace
k-PAU
83
3
.
33tt.37
v orzdu5ivyrazndpievy5ujihodnotyzji5tovand
v ostatnichd6s77
3,21+1.,1,9
techna5irepubliky,
ato v pnibdhucel6horoku.V hodnoceni
byly
98
3,26!1,44
br6nyvrivahui ostatniparametryjakojepffjemvitamint,expoJ)
3.40!1.34
zicetab6kovdmu
kouii, oxidadnipo5kozeni
dal5ichbiomolekul
46
3,28!t,46
a individu6lni
vnimavost
kesledovanlfrn
xenobiotikrim.
62
3.22tt.30
Modernipiistup poui:ig pii analyzemikrojaderve sledovaJZ
3.06
r 1.15
nlfchskupindch
astmatic\fcha kontrolnichddtiumoZnilhod- N - poiet
podleildajfiz dotaznikfr
lsobveskupind;
"rozdileni
notitvy55ipodtydvoujadernlich
bundk(3000DB/vzorek),neZ
je obvykl6pii manudlnimhodnoceni,
coLnilmumoZnilozis- Tab.4: Frekvence
(pr0m6r+ sm6rodatn5
mikrojader
odchylka)
na 1000dvoujadernfch
katstatisticky
hodnotndjSi
podle
bun6k- rozd6leni
data.
hladinkotininu
NaSepiedchoziqfsledlq/z praisl<ychstudii ukazovalyvysokou nam6ienfch
Kotinin
citlivosta vhodnostmetodilgpro testov6ni
genotoxick6ho
ridin- Skupina
N (nslms
MN/IOOO
DB
kreatininu)
ku polutantripii niz(fchperson6lnich
expozicichB[a]P
[14,15].
28,2!4L,0
3,20t 1,33
Nejnovdj5i
studieprovedend
porov- V5ichni nekui6ci 160
v Cind[39] piin65iv.isledky
- nekui6ci I J
Astmatici
27.4!41,.3
3.23tr.38
n6ni zamdstnancri
ocel6mya pracovnikri
ve zdravotnictvi.
ExKontrolv-nekuidci 87
28,8
t
40.9
3,t8!1,29
poziceB[a]Pnamdiendu podskupiny
exponovanllich
osobbyla
15 1622.8!866.4 3,67tr,36
926,9ng/m3,prokontrolnipodskupinu
pak 49,7ng/m3.Hladina V5ichni kui6ci
- kuiaci
Astmatici
8 1581.6
t 695.1 4.25+1..54*
po5kozeni
prezenovan6jako
frekvence
MN/1000DBbylasignifi7
Kontroly- kuidci
1669.9!1087.6
3.00!0.77
kantnd4f5en6u exponovanfch
osob,nicm6ndvezmemeliv
fva- kuldcivs.kontroly
N - poietosobveskupind;*p<0,05(astmatici
po5kozeni
hu
v kontrolniskupind3,98MN/1000DB pii uveden6 -kuidc)
expozici,kter6je rovndZextr6mndqrsok6,lzeuvalovatnazii<ladl
(pr0m6r+ sm6rodatn5
mikrojader
tdchtoa na5ichpiedchozich
mdieni[16] o neline6mimvztahu Tab.5: Frekvence
odchylka)
na
1
000
dvoujadernlich
bundku nekouiicich
d6ti
mezid6vkoupolutantfia hladinamigenotoxick6ho
po5i<ozeni podlezjiStdn6ho
genotypu
u osobpochhzejicich,
nebodlouhodobdilficich v dan6lokalitd.
Studovanf Genotyp/
W1cezrol<t2008[40]porovndvd
genovouexpresiu osobZijicich sen
N (%)
p
MN/IOOO
DB
Aktivita
v rtnn!,chlokalitachBelgiea dochilzik zillru, Le mezijedinci GSTMl Pozitivni
87 (55,70/o) 3.46tr.45 0.02
z rtnn!,chlokalitjsouvysok6rozdilyzhlediskaexpresnich
profihi.
Neeativni
69 (44,3o/o) 2 . 9 0 ! 1 . 1 1
TotomfiZeblft i rSrsvdtlenim,
prodnenipffmorimdmlivztahmui
GSTTl
Pozitivni
r17 ft50/o\
3,36!1,42 0,02
ddvkoua po5kozenim.
Podobn6
zAvEry
o rozdilnostiexpresnich
Negativni
39 (250/o)
2,79!0.96
profilt naznadujipiedbdZn6
vfsledkystudieporovnlvajicimiru
EPHX
Nizk6
62(39.7%\ 3.12!t.12 0,87"
genfiu ddtiz Ostrarzy
exprese
a Prachatic
[a1].Jinfm pffpadem
Stiedni
80(51.3%) 3,23!1,48 0,39b
jsoupakosoby,
kter6zmdniprostiedi,a reakce
organismu
natuto
Vvsok6
14 (9o/o\
3,55
r 1,41 0.34.
zmdnumtiZeblit krdtkodobd
genetickEho N - poiet osobveskupind;oporovndnimezinizkoua stiednl
z hlediskapo5kozeni
materidluvelmiintenzivni[16].Ve tztahuk naii studovan6
aktivitouEPHX; bporovruinf
pomezistiedni avysokouaktivitou
'porovndnimezinizkoua vysokouaktivitouEPHX
pulaciddtia k nejnovdjiim
poznatkfim
zesvdtasezd6,Zehladiny EPHX;
genotoxick6ho
poskozeni
v cel6skupind Tab.6: Hladinyoxidatnihopoikozeni(pr0m6r+
smErodatnd
odchylka)
nejsoutakdramatick6,jakbysedaloodestudovanfch5iomolekulu irekouiicich'
d6ti
kdvatpii line6mimrrztahu
k ddvce.
8-oxodG
Karbonylovd
skupiny
15-F2t-lsoP
N (nmoVmmol
N
je hodnoceni
porovn6nim
Jinlfon
vevzta(nmoVmlolazmv) N (pelml plasmv)
kreat.)
hu k diagn6ze
asthmabronchiale
u ddti. V5ichni
160
6.38
r 2.55
159
21.06+4.29 159 161.,07
t 62,80
Obecndplati nrlienh citlivost ddti ve
Astmatici
5,96!2,61
20.82
t 3.55
IJ
1.60.04!76.97
uztahuke znedi5tdn6mu
ovzdu5i,a to
Kontrolv
87
6.73!2.46
86
21,27
r4,83
86 161.94
r 48.08
piedev5im
proto,Zejejichimunitnia dliSrovn6ni.
o'
0.07
0.74
0.08
chacisyst6mnemdje5tdukondenlfv.fvoj N - poiet osobveskupind;'porovruintmeziastmatil<ya kontroln{skupinou
-a
I J
-47-
5-6/201,0
OCHRANAOVZDUSI
Tab.7: BivariStni
frekvence
logistick6regrese
mikrojader
s parametry
poikozeni
oxidadnfho
Cel6skupina
(s kutfkv)
Cel6skupina
ftez kuiikri)
oR'(95 %CI)b
p
p
oR"(95%Cnb
N
(0,s1(0,56
8-oxodG
I/J
1,70) 0,81 160 1,05
0,93
1.98) 0.87
Karbonvlov6
skupinv 174 2.400.29-4.47\ 0.006 159 2,47(I,29-4,71) 0.006
- 1,07) 0,08
15-F2t-lsoP
174 0.62(0.34- 1..1.4\0.12 . 1 5 9 0,56(0,30
bkonfidenCnf
potet
N
osobveskupind;'odds
ratio;
interval
N
vfsledky,kter6 neukazalyzqiSen6hlapo5kozeni
dinyoxidadniho
DNA, lipidri
ani proteint.Lzesedomnivat,Zebiologiclcimateri6lpouZi{fproana[fzy(mod,
krevniplazma)neniprozachyceni
zmdn
koncentraci
biomarkenioptimdlni.
zAvEn
Naie prdce analyzujerirovefi poikozeni genetick6ho
materidluu souboru
81 ddti s diagn6zouasthmabronchiale
Cel6skuoina(skui6kv)
CelSskupinaOezkuiSkrl)
p
a 94 zdravychddti z Ostravy-Radvanic
p
oR, (95%CI)b
oR, (9570Ct)b
- 3,30)
Zji5tdn6frelorence
MN/IOOO
DB
l.7s(0.94-3.29\ 0,08
1,69(0,87
0,1.2 a Ostrarry-Bartovic.
8-oxodG
0.56r0.32- 0.99)
0,05
0,64(0.34-1,.2t\
0.17 mikrojadernazna(ujizvyltenlriziko po- 1,07) 0.08
Karbonvlovd
skuoinv
DNA u astmatic(ichddtiz ku0,60(0,33
Skozeni
0.77rc.$-1.48\
0.43
- 1.1n
(0.29
15-F2t-lsoP
0.54
0.60(0.30
0.98)
0.04
0.13 [6clc!chrodin a vysok6riziko pro ddti,
'oddsratio;bkonfideninf
interval
kter6pfi tomtoonemocndnikouii.
Zhrovefibylopohnzenovy55irizikopo5kozeu silnfchkui6kri(osobykouiici30 a vicecigaretzaden).Kou- ni u divek.krametryoxidadniho
po5kozeni
neuk6zaly
u t6toskuieni ddtiv na5ikontrolniskupindneukdzalo
rvyilen€poikozeni pinynajasnE
souvislosti
sastmatem.
Zqf5enfhladinamikrojader
genetick6ho
materidluaje tedyvsouladuscitovanoupraci,nic- bylaasociovdna
po5kozenim
proteinri.
sezqi5enlfrn
oxidadnim
m6ndkombinaceastmaa kouienijiZ vhi:ndjiirizikopro genopodskupind
piedstavovalo. Poddkovdni
toxick€po5kozeni
v naii studovand
JakjiZ bylo zmindno,vliv individu6lnivnimavostina zikladE Studiebylaprovedena
sfinaninl podporouMinisterstvaiivotnlstanovenifrekvencemikrojaderu jednotliqfchvariantvybra- haprostiedtCR@rantSP/1b3/8/08).Autoii ddkujiMUDr. Evd
nlich metabolic\fch genfi byl dal5im sledovanlfon
markerem. Schallerwdzasbdrbiologickdho
materidluaMgr. MiladdKoitfFrekvence
v'.iskytujednotliqichvariantgent odpovidalyodeka- ia6 mana$zyvitaminfi.
populaci.Piehlednfdl6nek
vanlimhodnotampro kavkazskou
genetickymipolymorfismy LITERATURA
[27] shrnujicivztahmezivybranlfoni
a po5kozenim
chromozomtukazujenavpnam polymorfismri
pr6vdv genechEPHX, GSTMLa GSTTI",na kter6jsme seza- tl1 Ewng H. J., Neary,G. J.,Wliamson, E S.:The relativebiologicalefficieruyofsingledosesoffastneuhonsandgamma-ra5nonVrcia
fubaroots
mdfili. Nicm€nd,v'.isledky
vyplyvajiciz analyzypublikacina Puandtheeffectof oxygen.krt II. Chromosome
damage:the productionof
bMedunejsouvZdyjednoznadn6.
ProobagenyGSTje moi.nE
micronuclei.
Int J.Radiat.Biol.1. 1959.s. 216-229.
po5kozenijak
pro
dohledatpr6ces vy55ifrekvencigenetick6ho
Countryman,P I., Heddle,J.A.: Theproductionof micronucleifrom chro12)
pffpadpfftomnostialespofijedn6
takprojejichabsenalblygenri,
mosomeabenationsin inadiatedculturesof humanlymphocytes.
Mutat.
ci. Nejednotnost
v'.isledkflve vztahuke genetic\im polymorfisRes.41,1976,s.321-332.
mrimjedastod6nanedostatednou
velikostianalyzovand
skupiny. t3l Fenech,M., Morley,A. A.: Measurementof micronucleiin lynphocytes.
prb
pfin65i
Rozsdhlej5i
analyza
odKirsch-Volders
646
osob
Mutat.Res.147.1985.s.29-36.
[43]
informacio signifikantnd
nii5i hladindmikrojaderpro GSTTL t4] Thtes,A. D., vanWelie,M. T, Ploem,J. S.:Thepresentstateof the automatedmicronucleustest for lymphocytes.Int. J. Radiat.Biol. 58, 1990,
negativni
variantu,demuiodpovid6
i n65qfsledekZavlznamnl
s.813-825.
pr6cejemoi,n6povaZovat
zji5tdniplynouciz citovan6
n6rustproCastelain,P, van Hummelen,P, Deleener,
A., Kirsch-Volders,
M,: Auto.
tsl
genotypu
tektivnihofdinkuuveden6ho
svdkem.
mateddetectionof cytochalasin-B
blockedbinucleatedlymphocytesfor
Jednimz moZnfchmechanismri
negativniho
vlivuasthmabronMutagenesis
scoringmicronuclei.
8, 1993,s.285-293.
chialena genetic\fmateri6la souvisejici
vy55ifrekvencimikro- t6l Verhaegen,
E,Vral,A., Seunfens,
N. W, deRidder,L.,ThieJ.,Schipper,
jaderu astmatikfimfiZeblit oxidadnipo5kozeni.
\Znik a rozvoj
rens,H.: Scoringof radiation-induced
micronucleiin cytokinesis-blocked
humanIymphocytes
by automatedimageanalysis.Qtometry 17, 1994,
je rizcespjatsezdndtliqfmiprocesy,
astmatu
kter6souvisisvy55i
s.719-727.
produkciROS [44]. V ndkolikastudiichbyly pozorov6ny
vy55i hladinymarkenioxidadnihostresu,konkrdtnd8-isoprosta- l7l Bocker,W, Muller,W U., Streffer,C.:Imageprocessingalgorithmsfor the
automatedmicronucleusassayin binucleatedhumanlyrnphosytes.
Cynu a malondialdehydu
v kondenz6tu
vydechovandho
vzduchu
tometry19,1995,s.283-294.
[45-471, nebokarbonyloqichskupinproteinfive sputu[48]. t81 Bocker,W, Streffer,C.,Muller,W U.,Yu,C.:Automatedscoringof microVjin6 studiinebylyprokAzinyzvy(en1
koncentrace
8-isoprostanucleiin binucleated
humanlyrnphorytes.
Int. J. Radiat.Biol.70,1996,
nu ve sputuu ddti a dospdly?ch
s mimouformouastmatu[49].
s.529-537.
A.: NewdevelopT, Varga,D., t orch,T, Plesch,
Autoii uzaviraji,Letentobiomarkernenidostatednd
citliqi, aby t9] Schunck,C.,Johannes,
ments
in
cytogenetic
imaging:
unattended
scoring
of dicenfic
automated
zachyrtilzmdnyoxidadnihostavuu mim6ho astrnatu.V dalSi,
gel electrophoresis,
micronuclei,
and
fluoreschromosomes,
single
cell
rozsdhl€
studii(N:589) byloprov6ddno
mdfeni8-isoprostanu
Res.lM,2004, s.383-389.
cencesignals.
Cltogenet.
Genome
a karbonylov.ichskupinproteinuv krevni plazmdmladychlidi
[10] Varga, D., Johannes,T, Jainta,S., Schuster,S., Schwaz-Boeger,
u v5echsubjektri
detegovateln6,
[50].Adkolibylyobabiomarkery
U., Kiechle,M., htino Garcia,B., Vogel,W: An automatedscoring
autofineprokAzalivztah
mezioxidadnimpo5kozenim
a astmaprocedurefor the micronucleustest by imageanalysis.Mutagenesis19,
tem.Tomutoneddvnopublikovan6mu
zavdruodpovidajii na5e
20M,s.391-397.
Tab.8: Multivari6tni
logistick5
regiese
vlivusledovanfch
velitinna astmatick6
d6ti
v porovn6ni
s kontrolniskupinou
- 48-
L.:Automatedimageanalysis
[11] Maes,A,, Hond,E. D.,Verschaeve,
of m!
V, Rossner,
P, Jr.,Dostal,M.,Topinka,
[30] Svecova,
J.,Solansky,
L, Sram,R.
cronuclei
in binucleated
humanb'rnphocytes.
MicroscopyandAnalysis
21,
J.: UrinaryS-oxodeoxyguanosine
levelsin childrenexposedto air pollut2007,s.7-9.
-43.
ants.Mutat.Res.662,2009,s.37
B.,Faiss,T,Vogel,W,
[12] Varga,D.,Michel,l.,htino-Garcia,
MaietC.:Radio- l31l hxp://www.chmi.cz/wco,/isko/tab_roc/2008_enVcze/pollution_weniew/
sensitMtydetected
bythemicronucleus
testisnotgenerally
increased
in spo_
weruiew-BaP_TOBAp_S12225.html
radicprostatecancerpatients.
Cytogenet.
GenomeRes.
111,2005.s.41_45. [32] Langone,
J.J.,vanVunakis,H.: Radioimmunoassay
of nicotine,cotinine,
J.,Maier,C.,Jainta,S.,Hoehne,M., htino-Garcia,B.,
[13] Varga,D., Hoegel,
andgamma-(3-pyridyl)-gamma-oxo-N-methylbutyramine.
MethodsEn_
Michel,L, Schwaz-Boeger,
U., Kiechle,M., Kreienberg,
R., Vogel,W:
rymol.84, 1982,s. 628- M0.
On the differenceof micronucleusfrequenciesin peripheralblood\mJ.W, Bryant,C.C.,Bashor,
[33] Driskell,W J.,Neese,
M. M.:Measurement
of
phocytes
betweenbreastcancerpatientsandcontrols.Mutagenesis
21,
vitaminAandvitaminE in humanserumbyhighperformance
liquidchro_
2006,s.313-320.
matography.
J.Chromatogr.231,1982,s.439-444.
A., Spatova,
M.,Rossner,
P, Solansky
I., Sram,R.J.:Theim[14] Rossnerova,
K.,Kita,M.:High-performanceliquid
[34] Tanishima,
chromatographicdeterpactof air pollutionon the levelsof micronucleimeasuredby automated
minationof plasmaascorbic
in relationship
to heathcare.J. Chromatogr.
imageanalysis.
Mutat.Res.669,2009,s.42- 4T.
613,1993,s.275-280.
A., Sp6tov6,
M., Rtissneq
P, Solans\f,I., Sr6m,R. J.:Frek- [35] Buss,H., Chan,T P, Sluis,K. B., Domigan,N. M., Winterboum,
[15] Rdssnerovri,
C. C.:
vencemikrojadermdien6s r,yuiitim automatick6obrazov€analluyjako
Proteincarbonylmeasurement
by a sensitiveELISAmethod.FreeRadical
biomarkerznedi5tdni
ovzdu5i.
Ochrana
o';zdu5i
d.5-6 ,2009,s.37_41.
Biol.Med.23.1997.s.361-366.
A., Spatova,
M.,Schunck,
C.,Sram,R.J.:Automated
[16] Rossnerova,
scoring [36] Vn, B., Whyatt,R. M., Perera,Fl p, Randall,M. C.,Jedrichowski,
W.
of lynphocytemicronucleiby the MetaSystems
Metaferimagecytometry
Cooper,Y, Santella,R. M.: Determinationof 8-hydroxydeoxyguanosine
system
anditsapplication
in studies
of humanmutagen
sensitMtyand
bio_
by immunoaffinity
chromatographymonoclonal
antibody-based
ELISA.
dosimetry
of genotoxin
exposure.
Mutagenesis
2010,v tisku.
FreeRadicalBiol.Med.18,1995,s.1023-1032.
H.,Vral,A.:Themiuonucleus
assay
in radiationaccidents.
[17] Thierens,
Ann.
P,Jr.,Svecova,
V, Milcova,A., Lnenickova,
[37] Rossner,
2., Solansky,
I., SanIst.Super.Sanita45,2009,s.260-264.
tella,R. M., Sram,R. J.:Oxidativeandnitrosative
stressmarkersin bus
J.,Romm,H.,Oestreicher,
[18] Willems,P,August,L.,Slabbert,
U.,Thierens,
drivers.Mutat.Res.617,2007,s.
23-32.
H.,Vral.A.: Automated
micronucleus
(MN) scoringfor population
triage [38] Rossner,
P,Jr.,Milcova,
A., Libalova,
H.,Novakova,
2., Topinka,
J.,Balasin caseoflargescaleradiationevents.
Int.J.Radiat.Bio1.86,2010,2-ll.
cak,I., Sram,R.J.:Biomarkersof exposure
to tobaccosmokeandenviron_
I., hpine, A., Plas,G.,Roesems,
S.,Vandetoock.K.. Moreno[19] Decordier,
mentalpollutants
in mothersandtheirtransplacental
transferto
thefoetus.
hlomo, J,,Cemeli,E.,Anderson,D., Fucic,A., Marcos,R., Soussaline,
hrt II. Oxidative
damage.
Mutat.Res.669,2009,s.20_26.
E, Kirsch-Volders,
M.: Automatedimageanalysisof cytokinesis-blocked [39] Duan,H.,Leng,S.,hn,2., Dai,y, Niu,y, Huang,Ch.,Bin,p,Wang,y,
micronuclei:
an adaptedprotocolanda validatedscoringprocedure
for
Liu, Q., Chen,W,Zheng,Y.:Biomarkers
measured
by cvtokinesis_block
biomonitoring.
Mutagenesis
24,2009,s.85-93.
micronucleus
cytomeassayfor evaluating
geneticdam;gesinducedby
S.,Neri,M., Lando,C.,Ceppi,M., Lin,y p, Chang,W p, Hol[20] Bonassi,
polycyclicaromatichydrocarbons.
Mutat.Res.677,2009,s. 93_99.
land,N., Kirsch-Volders,
M., Zeiger,E., Fenech,
M.: Effectof smoking [40] vanLeeuwen,
D. M.,Gottschalk,
R.W H.,Schoeters,
G.,vanLarebeke,
N.
habitonthefrequencyof micronucleiin humanlynphocytes:resultsfrom
A., Nelen,V, Baeyens,
E,Kleinjans,
J.C.S.,vanDelft,J.H. M.:Thanscrip_
theHumanMicroNucleus
project.Mutat.Res.543,2003,155-166.
tomeanalysisin peripheralbloodof humansexposuredto environmental
S.,Fenech,
M.,lando,C.,Lin,Y P,Ceppi,M.,Chang,Wp, Hol[21] Bonassi,
carcinogens:
A promisingnewbiomarkerin environmental
healthstudies.
land,N., Kirsch-Volders,
M.,Zeiger,E.,Ban,S.,Barale,R.,Bigatti,M. p,
Environ.HealthPerspect.
116,2008,s.1519-1525.
Bolognesi,
C,,Jia,C.,Di Giorgio,M.,Ferguson,
L. R.,Fucic,A.,Lima,O.G., [41] Ltoalovd,
H., Dost6l,M.,Topinka,J.,Sr6m,R.J.:VlivZivotniho
prostiedi
Hrelia,P,Krishnaja,A.
P,[ee,T K.,Migliore,L.,Mikhalevich,
L.,Mirkova,
nalznikar4iuoj
astmau ddti.33.pracolnidnyCesk6
aslovensk6
spolednosti
E.,Mosesso,
P, Muller,W U.,Odagiri,y, Scarffi,M. R.,Szabova,
E.,Vopromutagenezi
zewimprostiedim,
fistniprezentace,
Bmo,2010.
robtsova,
I.,Vral,A.,Zijno,A.: HumanMicroNucleus
projecfintemational [42) httpl/www.knovryouraffirhealth.eu/spipphp?rubriqn3#faaS
databasecomparisonfor resultswith the gtohnesis-blockmicronucleus
M., Mateuca,
R.A., Roelants,
[43] Kirsch-Volders,
M., temp, A., Zeiger,E.,
assayin
humanlymphocytes.
Environ.Mol.Mutagen.
37,2001,s.31,_45.
Bonassi,
S.,Holland,N., Chang,W p, Aka,p V, DeBoeck,
M.,Godderis,
p, Cerna,M., Mrackova,
J.,Miskova,I., Rossner,
[22] Binkova,B.,[.ewtas,
G.,
L.,Haufroid,V,lshikawa,
H.,Laffon,B.,Marcos,R.,Migliore,L.,Norppa,
Peterkova,
K., Mumford,J.,Meyer,S.,Sram,R.J.:Biomarkers
Stbdiesin
H.,Teixeira,
J.P, Zljno,A.,Fenech,
M.:Theeffects
of GSTM1andGSTT1
NorthemBohemia.Environ.Healthkrspect.
104,1996,s.591-597.
.
poll'rnorphismson micronucleusfrequenciesin human ll,rnphorytesin
R., Bartonova,
A., Boogaard,
P J.,Dusinska,
[23] Smolders,
M., Koppen,G.,
vivo.CancerEpidemiol.Biomark.prev.1,5,2006,s.703g-1042.
Merlo,E, Sram,R.J.,Vineis,P, Schoeters,
G.:Theuseof biomarkers
for
of asthma.Clin. Exp.Ailergy3g, 200g,
[44] Holgate,S. T: Pathogenesis
risk assessmenfReportingfrom the IN'XARESE/ENVIRISK
Workshop
s. 872-897.
in Prague.
Int.J.Hyg.Environ.Health21,2010,s.395_400.
[45] CaballeroBalarna,S., MartorellAragones,A., CerdaMia J. C., Remirez,
[24] Sram,R. J.,Beskid,O., Binkova,8., Chvatalova,
L, Lnenickova.2..
MilJ.B.,Navarrolvanez,R.,NavarroSoriano,A.,
FelixToledo,
R.,Escribano
cova,A., Solansky,
I.,Tulupova,
E.,Bavorova,
H.,Ocadlikova,
D.,Farmer,
Montaner,A.:LeukotrieneM and8-isoprostane
in exhaledbreathcondenP B.:Chromosomal
aberrations
in environmentally
population
exposed
in
sateof childrenwith episodicandpersistentasthma.J. Investig.Allergol.
relationto metabolicandDNA repairgenespolymorphisms.
Mutat. Res.
Clin.Immunol.20,2010,s.237-243.
620.2007.s.22-33.
B., Bames,J.,Reddy,R.:g{sopros[46] Hasan,R.A., Thomas,J.,Davidson,
B.,Topinka,
J.,Sotansky,
L,Chvatalova,
I.,Lnenickova,
[25] Novotna,
2., Sram,
tanein the exhaledbreathcondensate
of childrenhospitalizedfor status
R. J.:Impactof air pollutionandgenotypevariabilityon DNA damagein
asthmaticus.
kdiatr. Crit.CareMed.2010,vtisku.
policemen.ToxicoLktt
Prague
772,2007,s.
37-47.
[47] Dut,R.,Dizdar,E.A.,Birben,E.,Sackesen,
C.,Soyer,
O.U.,Besler,
T, Ka_
J.,Rybar,R.,Prenosilova
[26] Rubes,
Solansky,
I.,
,P.,YeznkZ.,Chvatalova,l.,
layci,O.: Oxidativestressandits determinantsin the airwaysof children
Sram,R. J.:Geneticpolyrnorphisms
influencethe susceptibility
of mento
withasthma.
Allergy63,2008,s.1605- 1609.
spermDNA damage
associated
withexposure
to airpollution.Mutat.Res. [48] Nagai,K.,Betsuyaku,T,
Konno,S.,Ito,y, Nasuhara,y,Hizawa,N.,Kon683,2010,s.9- 15.
do,T, Nishimura,M.: Diversityof proteincarbonylation
in allergicainvay
G.,Bonassi,
S.,Botta,A., Baan,R. A., Orsiere,T: Genetic
l27l larmarcovai,
inflammation.
FreeRadicalRes.42, 2008.s.921-929.
polymorphismsand micronucleusformation:A reviewof the literafure.
y, Makela,M.,Haahtela,
N.,Rytila,P,Obase,
[49] tnuhelainen,
T, Kinnula,V
Mutat.Res.658.2008.s.215-233.
L., klkonen, A.: Thevalueof sputum8-isoprostane
in detectingoxidative
[28] Cooke,M. S.,Evans,M. D., Dizdaroglu,
M., Lunec,J.:OxidativeDNA
stress
in mildasthma.
J.Asthma45
,2008,s.749-154.
damage:mechanisms,
mutation,and disease.EASEBJ. 17. 2003. [50] Garcia-LarsenV,
p, Rona,R.J.:
Chinn,S.,Rodrigo,R.,Amigo,H.,Bustos,
s.1195-1214.
Relationshipbetweenoidative stress-related
biomarkersandantioxidant
L. M., Hocevar,
B. A.: Oxidativestressand
[29] IGuning,J. E., Kamendulis,
statuswith asthmaand atopyin youngadults:a population-based
study.
oxidative
damage
in carcinogenesis.
Toxicol.
hthol. 38,2010,s.96- 109.
Clin.Exp.Allergy39,2009,s.379-386.
- 49 -