Ústav dědičných metabolických poruch VFN

Transkript

Metabolická příručka
2011
Laboratorní příručka
Přehled laboratorních vyšetření a doporučení
pro diagnostiku dědičných metabolických poruch
Indikace vyšetření
Interpretace výsledků vyšetření
Ústav dědičných metabolických poruch
VFN a 1. LF UK
Ke Karlovu 2, 128 08 Praha 2
Autoři
Hlavní editoři:
prim. MUDr. Sylvie Šťastná, CSc., MBA
RNDr. Václava Mašková
prim. Ing. Karolína Pešková
Editoři:
Ing. Petr Chrastina
MUDr. Eva Košťálová
RNDr. Jana Ledvinová, CSc.
RNDr. Lenka Dvořáková, CSc.
Spolupracovníci:
Mgr. Josef Bártl
Mgr. Zdeněk Čánský
prof. MUDr. Milan Elleder, DrSc.
RNDr. Petr Hornik, Ph.D.
MUDr. Eva Hrubá
MUDr. Helena Jahnová
doc. MUDr. Viktor Koţich, CSc.
Mgr. Lucia Krouská
Ing. Helena Poupětová
MUDr. Ivan Šebesta, CSc.
Mgr.Hana Vlášková
Biochemická laboratoř ÚDMP je akreditovaná podle normy ČSN ISO 15189:2007.
Metabolická příručka 2011 je laboratorní příručka připravená v souladu s normou ČSN ISO
15189:2007. Byla vydána jako účelová publikace Všeobecné fakultní nemocnice v Praze.
Zavedení systému managementu dle ISO 15189:2007 včetně tisku laboratorní příručky bylo
spolufinancováno Norským finančním mechanismem a Všeobecnou fakultní nemocnicí v Praze v
rámci projektu Metabolické diagnostické centrum.
Strana 2 (celkem 77)
1. Úvod
Váţené kolegyně a kolegové,
Metabolická příručka 2011 je laboratorní příručka, která je věnována všem ošetřujícím lékařům a
odběrovým sestrám, kteří spolupracují s Ústavem dědičných metabolických poruch VFN a 1. LF
UK (dále ÚDMP) při diagnostice dědičných metabolických poruch (dále DMP).
Příručka byla připravena v souladu s normou ČSN EN ISO 15189:2007 a byla vydána v rámci
projektu Metabolické diagnostické centrum, který je spolufinancován Norským finančním
mechanismem a Všeobecnou fakultní nemocnicí v Praze.
Metabolická příručka 2011 poskytuje odborné zdravotnické veřejnosti především aktuální přehled
diagnostických vyšetření prováděných v ÚDMP a základní informace o indikaci vyšetření a
interpretaci získaných výsledků.
Příručka dále obsahuje informace týkající se DMP (symptomy klinické i laboratorní, dědičnost a
incidence, obecné principy léčby, genetické poradenství a prenatální diagnostika) a uvádí základní
přehled doporučené literatury a internetových odkazů.
ÚDMP poskytuje diferenciálně diagnostickou expertízu z hlediska DMP v rámci laboratorního
vyšetření zaslaného biologického materiálu nebo během ambulantního vyšetření v ÚDMP, a
specializovanou péči o pacienty s DMP včetně monitorování kompenzace, léčby, psychologické
péče, genetického poradenství a prenatální diagnostiky.
Další informace jsou dostupné na www.udmp.cz.
Vaše připomínky a návrhy uvítáme na e-mailové adrese [email protected] nebo [email protected].
Sylvie Šťastná
Praha, březen 2011
2. Obsah
1. Úvod ................................................................................................................................................. 3
2. Obsah ............................................................................................................................................... 4
3. Zkratky ............................................................................................................................................. 6
4. Ústav dědičných metabolických poruch VFN a 1. LF UK .............................................................. 8
5. Dědičné metabolické poruchy – jejich charakteristika, dědičnost, incidence a symptomy ........... 12
5.1 Charakteristika DMP................................................................................................................ 12
5.3 Incidence DMP ........................................................................................................................ 13
5.4 Akutní klinické symptomy u DMP .......................................................................................... 13
5.6 Klinické symptomy u DMP ..................................................................................................... 14
5.7 Biochemické symptomy u DMP .............................................................................................. 15
5.8 Hematologické symptomy u DMP ........................................................................................... 16
6. Laboratorní diagnostika DMP ........................................................................................................ 17
7. Manuál pro odběr primárního vzorku ............................................................................................ 18
7.1 Poţadavek na vyšetření DMP - ţádanka .................................................................................. 18
7.2 Dodatečná vyšetření ................................................................................................................. 18
7.3 Materiál k laboratornímu vyšetření v ÚDMP .......................................................................... 19
7.4 Skladování vzorků.................................................................................................................... 20
8. Preanalytické procesy v Biochemické laboratoři ........................................................................... 21
8.1 Kritéria pro odmítnutí vzorku nebo ţádanky ........................................................................... 21
8.2 Vyšetřování ve smluvních a spolupracujících laboratořích ..................................................... 21
9. Vydávání výsledků a komunikace s Biochemickou laboratoří ...................................................... 22
9.1 Hlášení výsledků v kritických intervalech ............................................................................... 22
9.2 Informace o vydávání výsledků ............................................................................................... 22
9.3 Změny výsledků a nálezů ......................................................................................................... 23
9.4 Interval od dodání vzorku k vydání výsledku .......................................................................... 23
9.5 Statimové vyšetření .................................................................................................................. 24
9.6 Standardní vyšetření a konzultační činnost ............................................................................. 25
9.7 Řešení stíţností a reklamací ..................................................................................................... 27
10. Přehled laboratorních vyšetření ................................................................................................... 28
10.1 Metabolické vyšetření na úrovni metabolitů .......................................................................... 28
10.2 Metabolické vyšetření na úrovni enzymů .............................................................................. 29
10.3 Metabolické vyšetření na úrovni DNA .................................................................................. 33
10.4 Metabolické vyšetření na úrovni tkání ................................................................................... 36
10.5 Novorozenecký screening DMP ............................................................................................ 38
10.6 Postmortální vyšetření DMP .................................................................................................. 38
11. Léčba DMP .................................................................................................................................. 39
12. Genetické poradenství a prenatální diagnostika u DMP .............................................................. 40
13. Zdroje odborných informací ........................................................................................................ 41
14. Abecední seznam laboratorních vyšetření metabolitů prováděných v ÚDMP ............................ 42
Aminokyseliny (AMK) kvantitativně v séru/plazmě ..................................................................... 42
Aminokyseliny (AMK) kvantitativně v moči ................................................................................ 43
Aminokyseliny (AMK) kvantitativně v likvoru............................................................................. 46
Biotinidáza kvalitativně ................................................................................................................. 46
Biotinidáza kvantitativně ............................................................................................................... 47
Disulfidy......................................................................................................................................... 47
Fenylalanin a tyrosin ...................................................................................................................... 48
Galaktitol ........................................................................................................................................ 48
Galaktóza/galaktóza-1-fosfát ......................................................................................................... 49
Globotriaosylceramid ..................................................................................................................... 49
Glykogen ........................................................................................................................................ 50
Guanidinoacetát (GAA), kreatin (CR) a kreatinin (kreat.) ............................................................ 50
Homocitrulin .................................................................................................................................. 51
Homocystein celkový..................................................................................................................... 52
3-Hydroxybutyrát ........................................................................................................................... 53
Karnitin volný, celkový, acylovaný, poměr acylovaný/volný karnitin v séru ............................... 54
Karnitin volný, celkový, acylovaný, poměr acylovaný/volný karnitin v moči .............................. 55
-Ketokyseliny .............................................................................................................................. 56
Kreatinin v séru, plazmě ................................................................................................................ 56
Kreatinin v moči............................................................................................................................. 57
Kyselina fenylpyrohroznová .......................................................................................................... 58
Kyselina metylmalonová................................................................................................................ 58
Kyselina močová ............................................................................................................................ 58
Kyselina močová - Index podle Kaufmana (IK) ............................................................................ 60
Kyselina močová - Index podle Stapletona (IS) ............................................................................ 60
Kyselina močová - Exkreční frakce kyseliny močové EFKM ......................................................... 61
Kyselina orotová ............................................................................................................................ 61
Kyselina sialová ............................................................................................................................. 62
Laktát a pyruvát ............................................................................................................................. 63
Mukopolysacharidy semikvantitativně (glykosaminoglykany) ..................................................... 64
Mukopolysacharidy kvantitativně (glykosaminoglykany) ............................................................. 64
Mukopolysacharidy kvalitativně – elektroforéza (glykosaminoglykany) ..................................... 65
Oligosacharidy, sialyloligosacharidy ............................................................................................. 66
Organické kyseliny v moči ............................................................................................................ 67
Organické kyseliny v séru/plazmě ................................................................................................. 67
Pteriny ............................................................................................................................................ 68
Puriny a pyrimidiny ....................................................................................................................... 68
Redukující látky ............................................................................................................................. 69
Sacharidy........................................................................................................................................ 70
Sfingolipidy.................................................................................................................................... 70
Siřičitany ........................................................................................................................................ 70
Sukcinylaceton ............................................................................................................................... 71
Sukcinylaminoimidazolkarboxamidribosid (SAICAr) .................................................................. 71
Sulfatidy ......................................................................................................................................... 72
Tandemová hmotnostní spektrometrie (MS/MS) aminokyseliny a acylkarnitiny ......................... 72
Thiosírany kvalitativně .................................................................................................................. 73
Thiosírany kvantitativně ............................................................................................................... 73
Velmi dlouhé mastné kyseliny (VLCFA) ...................................................................................... 74
15. Metabolické vyšetření pro samoplátce ......................................................................................... 75
3. Zkratky
AC
ADA
ADSL
AFLP
AGAT
AMK
AMP
APRT
BTD
cbl
CBS
cDNA
CADASIL
CK
CoA
CPT
CR
CRN
CRTR
CS
CT
DHPR
DMP
DNA
DS
EDTA
EFKM
ery
FC
fib
FJHN
GAA
GABA
GAG
GALT
GAMT
GC
GC/MS
gDNA
GSD
HDL
HELLP
HHH
HPA
HPLC
HPTLC
HPRT
HS
ch
acylkarnitin
adenosyldeamináza
adenylosukcinátlyáza
acute fatty liver of pregnancy
argininglycinamidinotransferáza
aminokyselina
adenosinmonofosfát
adeninosforibosyltransferáza
biotinidáza
kobalamin
cystathionin -syntáza
kódující DNA
cerebral autosomal dominant arteriopathy with subcortical infarcts and
leukoencephalopathy
kreatinkináza
koenzym A
karnitinpalmitoyltransferáza
kreatin
kreatinin
přenašeč kreatinu
chondroitinsulfát
počítačová tomografie
dihydropteridinreduktáza
dědičné metabolické poruchy
deoxyribonukleová kyselina
dermatansulfát
etylendiamintetraacetát
exkreční frakce kyseliny močové
erytrocyty
volný karnitin
fibroblasty
familiární juvenilní hyperurikemická nefropatie
guanidinoacetát
-aminobutyrát
glykosaminoglykany
galaktóza-1-fosfát uridyltransferáza
guanidinoacetátmetyltransferáza
plynová chromatografie
plynová chromatografie/hmotnostní spektrometrie
genomická DNA
glykogenóza
lipoproteiny s vysokou denzitou
hemolysis, elevated liver enzyme levels, low platelet count
hyperamonémie, hyperornithinémie, homocitrulinurie
hyperfenylalaninémie
vysokoúčinná kapalinová chromatografie
vysokoúčinná tenkovrstevná chromatografie
hypoxantinfosforibosyltransferáza
heparansulfát
odběr krve do kyseliny chloristé
IgD
IK
IS
ISSD
JIRP
k
kp
l
leu
1. LF UK
LCHAD
LPI
lym
m
MCAD
MPS
MR
MS/MS
MTHFR
NAD
NADH
NCL
NK
OTC
OpenLIMS
p
PABA
PCR
Phe
PKU
PNP
PRPPs
RDS
RT
s
SAICAr
SCID
SIDS
t
TC
TG
TLC
TRIS
Tyr
ÚDMP
UMPS
VFN
VLCFA
imunoglobulin D
index podle Kaufmana
index podle Stapletona
infantilní porucha se střádáním volné kyseliny sialové
jednotka intenzívní a resuscitační péče
krev
krevní papírek, suchá krevní kapka
likvor (mozkomíšní mok)
leukocyty
1. lékařská fakulta Univerzity Karlovy v Praze
3-hydroxyacyl-CoA dehydrogenáza mastných kyselin s dlouhým řetězcem
intolerance bílkovin s lysinurií
lymfocyty
moč
acyl-CoA dehydrogenáza mastných kyselin se středně dlouhým řetězcem
mukopolysacharidóza; mukopolysacharidy
magnetická rezonance
tandemová hmotnostní spektrometrie
metylentetrahydrofolátreduktáza
nikotinamidadenindinukleotid
redukovaný NAD
neuronální ceroidlipofuscinóza
nesráţlivá krev
ornithintranskarbamoyláza
Laboratorní informační a manaţerský systém Stapro s.r.o.
plazma
kyselina paraaminobenzoová
polymerázová řetězová reakce
fenylalanin
fenylketonurie
purinnukleosidfosforyláza
fosforibosylpyrofosfátsyntetáza
respiratory distress syndrome
pokojová teplota
sérum
sukcinylaminoimidazolkarboxamidribotid
severe combined immunodeficiency
sudden infant death syndrome
tkáně
celkový karnitin
triacylglyceridy
tenkovrstevná hromatografie
trihydroxymetylaminometan
tyrosin
Ústav dědičných metabolických poruch VFN a 1. LF UK
uridinmonofosfátsyntáza
Všeobecná fakultní nemocnice v Praze
velmi dlouhé mastné kyseliny
4. Ústav dědičných metabolických poruch VFN a 1. LF UK
Tabulka 1: Ústav dědičných metabolických poruch
Název pracoviště
Ústav dědičných metabolických poruch VFN a 1. LF UK
Adresa pracoviště
128 08 Praha 2, Ke Karlovu 2
Doc. MUDr. Viktor Koţich, CSc.
Přednosta
[email protected]
TF 224 967 679
MUDr. Sylvie Šťastná, CSc., MBA
Primář
[email protected]
klinického úseku
TF 224 967 710
Ing. Karolína Pešková
Primář
[email protected]
laboratorního úseku
TF 224 967 225
p. Petra Vetešníková
Sekretariát
[email protected]
TF 224 967 710
RNDr. Václava Mašková
Manaţer kvality
[email protected]
Biochemické laboratoře
TF 224 967 647
Eva Klímová
Vedoucí laborantka
[email protected]
TF 224 967 712
Terezie Paterová
Staniční sestra
[email protected]
ambulance
TF 224 967 670
Lékař Konzultace
TF 224 967 710 lékařská konzultace v běţnou pracovní dobu
TF 725 739 992 lékařská konzultace pro statim metabolické
Lékař Pohotovost
vyšetření mimo běţnou pracovní dobu
TF 224 967 670
Ambulance
dohoda o termínu ambulantního vyšetření
budova A2 přízemí
TF 224 967 707
Centrální příjem
příjem materiálu pro všechny laboratoře
materiálu
TF 224 967 109
Laboratoř pro
konzultace o novorozeneckém screeningu
novorozenecký
[email protected]
screening DMP
TF 224 967 710
konzultace o moţnosti vyšetření, informace o výsledcích
Biochemická laboratoř
vyšetření metabolitů a vybraných enzymatických vyšetření,
lékařská konzultace
budova C3 2. patro
TF 224 967 032
Enzymologická
laboratoř
enzymatických vyšetření lysosomálních chorob
budova D 1. patro
Laboratoř DNA
TF 224 967 701 konzultace o moţnosti vyšetření
diagnostiky
Laboratoř patologie
TF 224 967 690
DMP
Laboratoř tkáňových
kultur
Fax
E-mail
WWW stránka
Provozní doba
histologického, histochemického, imunohistochemického a
elektronmikroskopického vyšetření tkání pro diagnostiku DMP
TF 224 967 710
konzultace o zaloţení nebo předání tkáňové kultury
224 967 081
[email protected] – sekretariát
[email protected] – novorozenecký screening
www.udmp.cz
Ambulance a Centrální příjem materiálu:
pondělí-středa 7:30-16:00, čtvrtek 7:30-17:00, pátek 7:30-15:00
V případě statimových vyšetření poskytuje Biochemická
laboratoř po předchozí telefonické domluvě další rozšířený
provoz.
Ústav dědičných metabolických poruch VFN a 1. LF UK v Praze (ÚDMP)
ÚDMP je společné pracoviště Všeobecné fakultní nemocnice v Praze a 1. lékařské fakulty
Univerzity Karlovy v Praze.
Pracoviště se věnuje problematice dědičných metabolických poruch (DMP) - diagnostice,
monitorování kompenzace, léčbě včetně dietního poradenství a psychologické péče, genetickému
poradenství, prenatální diagnostice, výzkumu a vývoji a výuce.
ÚDMP poskytuje diferenciálně diagnostickou expertízu z hlediska DMP.
1. Pracoviště Všeobecné fakultní nemocnice v Praze
Základem činnosti zdravotnického pracoviště je laboratorní diagnostika DMP na různých úrovních
(metabolit, enzym/protein, tkáň/buňka, gen) v Biochemické laboratoři, Enzymologické laboratoři,
Laboratoři DNA diagnostiky a Laboratoři patologie DMP tak, aby byla DMP jednoznačně
identifikována a bylo moţno v případě potřeby zajistit prenatální diagnostiku.
Ambulance poskytuje diferenciálně diagnostickou expertízu u pacientů s podezřením na DMP a
specializovanou péči o pacienty s DMP včetně léčby, psychologické péče, genetického poradenství
a prenatální diagnostiky.
Veškeré aktivity pracoviště směřují k rozšiřování a zkvalitňování diagnostiky DMP a k zajištění
specializované péče o diagnostikované pacienty a jejich rodiny.
Pracovníci se podílejí na celoţivotním vzdělávání lékařů a jiných zdravotnických pracovníků.
Biochemická laboratoř provádí laboratorní vyšetření na úrovni metabolitů a enzymů.
V rámci selektivního screeningu (tj. u pacientů s příznaky, které vedou k podezření na DMP) je
moţno diagnostikovat cca 120 DMP. V laboratoři je zavedeno 48 kvalitativních, kvantitativních a
profilových vyšetření metabolitů, stanovujeme aktivitu 9 enzymů pro diagnostiku deficitu
biotinidázy, klasické galaktosémie, jaterních glykogenóz a poruch metabolismu purinů.
V rámci populačního screeningu laboratoř provádí od 1.10.2009 novorozenecký screening 10
vybraných DMP (kromě hyperfenylalaninémie/fenylketonurie téţ dalších 9 aminoacidopatií,
organických acidurií a poruch oxidace mastných kyselin).
Provádíme téţ screening maternální hyperfenylalaninemie u těhotných.
Kaţdoročně rozšiřujeme spektrum prováděných laboratorních metod.
V laboratoři je zaveden laboratorní informační systém OpenLIMS.
Zavedli jsme pohotovostní služby (1 lékař, 1 analytik-biochemik, 2 laborantky), kdy poskytujeme
moţnost telefonické konzultace s lékařem a provádíme 6 statimových vyšetření (aminokyseliny v
séru, organické kyseliny v moči, aminokyseliny a acylkarnitiny tandemovou hmotnostní
spektrometrií pro diagnostiku vybraných aminoacidopatií, poruch oxidace mastných kyselin a
organických acidurií v suché krevní kapce, galaktóza a galaktóza-1-fosfát v suché krevní kapce,
galaktitol v moči, kyselina orotová v moči). Je tak zajištěno metabolické vyšetření 24 hodin denně
po celý rok pro diagnostiku DMP s akutním průběhem a pro monitorování jiţ diagnostikovaných
pacientů při akutní dekompenzaci. Viz kapitola 9.5 Statimové vyšetření.
Pracoviště je jedním z 5 center, které organizuje systém externí kontroly kvality (ERNDIM
Diagnostic Proficiency Testing, tj. testování diagnostické zdatnosti) pro biochemicko-genetické
laboratoře Evropy a Asie.
Pracoviště se s vysokou úspěšností účastní 7 systémů externí kontroly kvality (1x český - SEKK a
6x zahraniční systémy - ERNDIM, UK NEQAS, INSTAND, MPS QAS, CDC, DGKL-RfB), které
pokrývají všechny základní oblasti diagnostiky DMP.
Ročně se jedná o 118 kontrolních vyšetření.
Biochemická laboratoř je vedena v Registru klinických laboratoří NASKL.
Biochemická laboratoř je akreditována Českým institutem pro akreditaci podle normy ČSN EN
ISO 15189:2007 - Zdravotnické laboratoře – Zvláštní poţadavky na kvalitu a způsobilost.
Zavedení systému managementu podle ISO 15189 bylo spolufinancováno Norským finančním
mechanismem a VFN v rámci projektu Metabolické diagnostické centrum.
Biochemická laboratoř ÚDMP VFN byla/je spoluřešitelem Výzkumného záměru MZ ČR
Diagnostika a léčba geneticky podmíněných poruch I a II, řešitelem grantů IGA, Evropského
sociálního fondu a Norského finančního mechanismu.
Pro vzdělávací účely byl vydán překlad 2 knih:
Hoffman GF a kol.: Dědičné metabolické poruchy (Grada 2006)
Fernandes J a kol.: Diagnostika a léčba dědičných metabolických poruch (Triton 2008)
Enzymologická laboratoř
Laboratoř se specializuje na enzymatickou diagnostiku lysosomálních chorob pro diagnostiku
postnatální i prenatální. Na pracovišti je zavedeno 27 enzymatických metod, zátěţové testy
v buněčné kultuře koţních fibroblastů a screeningové enzymatické metody v suché kapce krve.
Laboratoř se od roku 2006 úspěšně zapojuje do systému externí kontroly kvality QAESGLD/ERNDIM.
Laboratoř DNA diagnostiky
Laboratoř provádí molekulárně genetickou diagnostiku vybraných DMP a jiných genetických
chorob. V současné době pracoviště můţe analyzovat více neţ 50 genů pro potřeby postnatální i
prenatální diagnostiky.
Laboratoř se od roku 2005 úspěšně účastní externí kontroly kvality, kterou pro evropské laboratoře
organizuje německá společnost DGKL-RfB.
Laboratoř patologie DMP
Laboratoř provádí histologická, histochemická, imunohistochemická a elektronmikroskopická
vyšetření tkání pro diagnostiku DMP.
Laboratoř tkáňových kultur
Laboratoř provádí dlouhodobou kultivaci koţních fibroblastů a zmrazení buněčných linií pro
potřeby postnatální i prenatální diagnostiky.
2. Pracoviště 1. lékařské fakulty Univerzity Karlovy
Pracoviště se věnuje zejména výzkumné činnosti v oblasti DMP a jiných genetických chorob.
Pracoviště tvoří 5 výzkumných laboratoří: Laboratoř genomiky a bioinformatiky, Laboratoř
biochemické genetiky, Laboratoř pokročilých mikroskopických technik a experimentálních
tkáňových kultur, Laboratoř modelových systémů a Laboratoř biologie a patologie oka.
Výsledky základního výzkumu mají přímý praktický výstup v podobě rozšiřování DNA
diagnostiky. Pracovníci se také podílejí na pregraduální a postgraduální výuce na 1. lékařské fakultě
UK, Vysoké škole chemicko-technologické a Přírodovědecké fakultě UK.
5. Dědičné metabolické poruchy – jejich charakteristika, dědičnost, incidence a
symptomy
5.1 Charakteristika DMP
Dědičné poruchy metabolismu (DMP) jsou skupinou několika set různých onemocnění, která mají
společné rysy:
Tabulka 2: Charakteristika DMP
Rys
Charakteristika
příčiny DMP
deficit enzymu, jeho aktivátoru, transportního proteinu, základní příčina je
na úrovni DNA
důsledky
hromadění substrátu a nedostatek produkt v příslušných metabolických
deficitu
cestách, coţ vede k systémovým nebo tkáňově specifickým projevům
onemocnění
dědičnost DMP nejčastěji autosomálně recesivní, vzácněji gonosomálně recesivní,
maternální nebo autosomálně dominantní
výskyt DMP
incidence jednotlivých DMP je nízká, ale celková incidence DMP je
relativně vysoká (1:1000* aţ 1:600**);
skutečná incidence je pravděpodobně ještě vyšší a řada pacientů tak
diagnóze DMP uniká**
věk
DMP jsou diagnostikovány hlavně v novorozeneckém a kojeneckém věku,
ale mohou se projevit v jakémkoliv věku
symptomy
DMP mohou mít symptomy postiţení jakéhokoliv orgánu či tkáně
DMP
průběh můţe být chronický, progresívní i akutní
diagnostika
probíhá na úrovni metabolitů, enzymů, DNA a tkání
DMP
léčba DMP
DMP jsou dobře léčitelné, omezeně léčitelné i neléčitelné
prenatální
je moţná, pokud byla u probanda stanovena přesná diagnóza;
diagnostika
provádí se vyšetřením metabolitů v plodové vodě, aktivity enzymu nebo
molekulárně genetickým vyšetřením v choriových klcích nebo
amniocytech
* Scriver, C.R., et al. (eds.): The Metabolic and Molecular Bases of Inherited Disease. 7th. Ed. New
York, McGraw-Hill 1995
** Hoffmann GF: Selective screening for inborn errors of metabolism-past, present and future Eur J
Pediatr. 1994;153(7 Suppl 1):S2-8
Tabulka 3: Rozdělení DMP dle patofyziologie
Skupina DMP
Charakteristika
Příklady
DMP s komplexními
hromadění
lysosomální poruchy
molekulami
komplexních molekul peroxisomální poruchy
v buněčném
poruchy glykosylace
kompartmentu
DMP intoxikačního
akumulace toxických aminoacidopatie
typu
substrátů před
organické acidurie
blokem;
intolerance cukrů
akutní nebo
progresívní
symptomy intoxikace
Léčba
převáţně
neléčitelné
enzymoterapie
léčba dietní a
eliminační
prevence
katabolismu
JIRP
poruchy energetického
metabolismu
glykogenózy
poruchy glykolýzy
poruchy glukoneogeneze
poruchy Krebsova cyklu
poruchy oxidace mastných kyselin
poruchy respiračního řetězce
poruchy produkce
nebo
utilizace energie
léčitelné aţ
neléčitelné
5.2 Dědičnost DMP
Tabulka 4: Dědičnost DMP
Dědičnost
Autosomálně recesivní
Zastoupení
90 %
X-vázaná
6%
Mitochondriální (maternální)
2%
Autosomálně dominantní
2%
Příklad DMP
fenylketonurie/hyperfenylalaninémie
z deficitu fenylalaninhydroxylázy
deficit ornithinkarbamoyltransferázy
adrenoleukodystrofie
poruchy energetického metabolismu
mitochondriálního původu
porfyrie
5.3 Incidence DMP
Tabulka 5: Incidence DMP
DMP
Incidence
DMP celkově
1:1000* aţ 1:600**
jednotlivé DMP 1:10 000 aţ 1:1 000 000
* Scriver, C.R., et al. (eds.): The Metabolic and Molecular Bases of Inherited Disease. 7th. Ed. New
York, McGraw-Hill 1995
** Hoffmann GF: Selective screening for inborn errors of metabolism-past, present and future Eur J
Pediatr. 1994;153(7 Suppl 1):S2-8
Tabulka 6: Příklady DMP s incidencí
DMP
Fenylketonurie/hyperfenylalaninémie
z deficitu fenylalanin hydroxylázy
Leucinóza
Incidence
1: 4500 (Irsko) aţ 1:100 000 (Finsko)
1:8 000 (ČR)
1:176 (Mennonité, Pensylvánie, USA) aţ
1:290 000 (Nová Anglie, USA)
5.4 Akutní klinické symptomy u DMP
Tabulka 7: Akutní klinické symptomy u DMP
Systém
Symptomy
Akutní symptomy v graviditě
HELLP syndrom, AFLP
Akutní symptomy
hypotermie, porucha sacího reflexu, problémy s krmením, opisthotonus,
u novorozence
abnormální pohyby, RDS, apnoické pauzy, ikterus, sepse E. coli
Akutní celkové symptomy
ataky dehydratace, abnormální zápach moči a potu, epistaxe, krvácivé
projevy, hemolýza, tromboembolické příhody, horečka, Reyův a Reyelike syndrom, časné úmrtí, neočekávané úmrtí, náhlé úmrtí
Akutní neurologické
letargie, dráţdivost, poruchy vědomí, koma, křeče, infantilní spasmy,
symptomy
myoklonie, stroke-like episody, extrapyramidové příznaky, ataxie,
Akutní psychiatrické
symptomy
Akutní gastrointestinální
symptomy
Akutní renální symptomy
Akutní svalové symptomy
Akutní kardiální symptomy
Akutní respirační symptomy
Akutní kostní symptomy
Akutní koţní symptomy
Akutní endokrinní symptomy
cerebellární symptomy
poruchy chování, hyperaktivita, sebepoškozování, psychotické symptomy,
autistické rysy
neprospívání, ataky zvracení, intolerance některé sloţky potravy, bolesti
břicha, opakované průjmy, hepatomegalie, ikterus, jaterní dysfunkce aţ
selhání, akutní pankreatitida
renální kolika, abnormální zápach moči, abnormální barva moči, akutní
selhání ledvin
svalová slabost, intolerance cvičení, svalové křeče, únavnost, bolesti svalů
kardiomyopatie dilatační, arytmie, poruchy vedení vzruchu převodním
systémem, srdeční selhání
respirační insuficience, ataky hyperventilace
bolesti kostí, osteoporóza
fotosenzitivita
adrenální insuficience, diabetes mellitus
5.5 Symptomy akutních DMP při rutinním biochemickém a hematologickém
vyšetření
Tabulka 8: Symptomy akutních DMP při rutinním laboratorním vyšetření
Vyšetření
Nálezy
Zápach moči
atypický zápach moči
Glukóza
hypoglykémie, hyperglykémie, glykosurie
Redukující látky
melliturie
Ketokyseliny
pozitivní ketokyseliny v moči
Amoniak
hyperammonémie
Acidobazická rovnováha
metabolická alkalóza, metabolická acidóza, laktátová acidóza,
ketoacidóza, respirační alkalóza
Anion gap
zvýšená hodnota
Laktát
hyperlaktacidémie, hyperlaktacidurie
Ketolátky
hyperketotické stavy, ketonurie
Transaminázy (ALT, AST) hepatocelulární dysfunkce
Bilirubin celkový a přímý
hyperbilirubinémie
Myoglobin
myoglobinémie/myoglobinurie
Kreatinkináza (CK)
zvýšená aktivita
Krevní obraz
anémie, leukopenie, neutropenie, trombocytopenie, pancytopenie,
retikulocytóza, trombocytóza
Hemokoagulace
koagulopatie
5.6 Klinické symptomy u DMP
Tabulka 9: Klinické symptomy u DMP
Systém
Symptomy
hypotrofie fétu, hypokineze aţ akineze fétu, neimunní hydrops fetalis,
Symptomy v graviditě
polyhydramnion, HELLP syndrom, AFLP
malformace, hypotrofie, mikrocefalie, hypotermie, porucha sacího reflexu,
Symptomy u
problémy s krmením, opisthotonus, abnormální pohyby, RDS, apnoické
novorozence
pauzy, ikterus, sepse E. coli
dysmorfie, stigmatizace, projevy střádání, hypotrofie, ataky dehydratace,
Celkové symptomy
abnormální zápach moči a potu, epistaxe, krvácivé projevy, hemolýza,
tromboembolické příhody, horečka, opakované infekce, SCID, únavový
Neurologické symptomy
Psychiatrické symptomy
Oční symptomy
Symptomy postižení
sluchu
Gastrointestinální
symptomy
Renální symptomy
Svalové symptomy
Kardiální symptomy
Respirační symptomy
Kostní symptomy
Kožní symptomy
Endokrinní symptomy
syndrom, opoţděná puberta, Reyův a Reye-like syndrom, časné úmrtí,
neočekávané úmrtí, náhlé úmrtí
oligofrenie, mentální retardace, psychomotorická retardace, regres
psychomotorického vývoje, demence, opoţděný vývoj řeči, letargie,
dráţdivost, poruchy vědomí, koma, křeče, záchvatovité onemocnění,
infantilní spasmy, myoklonie, stroke-like ataky, extrapyramidové příznaky,
hypotonie, hypertonie, corpus callosum - agenese nebo hypoplasie,
makrocefalie, mikrocefalie, atrofie cerebrální, atrofie kortikální,
leukodystrofie, demyelinizace, ataxie, cerebellární symptomy, cerebellární
atrofie nebo hypoplázie, hyporeflexie, areflexie, hyperreflexie, periferní
neuropatie
poruchy chování, hyperaktivita, sebepoškozování, psychotické symptomy,
autistické rysy
porucha zraku aţ slepota, oftalmoplegie, abnormální oční pohyby,
strabismus, nystagmus, ptóza víčka, glaukom, korneální zákaly a depozita,
opacity čočky aţ katarakta, ektopie čočky, myopie, retinitis pigmentosa,
třešňová skvrna na očním ozadí, atrofie optiku
postiţení sluchu aţ hluchota, hyperacusis
makroglossie, hyperplasie gingiv, gotické patro, neprospívání, ataky
zvracení, intolerance některé sloţky potravy, bolesti břicha, chronický
průjem, ileus, hepatomegalie, splenomegalie, ikterus, cholestáza, steatosa
jater, adenomy jater, cirhóza jater, karcinom jater, ascites, portální
hypertenze, jaterní dysfunkce aţ selhání, cholelitiáza, akutní pankreatitida
renální kolika, urolitiáza/nefrolitiáza, nefrokalcinóza, tubulopatie,
abnormální barva moči, abnormální zápach moči, nefromegalie, renální
cysty, akutní selhání ledvin, chronické selhání ledvin
myopatie, svalová slabost, intolerance cvičení, svalové křeče, únavnost,
bolesti svalů, atrofie svalů, selhání respiračních svalů, ragged-red fibres
kardiomyopatie hypertrofická, kardiomyopatie dilatační, endokardiální
fibroelastóza, vrozené srdeční vady, získané postiţení chlopní, arytmie,
poruchy vedení vzruchu převodním systémem, srdeční selhání
intersticiální pneumopatie, respirační insuficience, ataky hyperventilace
malý vzrůst, opoţdění růstu, vysoký vzrůst, dysproporcionální kostra,
kyfóza, hyperlordóza, křivice, arthritis, dysostosis multiplex, bolesti kostí,
osteoporóza, arachnodaktylie, kontraktury, tečkovité kalcifikace, syndaktylie
angiokeratomy, hyperkeratóza, fotosenzitivita, zvýšené ochlupení, sníţené
ochlupení, světlé vlasy, pili torti, trichorrhexis nodosa
kongenitální adrenální hyperplasie, adrenální insuficience, diabetes mellitus,
hypotyreóza, hypoglykémie, kalcifikace nadledvin
5.7 Biochemické symptomy u DMP
Tabulka 10: Biochemické symptomy u DMP
Vyšetření
Nálezy
Glukóza
hypoglykémie, hyperglykémie, glykosurie
Amoniak
hyperammonémie
Acidobazická rovnováha
metabolická alkalóza, metabolická acidóza,
laktátová acidóza, ketoacidóza, respirační alkalóza
Laktát
hyperlaktacidémie, hyperlaktacidurie
Kyselina močová
hyperurikémie, hypourikémie
Ketolátky
hyperketotické stavy, hypoketonémie nalačno,
Transaminázy
Bilirubin celkový a přímý
Cholesterol
Triacylglyceroly
Kreatinin
Myoglobin
Oxaláty
Sacharidy
ketonurie
hepatocelulární dysfunkce
hyperbilirubinémie
hypercholesterolémie, hypocholesterolémie
hypertriacylglycerolémie,
pseudo-hypertriacylglycerolémie
hypokreatininémie, hyperkreatininémie
myoglobinémie, myoglobinurie
hyperoxalurie
melliturie
5.8 Hematologické symptomy u DMP
Tabulka 11: Hematologické symptomy u DMP
Vyšetření
Nálezy
Krevní obraz
anémie, anémie megaloblastická, anémie makrocytární
leukopenie, neutropenie, trombocytopenie, pancytopenie,
retikulocytóza, trombocytóza
Hemokoagulace koagulopatie
Cytologie
vakuoly v lymfocytech, pěnovité buňky v kostní dřeni, AdlerReilyho granula v neutrofilech
6. Laboratorní diagnostika DMP
Diagnóza DMP musí být vždy potvrzena i laboratorním vyšetřením.
Včasná diagnóza DMP někdy umoţní vyuţití současných terapeutických postupů.
Diagnóza u probanda by měla být stanovena na takové úrovni, aby mohla být později provedena
prenatální diagnostika (bez ohledu na to, zda si rodina aktuálně přeje další těhotenství nebo ne).
Vyšetření DMP probíhá na různých úrovních: na úrovni metabolitu, enzymu/proteinu, DNA nebo
tkáně/buňky (vyšetření histologické, histochemické, imunohistochemické a
elektronmikroskopické).
Vyšetření na vyšší úrovni (enzymy, DNA, tkáně) jsou indikována přísně individuálně.
Tabulka 12: Vyšetření pro diagnostiku DMP
Vyšetření
Obsah vyšetření
novorozenecký
screening 10 DMP tandemovou hmotnostní
Postnatální
screening DMP
spektrometrií (MS/MS) podle Věstníku MZ ČR
vyšetření
2009, Částka 6
selektivní
vyšetření osob, které mají symptomy vedoucí
screening DMP
k podezření na DMP
vyšetření ke zjištění, zda je plod postiţen DMP,
Prenatální vyšetření
která byla prokázána v rodině;
je moţné pouze tehdy, pokud byla u probanda
stanovena přesná diagnóza
vyšetření v případě SIDS, náhlého, neočekávaného
Postmortální vyšetření
nebo neodvratitelného úmrtí, pokud není dokončena
diagnostika DMP
7. Manuál pro odběr primárního vzorku
7.1 Požadavek na vyšetření DMP - žádanka
S kaţdým vzorkem biologického materiálu musí být do laboratoře dodána řádně vyplněná ţádanka
– Poţadavek na vyšetření dědičných metabolických poruch (moţno stáhnout na www.udmp.cz).
Vzorky jsou do laboratoře doručovány obvykle zdravotnickým pracovníkem VFN, svozovou
sluţbou nebo sanitou, zásilkovou sluţbou, případně kurýrem.
Tabulka 13: Identifikace pacienta a biologického materiálu na žádance
Údaj
1 rodné číslo; u pojištěných cizinců číslo pojištěnce, u samoplátců
datum narození, u novorozenců dosud bez rodného čísla datum
narození (neplatí pro novorozenecký screening)
2 příjmení a jméno
3 kód zdravotní pojišťovny
4 základní diagnóza, event. ostatní diagnózy (kódem MKN-10, podle
platné Metodiky pro pořizování a předávání dokladů VZP ČR)
5 identifikace odesílajícího lékaře a pracoviště:
jméno, příjmení a podpis, IČP, odbornost;
kontaktní údaje (tel., adresa);
razítko
6 poţadovaná vyšetření nebo podrobná epikríza včetně stravy,
farmakoterapie a transfuze
7 druh primárního vzorku (moč, sérum, krevní papírek, likvor …….)
8 datum a čas odběru
9 identifikace osoby provádějící odběr (jméno, příjmení, podpis)
10 souhlas ţadatele s úpravou a/nebo doplněním indikace lékařemkonzultantem ÚDMP v odůvodněném případě na základě
diferenciálně diagnostické expertízy
11 poţadavek na statimové vyšetření
Nezbytnou identifikaci biologického materiálu před přidělením laboratorního čísla tvoří vţdy
nejméně jméno a příjmení pacienta a rodné číslo (nebo datum narození pacienta), jinak vzorek
nemůţe být přijat do laboratoře.
Pro molekulárně genetické vyšetření je nezbytný řádně vyplněný a podepsaný Informovaný
souhlas vyšetřované/ho (zákonného zástupce) s genetickým laboratorním vyšetřením (moţno
stáhnout na www.udmp.cz) .
Laboratoř na ţádanku doplní datum a čas přijetí vzorku do laboratoře (eviduje automaticky
OpenLIMS po přijetí ţádanky do systému), druh a mnoţství přijatých primárních vzorků a jméno,
příjmení a podpis přijímajícího laboranta.
7.2 Dodatečná vyšetření
Indikace vyšetření můţe být v odůvodněném případě upravena nebo doplněna lékařemkonzultantem ÚDMP na základě diferenciálně diagnostické expertízy.
Ţadatel můţe dodatečně doindikovat další vyšetření v případě, ţe je v laboratoři k dispozici
dostatečné mnoţství primárního vzorku.
Primární vzorky jsou v laboratoři uchovávány při teplotě -18°C do dokončení všech indikovaných
vyšetření, minimálně 1 měsíc.
7.3 Materiál k laboratornímu vyšetření v ÚDMP
Tabulka 14: Materiál k vyšetření
Materiál
Zkratka
Odběr
Transport
Poznámky
Sráţlivá krev
k
7 ml ţilní krve
při RT neprodleně dopravit do
(odběrový vakuový systém laboratoře
zkumavka bez úpravy)
nemrazit
Sérum
s
7 ml plné ţilní krve, stočit při 2000 g 0-8oC nejlépe na ledu, při
(pro analýzu aminokyselin nejlépe do
transportu nad 4 hod
60 min. po odběru), separovat sérum
zamrazit
a zkumavku označit - sérum
Nesráţlivá krev
nk
7 ml ţilní krve do EDTA
při RT neprodleně dopravit do
(fialový, růţový uzávěr)
laboratoře
nemrazit
o
Plazma
p
7 ml ţilní krve do EDTA, (fialový,
0-8 C nejlépe na ledu, při
růţový uzávěr) - stočit při 2000 g
(pro analýzu aminokyselin nejlépe do
zamrazit
60 min. po odběru), separovat plazmu
a zkumavku označit - plazma
Suchá krevní
kp
filtrační papír typ Whatman 903
při RT před transportem nechat
kapka
se 4 krevními skvrnami - ø1 cm (plná
uschnout při pokojové
(novorozenecká
krev).
teplotě (nesmí schnout
screeningová
Kruhy vyznačené na testovací
nad zdrojem tepla);
kartička)
kartičce musí být plně prosáknuty
vloţit do sáčku aţ po
(viditelně z přední a zadní strany
dokonalém usušení
kartičky). Kartička nesmí být
nasáknuta plnou krví opakovaně.
Likvor
l
minimálně 1 ml (ve sterilní zkumavce 0-4oC ihned dopravit do
(mozkomíšní
bez úpravy)
laboratoře nejlépe na
mok)
ledu, při transportu nad 4
hod zamrazit
o
Moč
m
20 ml, nejlépe ranní moči do 2
0-8 C nejlépe na ledu, při
močových zkumavek, nepouţívat
nádobky od léčiv
zamrazit
Moč ranní celá
mc
moč ranní celá porce včetně
0-8oC nejlépe na ledu, při
porce včetně
sedimentu
sedimentu;
zamrazit
Deproteinát krve
ch
odběr heparinizované krve do
při RT společný odběr pro
v kyselině
dvojnásobného objemu studené 8%
stanovení laktátu,
chloristé
kys. chloristé, centrifugovat, stáhnout
pyruvátu a 3deproteinát
hydroxybutyrátu
Erytrocyty
ery
3-5 ml nesráţlivé krve do EDTA
při RT po předchozí telefonické
dohodě zaslat do 12.00
hod., v pátek do 10,00
hod.;
vţdy poslat i kontrolní
vzorek od nepříbuzné
osoby
Leukocyty
leu
7 ml nesráţlivé krve do EDTA
při RT po předchozí telefonické
Materiál
Zkratka
Lymfocyty
lym
Fibroblasty
Bioptický a
autoptický
materiál
fib
t
Odběr
Poznámky
hod.;
osoby
7 ml nesráţlivé krve do EDTA
RT
po předchozí telefonické
hod.;
osoby
kultura fibroblastů
při RT
po předchozí dohodě
vzorky jater, myokardu, kůţe, svalu suchý led zamraţený materiál na
nebo
histochemické a
tekutý
elektronmikroskopické
dusík
vyšetření
Transport
RT
Genomová
DNA
RNA na cDNA
2,7 ml nesráţlivé krve do EDTA
odebrané za sterilních podmínek
cDNA 7 ml nesráţlivé krve do EDTA
odebrané za sterilních podmínek
RT = pokojová teplota
DNA
materiál fixovaný v 10%
pufrovaném
paraformaldehydu
RT
RT
nechladit
7.4 Skladování vzorků
Skladování před vyšetřením
Poţadavky na skladování biologického materiálu před doručením vzorku do laboratoře jsou
popsány v Tabulce 14: Materiál k vyšetření.
Skladování po vyšetření
Zkumavky s materiálem se uchovávají při teplotě min. -18°C do dokončení všech indikovaných
vyšetření, minimálně 1 měsíc.
Po odeslání výsledků je biologický materiál určen k likvidaci (není-li určeno jinak).
Novorozenecké testovací kartičky jsou skladovány laboratoří po dobu min. 5 let.
S biologickým materiálem je třeba vţdy zacházet v souladu se zásadami bezpečnosti práce. Kaţdý
biologický vzorek je nutné povaţovat za potenciálně infekční materiál.
8. Preanalytické procesy v Biochemické laboratoři
8.1 Kritéria pro odmítnutí vzorku nebo žádanky
Tabulka 15: Které žádanky nebo vzorky může laboratoř odmítnout
Odmítnutá žádanka nebo vzorky
1 ţádanka s biologickým materiálem, na které chybí nebo jsou nečitelné základní údaje
(rodné číslo, příjmení a jméno, typ zdravotní pojišťovny, IČP a razítko odesílajícího
lékaře, základní diagnóza) a není moţné je doplnit
2 ţádanka s poţadavky na vyšetření, které laboratoř neprovádí ani nezajišťuje (viz
Seznam vyšetření)
3 ţádanka ambulantního pacienta od subjektu s odborností lůţkového oddělení
4 ţádanka nebo odběrová nádobka znečištěná biologickým materiálem
5 nádoba s biologickým materiálem, kde není způsob identifikace materiálu z hlediska
nezaměnitelnosti dostatečný
6 biologický materiál, kde zjevně došlo k porušení doporučení o preanalytické fázi
7 neoznačený biologický materiál
8 biologický materiál bez ţádanky, pokud nelze ţádným způsobem jednoznačně dohledat
ţadatele o vyšetření
Při nedostatečné identifikaci vzorku nebo ţádanky je ţadatel vţdy kontaktován k doplnění
chybějících informací.
8.2 Vyšetřování ve smluvních a spolupracujících laboratořích
Biochemická laboratoř vyuţívá sluţeb spolupracujících laboratoří v ČR i v zahraničí, které ověřují
diagnózu na úrovni enzymu/proteinu a DNA.
Vedení laboratoře odpovídá za volbu a sledování kvality spolupracujících laboratoří a zajišťuje, aby
spolupracující laboratoř odpovídala poţadavkům na kompetenci k provádění poţadovaných
vyšetření.
Tabulka 16: Seznam spolupracujících laboratoří v ČR
Název laboratoře
Adresa
FN Brno
Černopolní 9
Interní hematoonkologická klinika,
Brno
Centrum molekulární biologie a genové terapie
625 00
Sekce vrozených genetických chorob
Telefon
532 234 623
9. Vydávání výsledků a komunikace s Biochemickou laboratoří
9.1 Hlášení výsledků v kritických intervalech
Hlášení kritických hodnot u patologických výsledků řeší lékař-konzultant ve spolupráci
s analytikem-biochemikem, odpovídajícím za danou metodu. O hlášení těchto výsledků rozhoduje
lékař-konzultant vţdy s individuálním přístupem ke konkrétnímu pacientovi.
Patologické výsledky v kritických intervalech jsou hlášeny ţadateli lékařem nebo analytikem
(pouze v případě pacientů Kliniky dětského a dorostového lékařství VFN a pacientů ambulance
ÚDMP). Hlásí se pouze u nově zachycených případů.
Výjimkou jsou statimová vyšetření, jehoţ výsledky je oznámeny ihned po ukončení vyšetření, i
kdyţ nejsou patologické.
Současně s hlášením se provede do OpenLIMS zápis - datum a čas, hlášeno co, komu a zkratka
pracovníka, který hlášení provedl.
Tabulka 17: Kritické hodnoty v Biochemické laboratoři
Vyšetření
Kritické hodnoty
Aminokyseliny v séru, plazmě, moči, likvoru
profil suspektní pro DMP
Galaktitol v moči
> 200
Galaktóza /Galaktóza-1-fosfát v krvi
Homocystein celkový v plazmě, séru
Kreatinin v séru, plazmě
> 0,5 / > 0,5
< 7; > 50
> 300
(> 150 u dětí do 15 let)
> 600
> 10
Kyselina močová v séru, plazmě
Kyselina orotová v moči
Laktát v krvi
Laktát v likvoru
Organické kyseliny v moči
Tandemová hmotnostní spektrometrie
aminokyseliny a acylkarnitiny
>5
>4
Jednotky
mmol/mol
kreatininu
mmol/l
umol/l
umol/l
umol/l
mmol/mol
kreatininu
mmol/l
mmol/l
9.2 Informace o vydávání výsledků
Písemné vydávání výsledků
Výsledkové listy jsou vydávány vţdy písemně.
Výsledkové listy jsou tištěny v kompletní podobě a zasílány poštou, zdravotnickým pracovníkem
VFN, svozovou sluţbou, sanitou nebo kurýrem na adresu ţadatele.
Méně často jsou vydávány nekompletní výsledkové listy, opatřené podpisem lékaře ÚDMP, na
kterých je zřejmé, ţe jsou některé metody rozpracované, a tudíţ nehotové.
Telefonické sdělování výsledků
Výsledky pacientů vyšetřovaných v laboratoři jsou telefonicky sdělovány jen ve výjimečných
případech – pouze ošetřujícímu lékaři na základě ověření znalostí o stavu vyšetřovaného pacienta a
jeho jednoznačné identifikace.
Výdej výsledků pacientovi je moţný pouze na základě přání ošetřujícího lékaře případně pacienta
samoplátce. Pacient musí předloţit průkaz totoţnosti (občanský průkaz, pas nebo průkaz
pojištěnce).
9.3 Změny výsledků a nálezů
Byla-li chyba zjištěna v identifikační části výsledkového listu, jsou identifikační údaje opraveny
a je vytištěn nový výsledkový list, který je zaslán ţadateli. Záznam o opravách je uveden
v OpenLIMS.
Byla-li zjištěna chyba ve výsledku, je chybný výsledek opraven a je vytištěn nový výsledkový list,
který je zaslán ţadateli. Ţadatel je poţádán o vrácení původní nesprávné verze výsledkového listu.
Pracovník laboratoře se za provedenou chybu laboratoře omluví.
O této neshodě je veden v laboratoři Záznam o řízení neshod a nápravném opatření a tyto záznamy
jsou pravidelně přezkoumávány a vyhodnocovány vedením laboratoře.
V pracovní době vyřizuje tyto záleţitosti vedoucí analytického úseku nebo manaţer kvality nebo
osoba pověřená, během pohotovostní sluţby je vyřizuje slouţící analytik-biochemik nebo lékař.
Záznam o opravách je uveden v OpenLIMS.
9.4 Interval od dodání vzorku k vydání výsledku
Dostupnost výsledků jednotlivých vyšetření selektivního screeningu je uvedena v kapitole 14.
Abecední seznam laboratorních vyšetření metabolitů prováděných v ÚDMP.
Maximální doba odezvy laboratoře pro vydání kompletních výsledkových listů z laboratoře je 1
měsíc.
Výsledky vyšetření novorozeneckého screeningu jsou známy max. do 3 pracovních dní od dodání
novorozenecké screeningové kartičky do laboratoře. Do této doby jsou všechny patologické
výsledky po opakování telefonicky nahlášeny a řešeny.
Statim/Vitální indikace: ordinace laboratorního vyšetření v situaci spojené s ohroţením ţivota,
kdy výsledek vyšetření můţe mít vliv na přeţití pacienta. Vzorky na vyšetření mají absolutní
přednost, je moţné zastavit analýzy jiných vyšetření. Transport vzorku je předem ohlášen.
Výsledky jsou hlášeny telefonicky ihned po dokončení statim vyšetření.
Přednost/Akutní vyšetření: ordinace laboratorního vyšetření v situaci, kdy výsledek vyšetření
můţe zásadním způsobem ovlivnit rozhodování o další péči o nemocného. Vzorky na vyšetření mají
přednost před ostatními vzorky a zpracovávají se v nejbliţším dohodnutém termínu, závislém na
moţnostech laboratoře.
9.5 Statimové vyšetření
Statimové metabolické vyšetření provádíme u pacientů, u nichţ vzniklo podezření na akutně
probíhající DMP. Můţe jít o první nebo opakovanou ataku dekompenzace.
Tabulka 18: Přehled statim vyšetření
Metoda
Materiál
Aminokyseliny
sérum nebo plazma separované
nejlépe do 60 min. po odběru
krev nesráţlivá příp. sráţlivá
likvor
moč
Organické kyseliny
moč
plazma
krev nesráţlivá
Tandemová hmotnostní
suchá krevní kapka na papíře
spektrometrie
pouze typu Whatmann 903,
(aminokyseliny, acylkarnitiny)
screeningová novorozenecká
kartička (krevní papírek, KP)
Kyselina orotová
moč
Galaktitol
moč
suchá krevní kapka na papíře
Galaktóza/galaktóza-1-fosfát
pouze typu Whatmann typ 903,
screeningová novorozenecká
kartička (krevní papírek, KP)
moč
-Ketokyseliny
Kreatinin
moč
Minimální množství
1 ml
2 ml
1 ml
4 ml
4 ml
1 ml
2 ml
min. 2 krevní skvrny
Ø 1 cm
4 ml
2 ml
min. 2 krevní skvrny
Ø 1 cm
2 ml
2 ml
Pokud ponecháváte indikaci vyšetření na našem lékaři, posílejte ke statim metabolickému vyšetření
vždy minimálně 5 ml krve, 20 ml moči a krevní papírek se 4 krevními skvrnami Ø 1 cm.
Je vhodné konzultovat zvaţované statimové vyšetření s lékařem-konzultantem.
Telefonické kontakty jsou uvedeny v Tabulce 19.
Tabulka 19: Telefonické kontakty pro statimové vyšetření
TF
Kontakt
224 967 710 lékařská konzultace pro vyšetření metabolitů v běţnou pracovní dobu
725 739 992 lékařská konzultace pro vyšetření metabolitů mimo běţnou pracovní dobu
224 911 453 lékařská konzultace pro transport a statimové metabolické vyšetření dítěte
vyţadujícího intenzivní péči - Jednotka intenzivní a resuscitační péče (JIRP)
Kliniky dětského a dorostového lékařství VFN, Praha 2, Ke Karlovu 2
Během konzultace budete dotazováni na následující informace:
Tabulka 20: Přehled informací, potřebných pro statim vyšetření
Nynější onemocnění
Jde o 1. nebo opakovanou ataku akutní dekompenzace?
Jaké jsou klinické symptomy - neurologické, gastrointestinální, kardiální,
svalové, hematologické, jiné?
Jde o progresivní onemocnění?
Je postiţen 1 orgán (systém) nebo jde o systémové postiţení ?
Okolnosti, které mohou ovlivnit interpretaci výsledků metabolického
vyšetření:
klinický stav pacienta – hypoxie, křeče, svalová aktivita, hepatopatie,
nefropatie, multiorgánové selhání
výţiva – příjem bílkovin/kg/den, MCT olej, hladovění, obezita,
postprandiální odběr, veganská strava, kojené dítě, odmítání některé sloţky
stravy, parenterální výţiva – aminokyseliny/kg/den, tukové emulze/kg/den
medikace – uveďte veškerou medikaci během posledního týdne, zvl.
valproát, vitamíny aj.
technika odběru a zpracování vzorku – kontaminace, hemolýza
Osobní anamnéza
perinatální anamnesa, prodělaná onemocnění, stavy akutní dekompenzace
Laboratorní nálezy a
moč – atypický zápach, barva, ketolátky, redukující látky
výsledky zobrazovacích krev – krevní obraz, anion gap, glykémie, Astrup, hemokoagulační vyšetření,
vyšetření
bilirubin, transaminázy, amoniak, laktát, CK
sonografická vyšetření, rtg, CT, MR
Rodinná anamnéza
stejné či podobné projevy onemocnění u sourozenců či jiných příbuzných,
kosanguinita, nejasná úmrtí zvl. v dětském věku
Identifikace pacienta
jméno a příjmení, rodné číslo, pojišťovna
Identifikace ošetřujícího jméno a příjmení, název a adresa pracoviště, telefon, IČZ, odbornost, číslo
lékaře
diagnosy
Poté bude domluven poţadovaný materiál na vyšetření, doporučená metabolická vyšetření,
transport materiálu do laboratoře a sdělení výsledků.
Informace o pacientovi i ošetřujícím lékaři uveďte téţ do ţádanky (moţno stáhnout na
www.udmp.cz).
9.6 Standardní vyšetření a konzultační činnost
1. Sami chcete indikovat potřebná vyšetření
Pokud jste dobře orientováni v diagnostice DMP, indikujte přímo konkrétní vyšetření metabolitů.
Enzymatická vyšetření a molekulárně genetická vyšetření jsou prováděna pouze po předchozí
telefonické dohodě (Tabulka 21).
Potřebný materiál uvádí Tabulka 14.
Tabulka 21 : Kontakty pro enzymatické a molekulárně genetické vyšetření
Vyšetření
Laboratoř
Telefon
Kontaktní osoba
Biochemická
224 967 710 Lékař-konzultant
Enzymatické vyšetření
laboratoř
Enzymologická 224 967 032 Ing. Helena Poupětová,
laboratoř
224 967 034
Ing. Jitka Honzíková
Molekulárně genetické
Laboratoř
224 967 701
vyšetření
DNA
224 967 680
Mgr. Hana Vlášková
diagnostiky
Nesráţlivou krev na enzymatické a molekulárně genetické vyšetření doručte do 12.00 hod. (v pátek
do 10.00 hod.).
Při enzymatickém vyšetření posílejte vţdy současně s krví pacienta i krev kontrolní, ne od
příbuzného, odebíranou a transportovanou za stejných podmínek jako krev pacienta.
2. Žádáte indikaci vyšetření od lékaře-konzultanta
Vyšetření můţe na Vaše přání indikovat lékař našeho pracoviště. Tento lékař má roli konziliárního
lékaře, který pacienta nevyšetřoval, a má tedy jen omezené informace. Vyšetření je zaměřeno pouze
na problematiku dědičných metabolických poruch. Metabolické vyšetření je jen součástí
komplexního vyšetření pacienta, které provádí ošetřující lékař.
Pro diagnostiku DMP navrhujeme níţe uvedený diagnostický algoritmus.
Pokud poţadujete statim vyšetření v případě akutní dekompenzace – viz Statimové metabolické
vyšetření.
Tabulka 22: Fáze diagnostiky DMP
Pořadí Fáze diagnostiky
1.
Vyslovení podezření na DMP na základě symptomu (symptomů) klinického, laboratorního nebo
zjištěného zobrazovacími metodami
2.
Zhodnocení nynějšího onemocnění
jde o progresivní onemocnění ?
jde o regres psychomotorického vývoje nebo demenci ?
je postiţen 1 orgán (systém) nebo jde o systémové postiţení ?
okolnosti, které mohou ovlivnit interpretaci výsledků metabolického vyšetření:
klinický stav pacienta – hypoxie, křeče, svalová aktivita, hepatopatie, nefropatie, multiorgánové
selhání,
výţiva – příjem bílkovin event. aminokyselin/kg/den, parenterální výţiva, MCT oleje,
hladovění, obezita, postprandiální odběr, veganská strava, kojené dítě, odmítání některé sloţky
stravy,
medikace – uveďte veškerou medikaci během posledního týdne, zvl. valproát, vitamíny aj.
technika odběru a zpracování vzorku – kontaminace, hemolýza, speciální poţadavky na odběr
má stanovení laktátu a homocysteinu
3.
Zhodnocení osobní anamnézy - perinatální anamnéza, prodělaná onemocnění, stavy akutní
dekompenzace, hospitalizace, ambulantní vyšetření, progrese onemocnění
4.
Zhodnocení rodinné anamnézy - stejné či podobné projevy onemocnění u sourozenců či jiných
příbuzných, kosanguinita, nejasná úmrtí zvl. v dětském věku
5.
Komplexní zhodnocení fenotypu pacienta
= cílené hledání symptomů klinických, laboratorních, zobrazovacích aj.
viz přehled symptomů DMP
6.
Epikríza = souhrnné lékařské zhodnocení pacienta
7.
Zaslání materiálu na metabolické vyšetření:
materiál:
3 ml sráţlivé krve nebo 2 ml séra (separovaného nejlépe do 60 min. po odběru); pro analýzu
aminokyselin je nejvhodnější 1 ml plazmy separované do 60 min. po odběru)
Suchá krevní kapka na papíře Whatmann typ 903 - 4 krevní skvrny Ø 1 cm
20 ml moče (ranní nebo ze sběru)
min.1 ml likvoru
řádně vyplněná žádanka:
údaje o pacientovi – jméno a příjmení pacienta, rodné číslo
kód pojišťovny, číslo diagnoóz, výstiţná epikríza
údaje o ošetřujícím lékaři – jméno a příjmení lékaře
název, adresa a telefon pracoviště, IČP
8.
9.
10.
Můţete téţ ţádat:
telefonickou konzultaci s lékařem-konzultantem v Biochemické laboratoři
TF 224 967 710
konziliární ambulantní vyšetření – pouze po předchozím objednání
TF 224 967 670, s sebou přinést moč (ranní moč nebo sběr moči, minimálně 15 ml) a
dokumentaci s epikrízou
Indikace vyšetření
Při 1. vyšetření vzorků provádíme tzv. screeningová vyšetření:
moč - kreatinin, -ketokyseliny, disulfidy, kyselina fenylpyrohroznová, mukopolysacharidy
semikvantitativně, redukující látky
sérum - biotinidáza
suchá krevní kapka – MS/MS aminokyseliny a acylkarnitiny.
Další vyšetření indikuje lékař-konzultand.
Interpretace vyšetření – viz jednotlivé metody
konzultace s lékařem konzultandem je moţná na tel. 224 967 710
Konzultační činnost laboratoře je prováděna denně lékařem-konzultandem většinou telefonicky, a
to během celé fáze vyšetřování vzorku pacienta s podezřením na DMP.
Lékař-konzultand indikuje laboratorní metody, zjišťuje telefonicky doplňující informace o
vyšetřovaném pacientovi, sděluje případné patologie ošetřujícímu lékaři a navrhuje léčbu. Lékařkonzultand můţe také doporučit ambulantní vyšetření pacienta v ÚDMP nebo hospitalizaci dítěte na
Klinice dětského a dorostového lékařství VFN nebo dospělého na lůţkovém odd. VFN.
Pracovníci laboratoře pořádají semináře o DMP a jejich diagnostice s cílem zlepšit jejich
diagnostiku v ČR.
9.7 Řešení stížností a reklamací
Stíţnost klinických pracovníků, klientů a jiných stran je podnětem pro zlepšení práce naší
laboratoře. Z tohoto důvodu řešení stíţností věnuje laboratoř velkou pozornost.
Součástí komunikace jsou rovněţ kladné i záporné informace od uţivatelů laboratorních sluţeb,
podněty od pracovníků, pacientů nebo ostatních uţivatelů.
Způsob podání stíţností a připomínek:
písemně (dopis, e-mail), ústně (telefonicky nebo osobně).
Stíţnosti adresujte manaţerovi kvality.
Jakýkoliv z výše uvedených způsobů je podnětem pro řešení stíţností a jsou přijatá nápravná
opatření, která mají zabránit opakování stíţnosti.
Termíny pro vyřízení stíţností:
Pokud stíţnost není řešena ihned, je termín na vyřízení stíţnosti 30 kalendářních dnů. V tomto
termínu oznámí odpovědný pracovník ţadateli výsledek šetření. V případě, ţe nelze v tomto
termínu stíţnost dořešit, informuje stěţovatele o dosavadním postupu (např. znalecký posudek).
10. Přehled laboratorních vyšetření
10.1 Metabolické vyšetření na úrovni metabolitů
Vyšetření na úrovni metabolitů zahrnuje vyšetření intermediátů metabolismu lipidů, aminokyselin,
sacharidů, oligosacharidů, glykosaminoglykanů, purinů, pyrimidinů a dalších látek.
Součástí vyšetření je i biochemická interpretace nálezů, coţ vyţaduje informace o pacientově věku,
rodinné a osobní anamnéze, aktuální symptomatologii klinické, laboratorní aj., stravě aj. výţivě,
medikaci a předpokládané diagnóze.
Metody lze rozdělit na kvalitativní, semikvantitativní, kvantitativní a profilové.
Tabulka 23: Seznam vyšetření – Metabolity
Vyšetření (metabolit)
Aminokyseliny kvantitativně
Disulfidy
Fenylalanin a tyrosin
Galaktitol
Globotriaosylceramid
Glykogen
Guanidinoacetát, kreatin a kreatinin
Homocitrulin
Homocystein celkový
3-Hydroxybutyrát
Karnitin volný, celkový, acylovaný
-Ketokyseliny
Kreatinin
Kyselina fenylpyrohroznová
Kyselina metylmalonová
Kyselina močová
Kyselina orotová
Kyselina sialová
Laktát
Mukopolysacharidy orientačně
Mukopolysacharidy kvantitativně
Mukopolysacharidy kvalitativně - elektroforéza
Oligosacharidy, sialyloligosacharidy
Organické kyseliny
Pteriny
Puriny a pyrimidiny
Pyruvát
Redukující látky
Sacharidy
Sfingolipidy
Siřičitany
Materiál
p, s, l, m
m
nk
m
kp
mc
ery
m
m
p, s
ch
s, p, m
m
s, p, m
m
p
s, p, m
m
m
ch, l, m
m
m
m
m
m, s, p
m
m, p, l
ch
m
m
tkáně
m
Laboratoř
Str.
42
47
48
48
49
Enzymologická laboratoř 49
50
50
51
52
53
54
56
56
58
58
58
61
Enzymologická laboratoř 62
63
64
64
65
66
67
68
68
63
69
70
Enzymatická laboratoř
70
70
Sukcinylaceton
Sukcinylaminoimidazolkarboxamidribosid
(SAICAr)
Sulfatidy
Tandemová hmotnostní spektrometrie
(aminokyseliny a acylkarnitiny)
Thiosírany kvalitativně
Thiosírany kvantitativně
Velmi dlouhé mastné kyseliny a kyselina fytanová a
pristanová
m
m
71
71
mc
kp
72
72
m
m
s
73
73
74
Tabulka 24: Seznam vyšetření – Metabolity - Výpočtové metody
Metoda
Strana
Poměr glycin v likvoru/v séru
46
Poměr acylovaný/volný karnitin
54
(AC/FC)
Poměr laktát/pyruvát (L/P)
63
Index podle Kaufmana (IK)
60
Index podle Stapletona (IS)
60
Exkreční frakce kyseliny močové
61
(EFKM)
10.2 Metabolické vyšetření na úrovni enzymů
Všechna enzymatická vyšetření jsou indikována přísně individuálně a jsou prováděna pouze po
předchozí telefonické dohodě.
U enzymatického vyšetření v erytrocytech, leukocytech nebo lymfocytech je nutno poslat i materiál
od zdravé nepříbuzné kontroly – odebraný a transportovaný za stejných podmínek jako
vyšetřovaný vzorek.
Tabulka 25 : Kontakty pro enzymatické vyšetření
Laboratoř
Telefon
Kontaktní osoba
Enzymologická laboratoř 22496 7032 Ing. Helena Poupětová,
22496 7034 Ing. Jitka Honzíková
22496 7710 Lékař-konzultant
Tabulka 26: Seznam vyšetření - Enzymy
Vyšetření (enzym)
Acetyl-CoA: -glukosaminid N-acetyltransferáza
-N-Acetyl-D-galaktosaminidáza
N-Acetylgalaktosamin-6-sulfát sulfatáza
-N-Acetyl-D-glukosaminidáza
N-Acetylglukosamin-6-sulfát sulfatáza
Materiál
leu, fib
leu, fib
leu, fib
leu, fib
leu, fib
Laboratoř
Adeninfosforibosyltransferáza (APRT)
Adenosindeamináza (ADA)
Amylo-1,4-1,6-transglukosidáza
Arylsulfatáza A
Arylsulfatáza B
Arylsulfatáza C
Biotinidáza
Cystathionin -syntáza (CBS)
Dihydropteridinreduktáza (DHPR)
Fosforibosylpyrofosfátsyntetáza (PRPPs)
Fosforyláza-b-kináza
-L-Fukosidáza
Galaktocerebrosidáza
-Galaktosidáza
-Galaktosidáza
Galaktóza-1-fosfát uridyltransferáza (GALT)
-Glukuronidáza
-Hexosaminidáza
-Hexosaminidáza A
Heparinsulfamidáza
Hypoxanthinfosforibosyltransferáza (HPRT)
Chitotriosidáza
-L-Iduronidáza
Iduronosulfátsulfatáza
Jaterní fosforyláza
Kyselá -1,4-glukosidáza
Kyselá -glukosidáza, glukocerebrosidáza
Kyselá lipáza
Kyselá sfingomyelináza
-Mannosidáza
-Mannosidáza
Methylmalonyl-CoA mutáza
-Neuraminidáza
Purinnukleosidfosforyláza (PNP)
Steroidsulfatáza
Tripeptidylpeptidáza I
Palmitoyl-protein thioesteráza
ery
ery
ery
leu, fib
leu, fib
leu, fib
s
fib
kp (3 terčíky)
ery
ery
leu, fib
leu, fib
leu, fib, kp
leu, fib
ery
leu, fib
leu, fib
leu, fib
leu, fib
ery
p, s
leu, fib
leu, fib
leu
leu, fib, kp
leu, fib
leu, fib
leu, fib
leu, fib
leu, fib
lym, fib
fib
ery
leu, fib
leu, fib
leu, fib
Tabulka 27: Seznam vyšetření – Enzymy/Proteiny – rozdělení podle metabolických
oblastí
Metabolická oblast
Onemocnění
Enzym / nekatalytický protein
Aminoacidopatie
homocystinurie
cystathionin -syntáza
Biosyntéza
deficit DHPR
dihydropteridinreduktáza (DHPR)
tetrahydrobiopterinu
Glykogenózy
glykogenóza II, Pompe kyselá -1,4-glukosidáza
glykogenóza IV
amylo-1,4-1,6-transglukosidáza
glykogenóza VI
jaterní fosforyláza
glykogenóza IX
fosforyláza-b-kináza
Organické acidémie methylmalonová
metylmalonyl-CoA mutáza
acidémie
Puriny
Lesch-Nyhanův syndrom hypoxantinfosforibosyltransferáza (HPRT)
Kelley-Seegmillerův
syndrom
deficit APRT
adeninfosforibosyltransferáza (APRT)
deficit ADA
adenosindeamináza (ADA)
deficit PRPPs
fosforibosylpyrofosfátsyntetáza (PRPPs)
deficit PNP
purinnukleosidfosforyláza (PNP)
onemocnění asociovaná s uromodulin
uromodulinem
Sacharidy
klasická galaktosémie
galaktóza-1-fosfát uridyltransferáza (GALT)
Jiné
deficit BTD
biotinidáza (BTD)
Lysosomální střádavá onemocnění
mukopolysacharidóza I
-L-iduronidáza
(Hurler/Scheie)
mukopolysacharidóza II iduronosulfátsulfatáza
(Hunter)
mukopolysacharidóza IIIA heparinsulfamidáza
(Sanfilippo A)
mukopolysacharidóza IIIB -N-acetyl-D-glukosaminidáza
(Sanfilippo B)
mukopolysacharidóza IIIC acetyl-CoA: -glukosaminid N(Sanfilippo C)
acetyltransferáza
Mukopolysacharidózy
mukopolysacharidóza IIID N-acetylglukosamin-6-sulfátsulfatáza
(Sanfilippo D)
mukopolysacharidóza IVA N-acetylgalaktosamin-6-sulfátsulfatáza
(Morquio A)
mukopolysacharidóza IVB -galaktosidáza
(Morquio B)
mukopolysacharidóza VI arylsulfatáza B
(Maroteaux-Lamy)
mukopolysacharidóza VII -glukuronidáza
(Sly)
GM1-gangliosidóza
-galaktosidáza
Sfingolipidózy
Glykoproteinózy
NCL
Jiné
metachromatická
arylsulfatáza A
leukodystrofie
Gaucherova choroba
glukocerebrosidáza, kyselá -glukosidáza
Fabryho choroba
-galaktosidáza
Krabbeho choroba
galaktocerebrosidáza
Niemann-Pickova choroba kyselá sfingomyelináza
typ A/B
GM2-gangliosidóza,
-hexosaminidáza
Sandhoff
GM2-gangliosidóza, Tay-hexosaminidáza A
Sachs
choroba ze střádání esterů kyselá lipáza
cholesterolu
Wolmanova choroba
Niemann-Pickova choroba porucha intracelulárního transportu
typ C
cholesterolu (NPC 1, HE1 protein)
prosaposinový deficit
deficit proteinových aktivátorů A,B,C,D
skupiny lysosomálních glykosidáz
-mannosidóza
-mannosidáza
-mannosidóza
-mannosidáza
fukosidóza
-L-fukosidáza
Schindlerova choroba
-N-acetyl-D-galaktosaminidáza
glykogenóza II, Pompe
kyselá -1,4-glukosidáza
sialidóza, mukolipidóza I -neuraminidáza
mukolipidóza II, III (I-cell N-acetylglukosaminfosfotransferáza
disease)
mukolipidóza IV
porucha endosomálního transportu lipidů
(mukolipin 1)
choroba ze střádání
porucha lysosomálního membránového
kyseliny sialové (ISSD) transportu kyseliny sialové
neuronální
palmitoylproteinthioesteráza
ceroidlipofuscinóza typ 1
(NCL)
neuronální
tripeptidylpeptidáza I
ceroidlipofuscinóza typ 2
(NCL)
neuronální
defekt funkční nedefinovaného
ceroidlipofuscinóza typ 3- nekatalytického proteinu
7 (NCL)
X-vázaná ichtyóza
steroidsulfatáza
10.3. Metabolické vyšetření na úrovni DNA
Zdrojem DNA mohou být leukocyty nebo lymfocyty periferní krve, kultivované fibroblasty,
buňky ústní sliznice, sliny, močový sediment, novorozenecký krevní papírek a bioptický
nebo nekroptický materiál, pro prenatální vyšetření téţ nativní a kultivované choriové klky a
kultivované amniocyty.
Nejčastěji pouţívaným materiálem pro isolaci DNA je nesráţlivá krev odebraná za sterilních
podmínek (NK EDTA, 3–4 ml). Pro izolaci RNA se pouţívá nesráţlivá krev odebraná za
sterilních podmínek (NK EDTA, 7–9 ml). Zkumavky musí být doručeny do laboratoře v co
nejkratším čase při laboratorní teplotě (nechladit!).
U některých genů (viz seznam) je moţné z buněk periferní krve vyšetřit i transkript
(komplementární DNA, cDNA). Vyšetření transkriptu probíhá aţ následně po získání
výsledků z vyšetření genomové DNA a ve většině případů není nutné. Proto dáváme přednost
vyšetření transkriptu z nového náběru. V případě rizika, ţe pacient bude pro nový náběr
nedostupný, je vhodné odebrat dalších 7,5 ml krve jiţ při prvním náběru.
S výjimkou genu HADHA, u kterého je vyšetřována pouze prevalentní mutace, je
analyzována celá kódující sekvence genu spolu s přiléhajícími intronovými oblastmi.
Pokud byly v rodině mutace jiţ identifikovány, obvykle se vyšetřují pouze tyto známé
mutace.
Všechna molekulárně genetická vyšetření jsou indikována přísně individuálně a jsou
prováděna pouze po předchozí telefonické dohodě. K ţádance je nutné přiloţit řádně
vyplněný a podepsaný informovaný souhlas vyšetřované/ho (zákonného zástupce)
s genetickým laboratorním vyšetřením (moţno stáhnout na www.udmp.cz).
U podezření na diagnózu CADASIL poţadujeme i osobní a rodinnou anamnézu pacienta.
Tabulka 28 : Kontakty pro molekulárně genetické vyšetření
Vyšetření
Laboratoř
Telefon
Kontaktní osoba
Molekulárně
Laboratoř
224 967 701
genetické
DNA
224 967 680
vyšetření
diagnostiky
Tabulka 29: Seznam vyšetření – Geny
Onemocnění
Vyšetření
Adrenoleukodystrofie, X-vázaná
gDNA, cDNA
Alexanderova choroba
gDNA, cDNA
Amyloidóza z depozice Apo AI
gDNA
Amyloidóza z depozice SAA1
gDNA
Amyloidóza z depozice TTR
gDNA
CADASIL
gDNA
Canavanové choroba
gDNA
Creutzfeldt-Jakobova choroba
gDNA
Danonova choroba
gDNA, cDNA
Deafness Dystonia Syndrome
gDNA, cDNA
(Mohr-Tranebjaerg syndrome)
Deficit acyl-CoA dehydrogenázy gDNA
mastných kyselin se
Gen
ABCD1
GFAP
ApoA1
SAA1
TTR
NOTCH3
ASPA
PRNP
LAMP2
TIMM8A
(DDP1)
ACADM
MIM
300100
203450
105200
104750
105210
125310
271900
123400
300257
300356
201450
středně dlouhým řetězcem (deficit
MCAD)
Deficit adenylosukcinátlyázy
(deficit ADSL)
Deficit mitochondriální
acetoacetyl-CoA thiolázy ( ketothiolázy)
Deficit biotinidázy
Deficit cystathionin -syntázy
Deficit
hypoxantinfosforibosyltransferázy
(deficit HPRT, Lesch-Nyhanův
syndrom, Kelley-Seegmillerův
syndrom)
Deficit 3-hydroxyacyl-CoA
dehydrogenázy mastných kyselin
s dlouhým řetězcem (deficit
LCHAD)
Deficit syntázy reduktázy (deficit
MTRR)
Deficit
metylentetrahydrofolátreduktázy
(deficit MTHFR)
Deficit
ornithintranskarbamoylázy
(deficit OTC)
Deficit prosaposinu a saposinů A,
B, C a D
Fabryho choroba
Familiární juvenilní
hyperurikemické nefropatie
(FJHN) atypické
Gaucherova choroba
gDNA, cDNA
ADSL
103050
jen cDNA
ACAT1, T2
203750
gDNA
gDNA
gDNA, cDNA
BTD
CBS
HPRT1
253260
603174
300322
gDNA
(pouze
prevalentní
mutace)
gDNA
HADHA
609016
MTRR
236270
gDNA
MTHFR
236250
gDNA
OTC
311250
gDNA, cDNA
PSAP
611721
gDNA, cDNA
gDNA
GLA
REN
HNF1B
301500
613092
137920
gDNA
GBA
Glutarová acidurie typ I
GM2 gangliosidóza typ II
(Sandhoffova choroba)
3-Hydroxy-3-metylglutarová
acidurie
Kardiomyopatie z dysfunkce
AMP-aktivované proteinkinázy
gDNA
jen cDNA
GCDH
HEXB
230800
230900
608013
231000
231005
231670
268800
gDNA, cDNA
HMGCL
246450
gDNA, cDNA
PRKAG2
Krabbeho choroba
Metachromatická leukodystrofie
Metylmalonová acidurie
z deficitu cblA
gDNA
gDNA, cDNA
gDNA, cDNA
GALC
ARSA
MMAA
600858
261740
194200
245200
250100
251100
Metylmalonová acidurie
z deficitu cblB
Metylmalonová acidurie z
deficitu metylmalonyl-CoA
mutázy
Mukopolysacharidóza typ I
gDNA, cDNA
MMAB
251110
gDNA, cDNA
MUT
251000
gDNA, cDNA
IDUA
Mukopolysacharidóza typ II
Mukopolysacharidóza typ IIIC
Myofibrilární myopatie
z dysfunkce desminu
Myofibrilární myopatie
z dysfunkce -B-krystalinu
Neuronální ceroidlipofuscinóza
typ 2
typ 3
typ 5
typ 6
typ 7
typ 8
Niemann-Pickova choroba typ
A/B
Niemann-Pickova choroba typ C1
Niemann-Pickova choroba typ C2
Onemocnění asociované s
uromodulinem
gDNA, cDNA
gDNA, cDNA
gDNA
IDS
HSGNAT
DES
607014
607015
607016
309900
252930
601419
gDNA
CRYAB
123590
gDNA, cDNA
TPP1 (CLN2)
204500
gDNA
CLN3
204200
gDNA, cDNA
CLN5
256731
gDNA, cDNA
CLN6
601780
gDNA, cDNA
610951
gDNA, cDNA
MFSD8
(CLN7)
CLN8
gDNA
SMPD1
gDNA, cDNA
gDNA, cDNA
gDNA
NPC1
NPC2
UMOD
Renální hypourikémie
Renální hypourikémie
Xantinurie typ I (deficit
xantindehydrogenázy)
gDNA
gDNA
gDNA
SLC2A9
SLC22A12
XDH
257200
607616
257220
607625
162000
603860
609886
612076
220150
278300
600143
10.4 Metabolické vyšetření na úrovni tkání
Všechna vyšetření tkání jsou indikována přísně individuálně a jsou prováděna pouze po
předchozí dohodě.
Tabulka 30: Kontakty pro vyšetření tkání
Vyšetření
Laboratoř
E-mail
Histologické,
Laboratoř
[email protected]
histochemické, patologie DMP
biochemické a
vyšetření
Biochemické
Biochemická
22496 7710
vyšetření
laboratoř
Enzymatické
Enzymologická
22496 7032
vyšetření
laboratoř
22496 7034
Molekulárně
Laboratoř DNA
22496 7701
genetické
diagnostiky
22496 7232
vyšetření
Kontaktní osoba
prof. MUDr. Milan Elleder, DrSc.
Lékař-konzultant
Ing. Helena Poupětová
Ing. Jitka Honzíková
Indikací k biopsii je:
1. koţní biopsie pro kultivaci fibroblastů (odběr a transport v kultivačním médiu nebo
v nouzi ve sterilním fyziologickém roztoku);
2. získání materiálu pro enzymatické vyšetření (není-li moţné či spolehlivé vyšetření
z buněk periferní krve);
3. histologické, histochemické a elektronmikroskopické vyšetření (je-li nutné pro
diagnostiku);
4. molekulárně genetické vyšetření (mitochondriální poruchy, jaderné geny, není-li moţné či
spolehlivé vyšetření z buněk periferní krve).
Pro diagnostiku DMP jsou nejčastěji odebírány vzorky kůţe (i pro kultivaci fibroblastů),
jater nebo svalu, vzácněji i myokardu, spojivky nebo jiných tkání.
Biopsie jako invazívní výkon by měla být provedena aţ po důkladném diferenciálně
diagnostickém rozboru, vyčerpání neinvazívních vyšetření a po konzultaci s laboratoří, kde
bude bioptický vzorek vyšetřován. Jen tak je moţné se vyvarovat opakovaným biopsiím.
Biopsie choria a odběr plodové vody jsou indikované pro prenatální diagnostiku DMP.
Postmortální odběr vzorků tkání (nekropsie) je nezbytné při podezření na DMP u náhlého,
neočekávaného nebo neodvratitelného úmrtí, viz téţ Kapitola 6.
Základní podmínkou pro kvalitní vyšetření zaslaného vzorku tkání je správné zpracování
vzorku po odběru a jeho správný transport do laboratoře. Viz Tabulka 31.
Tabulka 31: Zpracování vzorku po odběru
Vzorek
Zpracování vzorku po odběru
1. část
Fixace cca ½ vzorku při „pokojové“ teplotě:
vloţit vzorek do 4-10% paraformaldehydu
nebo
3% glutaraldehydu
Vhodné
na vyšetření:
histologické
2. část
Zmraţení cca ½ vzorku:
zmraţení nefixované tkáně
na vyšetření:
histochemické, biochemické a
molekulárně genetické
Fixovaný vzorek transportujte do laboratoře při „pokojové“ teplotě pouze po předchozí
dohodě.
Zmražení má být rychlé, promptní, vloţením vzorku do tekutého dusíku, zkapalněného
uhlovodíku, petroeteru zchlazeného suchým ledem nebo vloţením vzorku mezi částky
suchého ledu.
Zmraţený vzorek skladujte nejlépe při 80 °C (minimalizují se degradační procesy).
Zmraţený vzorek transportujte do laboratoře na suchém ledu pouze po předchozí dohodě.
Tabulka 32: Příklady indikací k biopsii
Tkáň
Vyšetření
kůţe
lysosomální střádání v potních ţlázkách
játra
aktivita glycin cleavage komplexu
játra
analýza cDNA genů, u nichţ neprobíhá
transkripce v periferních tkáních
sval
histologická a histochemická analýza
morfologie mitochondrií
ragged-red fibers
spotřeba kyslíku, produkce ATP
studie oxidativní fosforylace
analýza proteinů
mutace mitochondriální DNA
sval
lysosomální střádání glykogenu
myokard lysosomální střádání glykogenu
enzymatické vyšetření
spojivka krystaly cystinu
choriové enzymatické vyšetření
klky
molekulárně genetické vyšetření
Diagnóza
lysosomální poruchy
neketotická hyperglycinémie
deficit OTC
deficit OTC
mitochondriální poruchy
(poruchy pyruvát dehydrogenázového
komplexu, Krebsova cyklu, komplexů
oxidativní fosforylace)
heteroplasmie
prevalentní mutace
glykogenóza typu II
myokardiální podtyp
glykogenózy typu IX
cystinóza
prenatální diagnostika řady DMP
10.5 Novorozenecký screening DMP
Novorozenecký screening DMP se provádí u kaţdého novorozence v ČR vyšetřením suché
krevní kapky z novorozenecké screeningové kartičky metodou tandemové hmotnostní
spektrometrie.
Odběr krve u novorozence se provádí 48-72 hodin po narození.
Pravidla pro odběr krve, povinnosti laboratoří a zajištění péče o diagnostikované děti určuje
Metodický návod k zajištění celoplošného novorozeneckého laboratorního screeningu a
následné péče, který byl uveřejněn ve Věstníku MZ ČR 2009, Částka 6.
Novorozenecký screening DMP zahrnuje 10 DMP, viz Tabulka 33.
Tabulka 33: Seznam DMP vyšetřovaných v rámci novorozeneckého screeningu
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
Seznam DMP vyšetřovaných v rámci novorozeneckého screeningu
Fenylketonurie (PKU) a hyperfenylalaninémie (HPA)
Leucinóza (choroba javorového sirupu, MSUD)
Glutarová acidémie typ I (GA I)
Izovalerová acidémie (IVA)
Deficit acyl-CoA dehydrogenázy mastných kyselin se středně dlouhým řetězcem
(deficit MCAD)
Deficit 3-hydroxyacyl-CoA dehydrogenázy mastných kyselin s dlouhým řetězcem
(deficit LCHAD)
Deficit acyl-CoA dehydrogenázy mastných kyselin s velmi dlouhým řetězcem (deficit
VLCAD)
Deficit karnitinpalmitoyltransferázy I (deficit CPT I)
Deficit karnitinpalmitoyltransferázy II (deficit CPT II)
Deficit karnitinacylkarnitintranslokázy (deficit CACT)
Bliţší informace viz www.novorozeneckyscreening.cz.
10.6 Postmortální vyšetření DMP
Postmortální vyšetření se zaměřením na DMP probíhá v případě SIDS, náhlého,
neočekávaného nebo neodvratitelného úmrtí, pokud není dokončena diagnostika z hlediska
DMP.
Potřebné biologické vzorky a informace uvádí Tabulka 34.
Tabulka 34: Biologické vzorky a informace potřebné pro postmortální vyšetření DMP
Biologické vzorky a informace potřebné pro postmortální vyšetření DMP
1 Zamrazit 5 ml krevní plazmy, 5 ml plné krve, 20 ml moči, 1,5 ml likvoru
2 Suchá krevní kapka na novorozenecké screeningové kartičce (krevním papírku)
3 Odběr tkání (játra, sval, myokard), zajistit vzorky fixované i zamraţené, viz Kapitola
10.4 Metabolické vyšetření na úrovni tkání
4 Zaloţit tkáňovou kulturu fibroblastů, lze i 2-3 dny po smrti
5 Přiloţit epikrízu, zprávy, pitevní protokol
11. Léčba DMP
Cílem léčby DMP je zlepšení kvality ţivota, t.j. zmírnění důsledků metabolické dysfunkce,
prevence komplikací a zajištění přiměřeného somatického a psychosociálního vývoje.
Předpokladem správné léčby DMP je přesná a včasná diagnóza a znalost přirozeného průběhu
a patogeneze choroby. Léčba je vţdy komplexní a multidisciplinární.
Tabulka 35: Principy léčby DMP
Úroveň léčby
Léčba
Na úrovni
symptomatická a podpůrná
fenotypu
např. symptomatická medikamentosní aj. léčba, chirurgická léčba,
edukace, reţimová opatření, psychologická péče;
neřeší metabolickou podstatu onemocnění;
můţe zmírnit klinické symptomy a zlepšit kvalitu ţivota
omezení příjmu nebo vzniku toxických substrátů a patologických
metabolitů
např. prevence katabolismu u aminoacidopatií a organických acidurií,
bezlaktózová dieta u galaktosémie, sanace střevní flory metronidazolem
u propionové acidémie
eliminace toxických substrátů a patologických metabolitů
např. výměnná transfuze, hemofiltrace, vyuţití alternativních
Na úrovni
metabolických cest, např. podávání benzoátu a fenylacetátu při
metabolitu
hyperammonémii nebo penicillaminu u Wilsonovy choroby
(nutriční,
metabolické inhibitory
farmakologická) např. podávání allopurinolu při hyperurikémii (inhibice xantinoxidázy),
podávání NTBC u tyrosinémie I (inhibice hydroxyfenylpyruvátdioxygenázy)
náhrada deficitních produktů
např. podávání tyrosinu u fenylketonurie nebo argininu u poruch cyklu
močoviny
aktivace a stabilizace enzymů farmakologickými dávkami koenzymů
Na úrovni
(např. vitamíny)
dysfunkčního
např. podávání pyridoxinu u deficitu cystathionin -syntázy nebo
proteinu
thiaminu u leucinózy
náhrada deficitních enzymů
např. enzymoterapie u Gaucherovy choroby, Fabryho choroby
Na buněčné
transplantace orgánů a tkání (jater, ledvin, kostní dřeně)
úrovní
např. transplantace ledvin u cystinózy, transplantace kostní dřeně u
adrenoleukodystrofie
12. Genetické poradenství a prenatální diagnostika u DMP
Rodinám, v nichţ byla diagnostikována DMP, by mělo být poskytnuto genetické poradenství.
V rámci genetického poradenství ověřujeme diagnózu DMP stanovenou u probanda,
případně doporučíme její potvrzení na další úrovni; stanovujeme riziko heterozygotie nebo
homozygotie konzultandů a pokud to lze, zajistíme jejich vyšetření; stanovujeme riziko
postiţení plodu a zajišťujeme prenatální vyšetření.
První porada by měla být prekoncepční, aby byl dostatek času k zajištění potřebných
vyšetření. Není-li DMP kauzálně léčitelná a prenatální diagnostika je moţná, je prenatální
vyšetření indikováno při riziku postiţení plodu DMP vyšším neţ je riziko prenatálního
vyšetření.
Cílem prenatální diagnostiky je zjistit, zda je plod postiţen DMP, která se v geneticky
rizikové rodině vyskytuje. Podmínkou je stanovení správné diagnózy na příslušné úrovni u
probanda, moţnost prenatálního laboratorního vyšetření a ţádost rodičů plodu o vyšetření.
Prenatální diagnostika DMP se provádí standardními genetickými metodami (koncentrace
metabolitů v plodové vodě, aktivita enzymu v amniocytech nebo choriových klcích, metody
molekulárně genetické nebo histologické, histochemické nebo elektronmikroskopické).
Výběr optimální metody závisí na konkrétní DMP a na úrovních, na nichţ byla diagnóza u
probanda potvrzena. Odběr materiálu se provádí v 1. nebo 2. trimestru gravidity. Je-li to
diagnosticky moţné, dává se při vyšším riziku postiţení plodu přednost odběru na konci 1.
trimestru.
Specifická je problematika prenatální diagnostiky u mitochondriálních onemocnění.
13. Zdroje odborných informací
Tabulka 36: Internetové odkazy
Zdroj
Adresa
webová stránka Ústavu
www.udmp.cz
dědičných metabolických
poruch VFN
novorozenecký screening
www.novorozeneckyscreening.cz
databáze Metagene
www.metagene.de
databáze OMIM
www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=omim/
databáze Medline
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?DB=pubmed
Tabulka 37: Knižní publikace
Autor
Název knihy
J. Fernandes
Diagnostika a léčba dědičných metabolických poruch
(česky) Triton Praha
G.F. Hoffmann Dědičné metabolické poruchy (česky) Grada Praha
G.F. Hoffmann Inherited Metabolic Diseases: A Clinical Approach
N. Blau
Laboratory Guide to the Methods in Biochemical Genetics
J. Fernandes
Inborn Metabolic Diseases: Diagnosis and Treatment
S. Hannigan
Inherited Metabolic Diseases: A Guide to 100 Conditions
N. Blau
Physicians´s Guide to the Treatment and Follow-Up of
Metabolic Diseases
J.T.R. Clarke
A Clinical Guide to Inherited Metabolic Diseases
W. Nyhan
Atlas of Metabolic Diseases
N. Blau
Physicians´s Guide to the Laboratory Diagnosis of
Metabolic Diseases
Ch.R. Scriver
The Metabolic and Molecular Bases of Inherited Disease
Rok vydání
2008
2006
2009
2008
2007
2007
2006
2005
2005
2003
2001
14. Abecední seznam laboratorních vyšetření metabolitů prováděných v
ÚDMP
Název:
Typ metody:
Princip stanovení:
Materiál:
Statim:
Dostupnost:
Provádí:
Poznámky:
Jednotky:
Referenční meze:
Kritické hodnoty:
Indikace:
Interpretace:
Aminokyseliny (AMK) kvantitativně v séru/plazmě
kvantitativní, profilová
automatický analyzátor aminokyselin, ionexová chromatografie,
ninhydrinová detekce
sérum nebo plazma
oddělit nejlépe do 60 min. po odběru
vzorky určené pro diagnostiku DPM nutno odebrat v době, kdy nejsou
podávány i.v. aminokyseliny
ano
2 týdny
glutamin a glutamát jsou hodnoceny dohromady
kromě běţných AMK lze stanovit i AMK obvykle v séru /plazmě
nepřítomné - alloisoleucin, kys. argininojantarovou a její anhydridy,
cystathionin, fosfoetanolamin, homocystin, karnosin, metylhistidiny,
sarkosin aj.
interference - léky
sekundární a nespecifické odchylky - postprandiální odběr, parenterální
výţiva, hepatopatie, kontaminace, hemolýza, pozdní oddělení
séra/plazmy aj.
mol/l
podle interních norem
klinické symptomy – intolerance stravy, neobvyklé dietní zvyky,
zvracení, neprospívání, hypotonie, letargie, křeče, koma, mentální
retardace, mikrocefalie, ataxie, choreoatetóza, spastická paraparéza nebo
diplegie, poruchy chůze, problémy s učením, poruchy chování,
neuropsychiatrické symptomy, atrofie optiku, retinitis pigmentosa,
dysmorfie, atypický zápach, hepatomegalie, pankreatitis, tubulopatie,
tachypnoe, systémové kostní změny, atypické vlasy, koţní léze, akutní
dekompenzace;
laboratorní symptomy – metabolická acidóza, hyperammonémie,
hypoglykémie, ketonurie, vyšší anion gap, neutropenie, megaloblastická
anémie, deficit vitaminu B12 nebo folátů, hepatopatie, hypokreatininémie;
aminoacidopatie viz Interpretace
aminokyselina
se zvýšenou koncentrací aminokyseliny
alanin
DMP s laktátovou acidózou
DMP s hyperammonémií
alloisoleucin
leucinóza
deficit E3 podjednotky
arginin
argininémie
argininojantarová argininojantarová acidurie
kyselina
(argininosukcinát)
citrulin
cystathionin
fenylalanin
fosfoetanolamin
-aminomáselná
kyselina
(GABA,
-aminobutyrát)
glutamová
kyselina
(glutamát)
glutamin
glycin
Garant:
Název:
Typ metody:
Princip stanovení:
Materiál:
citrulinémie
argininojantarová acidurie
deficit -cystathionázy
fenylketonurie
poruchy metabolismu biopterinu
hypofosfatázie
deficit GABA transaminázy
glutamová acidémie
ketotická hyperglycinémie u organických acidurií
histidin
histidinémie
homocystin
deficit cblC, cblD a cblE
deficit cystathionin -syntázy
deficit metylentetrahydrofolátreduktázy (MTHFR)
hydroxyprolin
hydroxyprolinémie
isoleucin
leucinóza
karnosin
karnosinémie
leucin
leucinóza (choroba javorového sirupu, MSUD)
lysin
hyperlysinémie I
saccharopinurie
methionin
deficit methioninadenosyltransferázy
ornithin
gyrátová atrofie
HHH syndrom (hyperammonémie,
hyperornithinémie, homocitrulinurie)
prolin
hyperprolinémie I, II
sarkosin
sarkosinémie
tyrosin
tyrosinémie (I), II, III
tranzitorní neonatální hypertyrosinémie
valin
leucinóza
Zdeněk Čánský, Sylvie Šťastná
Aminokyseliny (AMK) kvantitativně v moči
moč
Statim:
Dostupnost:
Provádí:
Poznámky:
Jednotky:
Referenční meze:
Indikace:
Interpretace:
ano
2 týdny
kromě běţných AMK lze stanovit i AMK obvykle v moči nepřítomné a
další ninhydrin-positivní látky ( -aminoadipovou kyselinu,
argininojantarovou kyselinu a její anhydridy, aspartylglukosamin,
citrulin, -aminolevulovou kyselinu, fosfoethanolamin, homocystin,
hydroxyprolin, iminodipeptidy, ornithin, prolin, saccharopin, aj.);
interference – metabolity některých léků (2-merkaptoethansulfonát,
ampicilin, vigabatrin aj.)
mmol/mol kreatininu
viz aminokyseliny kvantitativně v séru/plasmě
aminokyselina
se zvýšeným vylučováním aminokyseliny
většina
Fanconiho syndrom
aminokyselin
klasická galaktosémie
tyrosinémie I
Loweho syndrom
hereditární intolerance fruktózy
vitamin D dependentní rachitida
neutrální
Hartnupova choroba
aminokyseliny
alanin
alloisoleucin
leucinóza
-aminoadipová
-aminoadipová acidurie
kyselina
( -aminoadipát)
arginin
argininémie
cystinurie
intolerance bílkovin s lysinurií (LPI)
argininojantarová
kyselina
(argininosukcinát)
asparágová kyselina dikarboxylová aminoacidurie
(aspartát)
aspartylglukosamin aspartylglukosaminurie
citrulin
citrulinémie
cystathionin
deficit -cystathionázy
cystin
cystinurie
tyrosinémie I
-aminolevulová
porfyrie
kyselina
( -aminolevulát)
fenylalanin
fenylketonurie
poruchy metabolismu biopterinu
fosfoethanolamin
kyselina aminomáselná
(GABA, aminobutyrát)
glutamin
glutamová kyselina
(glutamát)
glycin
Garant:
hypofosfatázie
hyperammonémie
hyperammonémie
dikarboxylová aminoacidurie
ketotická hyperglycinémie u organických acidurií
iminoglycinurie
histidin
histidinémie
homocitrulin
HHH syndrom (hyperammonémie,
hyperornithinémie, homocitrulinurie)
citrulinémie
argininémie
homocystin
deficit cblC, cblD a cblE
deficit metylentetrahydrofolátreduktázy (MTHFR)
hydroxyprolin
hydroxyprolinémie
iminoglycinurie
iminodipeptidy
deficit prolidázy
isoleucin
leucinóza
leucin
leucinóza
lysin
hyperlysinémie
cystinurie
saccharopinurie
methionin
deficit methioninadenosyltransferázy
ornithin
hyperornithinémie
cystinurie
prolin
iminoglycinurie
saccharopin
saccharopinurie
tryptofan
tryptofanurie
tyrosin
tyrosinémie I, II, III
tranzitorní neonatální hypertyrosinémie
valin
leucinóza
Název:
Typ metody:
Princip stanovení:
Materiál:
Statim:
Dostupnost:
Provádí:
Poznámky:
Jednotky:
Referenční meze:
Indikace:
Interpretace:
Garant:
Název:
Typ metody:
Princip stanovení:
Materiál:
Statim:
Dostupnost:
Provádí:
Poznámky:
Jednotky:
Referenční meze:
Indikace:
Interference:
Interpretace:
Aminokyseliny (AMK) kvantitativně v likvoru
likvor
ano
2 týdny
mol/l
susp. neketotická hyperglycinémie: psychomotorická retardace,
hypotonie, křeče;
susp. porucha biosyntézy serinu: kongenitální mikrocefalie,
psychomotorická retardace, křeče
aminokyselina
se zvýšenou koncentrací aminokyseliny
alanin
argininojantarová argininojantarová acidurie
kyselina
(argininosukcinát)
-aminomáselná
kyselina
(GABA,
-aminobutyrát)
glycin
aminokyselina
se sníženou koncentrací aminokyseliny
serin
poruchy biosyntézy serinu
Biotinidáza kvalitativně
kvalitativní
inkubace se substrátem n-biotynyl-PABA, naftolové činidlo, vizuální
hodnocení
suchá krevní kapka nebo sérový papírek
ne
3 pracovní dny
nelze z plazmy a nesráţlivé krve
fyziologická aktivita
provádí se u kaţdého poprvé vyšetřovaného pacienta
susp. deficit biotinidázy – viz Biotinidáza v séru kvantitativně
sulfonamidy
sníţenou aktivitu je nutno ověřit kvantitativní metodou;
riziko falešně pozitivního výsledku po transfuzi krve, erymasy a plazmy
Garant:
Název:
Typ metody:
Princip stanovení:
Materiál:
Statim:
Dostupnost:
Provádí:
Poznámky:
Jednotky:
Referenční meze:
Indikace:
Interference:
Interpretace:
Garant:
Název:
Typ metody:
Princip stanovení:
Materiál:
Statim:
Dostupnost:
Provádí:
Poznámky:
Jednotky:
Referenční meze:
Indikace:
Interpretace:
nebo preanalytickými vlivy - labilní enzym, moţnost poklesu aktivity
v čase
Petr Chrastina, Eva Košťálová
Biotinidáza kvantitativně
kvantitativní
inkubace se substrátem n-biotynyl-PABA, naftolové činidlo, fotometrické
stanovení, 546 nm
sérum
ne
5 pracovních dnů
nelze z plazmy a nesráţlivé krve
nmol/min/ml
> 5,4, heterozygoti 5,4 - 2,2, homozygoti < 2,2
susp. deficit biotinidázy - v různé kombinaci symptomy laboratorní
(intermitentní ataky ketoacidózy) a/nebo klinické: neurologické
(psychomotorická retardace, křeče, hypotonie, ataxie), koţní
(seborrhoická dermatitida, raš, alopecie), oční (atrofie optiku,
keratokonjunktivitida), respirační (tachypnoe, apnoe, stridor),
gastrointestinální (neprospívání, zvracení, průjem), imunologické
(recidivující infekty);
ověření deficitu biotinidázy zjištěného screeningovým vyšetřením
sulfonamidy
sníţená aktivita - primární dědičný deficit biotinidázy, nedonošení
riziko falešně pozitivního výsledku po transfuzi krve, erymasy a plazmy
nebo preanalytickými vlivy - labilní enzym, moţnost poklesu aktivity
v čase
Petr Chrastina, Eva Košťálová
Disulfidy
semikvantitativní
Brandův orientační test s kyanidem sodným a nitroprussidem sodným
moč
ne
2 pracovní dny
cystin je relativně nerozpustný a po vymočení krystalizuje na dně nádoby;
před odlitím vzorku moči je nutné celý objem moči v nádobě důkladně
promíchat, aby v odlitém vzorku i ve zbylé moči v nádobě byla stejná
koncentrace cystinu !!
arb. j.
0
urolitiáza, zvl. familiární, susp. cystinurie;
screeningové vyšetření cystinurie;
Garant:
Název:
Typ metody:
Princip stanovení:
Materiál:
Statim:
Dostupnost:
Provádí:
Poznámky:
Jednotky:
Referenční meze:
Indikace:
Interpretace:
Garant:
Název:
Typ metody:
Princip stanovení:
Materiál:
Statim:
Dostupnost:
zachytí zvýšené vylučování cystinu u cystinurie i v rámci nespecifické
hyperaminoacidurie;
pozitivní nález nutno ověřit kvantitativním stanovením aminokyselin
v moči;
riziko falešně negativního výsledku:
- není-li moč dostatečně zamíchaná a jako vzorek je odlit pouze
supernatant
riziko falešně pozitivního výsledku:
- ve výrazně koncentrované moči
- nespecifická reakce s jinými disulfidy v moči (homocystin u
homocystinurie, kobalaminových deficitů a cystathioninurie; glutathion u
poruch -glutamylového cyklu, při léčbě N-acetylcysteinem,
penicilaminem, 2-merkaptoetansulfonátem a captoprilem aj.)
- při výrazné ketonurii
- není-li moč dostatečně zamíchaná a je vyšetřován zbytek moči na dně
nádoby s krystaly cystinu
Fenylalanin a tyrosin
kvantitativní
ninhydrinová detekce, tzv. krátký program
nesráţlivá krev
ano
5 pracovních dnů
mol/l
fenylalanin < 120 μmol/l; tyrosin < 180 μmol/l
monitorování koncentrací fenylalaninu a tyrosinu u pacientů
s hyperfenylalaninémií/fenylketonurií (HPA/PKU);
stanovení koncentrace fenylalaninu a tyrosinu u novorozenců
zachycených novorozeneckým screeningem HPA/PKU;
stanovení koncentrace fenylalaninu a tyrosinu u ţen zachycených
screeningem HPA gravidních
hodnocení dietní kompenzace podle věku pacienta;
potvrzení či vyloučení HPA u novorozenců a gravidních
Galaktitol
kvantitativní
GC, trimethylsilyl-deriváty, vnitřní standard manoheptulóza, extrakce do
hexanu
moč
ano
5 pracovních dnů
Provádí:
Poznámky:
Jednotky:
Referenční meze:
Kritické hodnoty:
Indikace:
Interpretace:
Garant:
Název:
Typ metody:
Princip stanovení:
Materiál:
Statim:
Dostupnost:
Provádí:
Poznámky:
Jednotky:
Referenční meze:
Kritické hodnoty:
Indikace:
Interpretace:
Garant:
Název:
Typ metody:
Princip stanovení:
mmol/mol kreatininu
Věk
Vylučování
0 – 1 měsíc
< 90
1 měsíc – 1 rok
< 80
1 – 2 roky
< 22
2 – 15 let
< 20
> 15 let
< 10
> 200 mmol/mol kreatininu
susp. galaktosémie - u novorozence po expozici laktózou stav
připomínající sepsi s hepatopatií a hypoglykémií s rozvojem akutního
jaterního selhání, v pozdějším věku katarakta, hepatopatie, neprospívání,
mentální retardace
masivně zvýšené vylučování – galaktosémie, zvl. klasická galaktosémie;
diagnózu typu galaktosémie je nutno ověřit enzymatickým vyšetřením
mírně aţ středně zvýšené vylučování – hepatopatie
riziko falešně negativního výsledku při nedostatečné expozici laktózou
Petr Hornik, Sylvie Šťastná
semikvantitativní
extrakce isopropanolem, TLC, detekce kys. p-aminobenzoovou (PABA)
suchá krevní kapka
ano
5 pracovních dnů
falešně negativní nálezy při vyšetření do 3 měsíců od krevní transfuze
mmol/l
galaktóza < 0,5 mmol/l
galaktóza-1-fosfát < 0,5 mmol/l
galaktóza > 0,5 mmol/l
galaktóza-1-fosfát > 0,5 mmol/l
susp. galaktosémie - u novorozence po expozici laktózou stav
připomínající sepsi s hepatopatií a hypoglykémií s rozvojem akutního
jaterního selhání, v pozdějším věku katarakta, hepatopatie, neprospívání,
mentální retardace
zvýšená koncentrace - galaktosémie
hraniční aţ mírně zvýšená koncentrace - hepatopatie
diagnózu typu galaktosémie je nutno ověřit enzymatickým vyšetřením
riziko falešně negativního výsledku při nedostatečné expozici laktózou
kvalitativní (HPTLC); kvantitativní (MS/MS)
HPTLC: extrakce směsí chloroformu a metanolu, detekce orcinolem;
Materiál:
Statim:
Dostupnost:
Provádí:
Poznámky:
Jednotky:
Referenční meze:
Indikace:
Interpretace:
Garant:
Název:
Typ metody:
Princip stanovení:
Materiál:
Statim:
Dostupnost:
Provádí:
Poznámky:
Jednotky:
Referenční meze:
Indikace:
Interpretace:
Garant:
Název:
Typ metody:
Princip stanovení:
MS/MS: přímý nástřik naředěné moči
moč ranní celá porce včetně sedimentu;
při přelévání moči do jiné nádoby je nutné celý objem moči v původní
nádobě důkladně promíchat a teprve poté přelít do nádoby, ve které bude
moč transportována
ne
3 týdny
Enzymatická laboratoř (HPTLC), Biochemická laboratoř (MS/MS)
susp. Fabryho choroba – bolesti nebo parestesie v končetinách,
angiokeratomy, hypohidróza, korneální zákaly, postiţení srdce, ledvin,
CMP
specifický nález pro klasický fenotyp Fabryho choroby;
muţi s kardiální formou mají fyziologický nález;
ţeny-heterozygotky mohou mít fyziologický nález;
při současném zvýšení exkrece sulfatidů se můţe jednat o deficit saposinu
B (dříve SAP1) nebo deficit prosaposinu (prekursor saposinů A,B,C,D) viz Sulfatidy
Jana Ledvinová, Sylvie Šťastná
Glykogen
kvantitativní
enzymatické spektrofotometrické stanovení, amyloglukosidáza,
hexokináza/glukosa-6-fosfát dehydrogenáza, 340 nm
nesráţlivá krev v EDTA, vyšetření se provádí z izolovaných erytrocytů
ne
2 týdny
mg/l
norma < 100, hraniční 100-150, patologie > 150
susp. jaterní glykogenóza (GSD)
zvýšená aţ výrazně zvýšená koncentrace - u GSD III
mírně zvýšená koncentrace - můţe být u GSD VI a jaterní formy GSD IX
fyziologická koncentrace - u ostatních GSD
riziko falešně negativního nálezu – po transfuzi krve nebo erymasy
riziko falešně pozitivního nálezu – u pacientů na protrahované
parenterální výţivě
Petr Chrastina, Sylvie Šťastná
Guanidinoacetát (GAA), kreatin (CR) a kreatinin (kreat.)
kvantitativní
MS/MS s vyuţitím derivatizace (butylace) a pouţitím značených
standardů
Materiál:
Statim:
Dostupnost:
Provádí:
Poznámky:
Jednotky:
Referenční meze:
Indikace:
Interpretace:
Garant:
Název:
Typ metody:
Princip stanovení:
Materiál:
Statim:
Dostupnost:
Provádí:
Poznámky:
Jednotky:
Referenční meze:
Kritická hodnota:
Indikace:
Interpretace:
moč
ne
2 týdny
nejlépe 12 nebo 24 hodinový sběr
kvantifikace všech tří analytů současně
mmol/mol kreatininu
věk
GAA
CR
GAA/CR CR/kreatinin
0-15 let 5-200
4-1200
do 10
do 2,1
nad 15 let 3-120
3-800
do 10
do 2,1
při klinické nebo laboratorní symptomatologii vedoucí k podezření na
poruchu biosyntézy nebo transportu kreatinu:
klinické symptomy – mentální/psychomotorická retardace/regres,
porucha vývoje řeči, hypotonie, extrapyramidové příznaky, epilepsie;
laboratorní symptomy – sníţená koncentrace kreatininu v séru, nízká
koncentrace kreatinu při vyšetření MRS mozku
vyšetření slouţí k diagnostice poruch biosyntézy a transportu kreatinu:
deficit guanidinoacetátmetyltransferázy (GAMT):
↑ GAA, ↓ (n) CR, ↑ GAA/CR
deficit argininglycinamidinotransferázy (AGAT):
↓ GAA, ↓ (n) CR
deficit přenašeče kreatinu (CRTR):
(n) GAA, ↑ CR, ↑ CR/kreatinin;
nespecifické nálezy: sekundární deficit kreatinu, nadměrný přísun
kreatinu ve stravě, renální dysfunkce;
mírná nadprodukce GAA můţe být u deficitu Sadenosylhomocysteinhydrolázy;
heterozygotky pro deficit CRTR mohou mít fyziologický nález
Josef Bártl, Eva Košťálová
Homocitrulin
kvantitativní
ninhydrinová detekce, zkrácený program
moč
ne
2 týdny
mmol/mol kreatininu
0-5
susp. HHH syndrom (hyperammonémie, hyperornithinémie a
homocitrulinurie)
zvýšené vylučování - HHH syndrom;
mírně zvýšené vylučování moţné u citrulinémie, argininjantarové acidurie
a argininémie;
hraniční aţ mírně zvýšené vylučování alimentárního původu zvl. u
Garant:
Název:
Typ metody:
Princip stanovení:
Materiál:
Statim:
Dostupnost:
Provádí:
Poznámky:
Jednotky:
Referenční meze:
Kritické hodnoty:
Indikace:
kojenců
kvantitativní
fotometricky: enzymatická metoda, pro rutinní diagnostiku;
HPLC: redukce TCEP, derivatizace SBD-F, fluorimetrická detekce, pro
monitorování pacientů s definovanou hyperhomocysteinémií;
EDTA plazma; sérum je méně vhodné, lze ho pouţít pro orientační
vyloučení střední a těţké hyperhomocysteinémie;
fotometricky: ne;
HPLC: moţnost rychlého vyšetření po předchozí dohodě u
monitorovaných pacientů v rámci kolemoperační péče;
fotometricky: 3 pracovní dny;
HPLC: 2 týdny;
nesráţlivou krev odebranou do EDTA dopravit do 1 hodiny do laboratoře
k separaci plazmy (zkumavka částečně ponořená do vody s ledem);
při předpokládaném transportu krve po odběru delším neţ 1 hodina je
nutné krev zcentrifugovat, plazmu odsát ihned po centrifugaci a zamrazit,
k vyšetření poslat zamraţenou plazmu;
nelze vyšetřovat hemolytické a silně lipemické vzorky: hemoglobin nad 3
g/l, TG nad 10 g/l, bilirubin nad 0,2 g/l;
mol/l
věk
koncentrace
< 15 let
7 – 10
15 - 65 let
7 – 15
> 65 let
7 – 20
gravidita
7 – 10
po menopauze
7 – 20
< 3,5 mol/l; ≥ 50 mol/l
A) marfanoidní habitus, včetně subluxace či luxace čočky (k dif.dg.
Marfanova syndromu a homocystinurie);
B) tromboembolické příhody nejasné etiologie (k dif.dg. střední či těţké
hyperhomocystinemie jako příčiny ţilních trombóz);
C) neurologické poruchy s postiţením bílé hmoty (k dif.dg. remetylačních
forem homocystinurie);
D) makrocytární a megaloblastová anémie nejasné etiologie (k dif.dg.
remetylačních forem homocystinurie);
E) metylmalonová acidurie;
F) psychomotorická retardace a encefalopatie nejasné etiologie;
G) veganská strava;
H) indikace k vyšetřování mírně zvýšených koncentrací celkového
homocysteinu u kardiovaskulárních onemocnění je kontroverzní a je
podrobněji uvedena v publikaci:
Refsum H et al.: Facts and recommendations about total homocysteine
determinations: an expert opinion; Clin Chem 2004 Jan;50(1):3-32;
Interpretace:
Garant:
Název:
Typ metody:
Princip stanovení:
Materiál:
Statim:
Dostupnost:
Provádí:
Poznámky:
Jednotky:
Referenční meze:
Kritická hodnota:
Indikace:
Interpretace:
Garant:
I) chronické selhání ledvin a metabolický syndrom
těţká hyperhomocysteinémie (nad 100 mol/l):
klasická homocystinurie z homozygotního deficitu cystathionin -syntázy
(CBS); homozygotní deficit enzymů remetylační cesty metylentetrahydrofolát reduktáza (MTHFR), methioninsyntáza, poruchy
syntézy metylkobalaminu);
sekundárně při deficitu vitaminů (folátů, vitaminu B12), při renální
insuficienci;
střední hyperhomocysteinémie (nad 30 mol/l):
mírnější varianty homozygotních genetických deficitů zmíněných výše;
deficit cystathioninázy; deficit SAH hydrolázy;
získané příčiny: renální insuficience, deficit folátu, B6, B12, podávání
metotrexátu, fibrátů a jiné;
mírná hyperhomocysteinémie (od hranice referenčního rozmezí do 30
mol/l):
běţné polymorfismy jako např. MTHFR A222V, deficit vitaminů, lékové
interference;
hypohomocysteinémie (< 3,5 mol/l):
deficit sulfitoxidázy;
Václava Mašková, Josef Bártl, Viktor Koţich
3-Hydroxybutyrát
kvantitativní
enzymatické spektrofotometrické stanovení, 340 nm, 3-hydroxybutyrát
dehydrogenáza, NAD
krev
ne
5 pracovních dnů
odběr heparinizované krve bez ischemizace končetiny do dvojnásobného
objemu studené 8% kys. chloristé, důkladně protřepat, transport
zkumavky v malém mnoţství vody s ledem, centrifugovat, odsát
deproteinát;
společný odběr pro stanovení laktátu, pyruvátu a 3-hydroxybutyrátu
mmol/l
< 1,5 (na lačno)
< 0,2 (po jídle)
≥ 3,0
ketonurie, ketóza, ketoacidóza
fyziologická ketóza - hladovění (i fyziologické hladovění přes noc), mizí
po najedení
patologická ketóza - primární poruchy ketolýzy
nepřítomnost ketózy event. jen mírná ketóza po prolongovaném hladovění
- primární poruchy ketogeneze, bývá u některých poruch oxidace
mastných kyselin
Václava Mašková, Sylvie Šťastná
Název:
Typ metody:
Princip stanovení:
Materiál:
Statim:
Dostupnost:
Provádí:
Poznámky:
Jednotky:
Referenční meze:
Karnitin volný, celkový, acylovaný,
poměr acylovaný/volný karnitin v séru
kvantitativní
radiometrické enzymatické stanovení, C14-acetylkarnitin,
karnitinacetyltransferáza
stanovení celkového karnitinu po alkalické hydrolýze
sérum, plazma
ne
2 týdny
FC volný karnitin
TC celkový karnitin
AC acylovaný karnitin
acylovaný karnitin = rozdíl celkového a volného karnitinu
poměr AC/FC = poměr acylovaný karnitin/volný karnitin
mol/l
Volný karnitin v séru
věk
koncentrace
0 – 1 den
11,5 –36,0
1 den – 1 týden
10,1 – 21,0
1 – 4 týdny
12,3 – 46,2
4 týdny – 1 rok
26,9 – 49,0
1 – 6 let
24,3 – 62,5
6 – 10 let
21,7 – 66,4
10 – 17 let
21,7 – 64,5
> 17 let
25,4 – 54,1
Celkový karnitin v séru
věk
koncentrace
0 – 1 den
23,3 – 67,9
1 den – 1 týden
17,4 – 40,6
1 – 4 týdny
18,5 – 58,7
4 týdny – 1 rok
38,1 – 68,0
1 – 6 let
34,6 – 83,6
6 – 10 let
27,8 – 82,9
10 – 17 let
33,7 – 77,0
> 17 let
33,7 – 77,5
Karnitin acylovaný v séru
věk
0 – 1 den
1 den – 1 týden
1 – 4 týdny
4 týdny – 1 rok
1 – 6 let
6 – 10 let
10 – 17 let
nad 17 let
koncentrace
7,0 – 36,6
2,9 – 23,8
4,1 – 14,5
7,4 – 19,0
4,0 – 28,3
3,1 – 32,1
3,7 – 29,2
5,4 - 30,1
Poměr acylovaný/volný karnitin v séru
Indikace:
Interpretace:
Garant:
Název:
Typ metody:
Princip stanovení:
Materiál:
Statim:
Dostupnost:
Provádí:
Poznámky:
Jednotky:
Referenční meze:
věk
hodnota
< 1 týden
0,1 – 1,44
> 1 týden
0,1 – 0,9
susp. porucha transportu karnitinu nebo -oxidace mastných kyselin ataky hypoglykémie při hladovění nebo zvýšené zátěţi organismu,
s hepatomegalií a hepatopatií, hypertrofická nebo dilatační
kardiomyopatie, myopatický syndrom, svalová slabost, ataky
rhabdomyolýzy při fyzické zátěţi, SIDS, Reye-like ataky, maternální
HELLP syndrom (hypertension, elevated liver enzymes, low platelets) a
AFLP syndrom (acute fatty liver pregnancy syndrome);
susp. sekundární karnitinový deficit - u organických acidurií, u pacientů
na nízkobílkovinné dietě, u pacientů na léčbě valproátem, u pacientů na
dlouhodobé parenterální výţivě, při poruchách příjmu potravy, při ketose
a ketoacidóze;
monitorování u pacientů na suplementaci karnitinem,
výrazně sníţená koncentrace volného a celkového karnitinu - u
primárního karnitinového deficitu;
zvýšená koncentrace volného a celkového karnitinu se sníţeným podílem
acylovaného karnitinu – u deficitu CPT I (karnitinpalmitoyltransferázy I);
sekundární karnitinový deficit s normálním nebo zvýšeným podílem
acylovaných karnitinů - u všech ostatních poruch transportu karnitinu a oxidace mastných kyselin, u organických acidurií, u poruch respiračního
řetězce, u pacientů na nízkobílkovinné dietě, u pacientů na léčbě
valproátem, u pacientů na dlouhodobé parenterální léčbě, při poruchách
příjmu potravy, při ketóze a ketoacidóze;
nálezy mohou být intermitentní;
vyšetření je nutné opakovat v atace dekompenzace
Karnitin volný, celkový, acylovaný,
poměr acylovaný/volný karnitin v moči
kvantitativní
radiometrické enzymatické stanovení, 14C-acetylkarnitin,
karnitinacetyltransferáza
stanovení celkového karnitinu po alkalické hydrolýze
moč
ne
2 týdny
FC volný karnitin
TC celkový karnitin
AC acylovaný karnitin
acylovaný karnitin = rozdíl celkového a volného karnitinu
poměr AC/FC = poměr acylovaný karnitin/volný karnitin
mmol/mol kreatininu
Karnitin volný, celkový a acylovaný v moči
100 – 1000
Poměr acylovaný karnitin/volný karnitin v moči
Indikace:
Interpretace:
Garant:
Název:
Typ metody:
Princip stanovení:
Materiál:
Statim:
Dostupnost:
Provádí:
Poznámky:
Jednotky:
Referenční meze:
Indikace:
Interpretace:
Garant:
Název:
Typ metody:
Princip stanovení:
Materiál:
Statim:
Dostupnost:
Provádí:
Poznámky:
< 3,5
při odchylkách ve vyšetření karnitinu v séru
normální aţ zvýšený podíl acylovaných karnitinů - u poruch transportu
karnitinu a poruch -oxidace mastných kyselin, u některých organických
acidurií, u pacientů na terapii valproátem, při ketonurii
-Ketokyseliny
semikvantitativní
orientační test s 2,4-dinitrofenylhydrazinem
moč
ano
2 pracovní dny
zkouška je pozitivní v přítomnosti -ketokyselin v moči, je nespecifická;
přítomnost ketolátek se odstraňuje zahřátím;
falešně pozitivní nález - při glykosurii a ve výrazně koncentrované moči
falešně negativní nález – v málo koncentrované moči, mimo ataku obtíţí
u intermitentní formy leucinózy
arb. j.
0
susp. leucinóza – těţká forma: u novorozence po krátkém
bezpříznakovém období progredující encefalopatie (porucha vědomí,
problémy s krmením, tonusové změny, křeče, edém mozku),
existují i mírnější a intermitní formy v pozdějším věku s atakami
dekompenzace, typický zápach moči;
susp. deficit E3 podjednotky - výrazný hypotonický syndrom a ataky
laktátové acidózy, psychomotorická retardace, mozečkové příznaky;
provádí se u kaţdého poprvé vyšetřovaného pacienta, u všech pacientů
v atace dekompenzace
pozitivní nález je doplněn kvantitativním vyšetřením (aminokyseliny
v séru/plasmě, laktát v krvi a organické kyseliny v moči, event. poté
cílené enzymatické vyšetření)
Zdeněk Čánský, Eva Košťálová
Kreatinin v séru, plazmě
kvantitativní
enzymatická fotometrická metoda
sérum, EDTA plazma
ano
3 pracovní dny
vliv materiálu:
bilirubin do 440 μmol/l nemá vliv na falešné sníţení výsledku;
hemoglobin do 7 g/l nemá vliv na falešné zvýšení výsledků;
Jednotky:
Referenční meze:
Kritické hodnoty:
Indikace:
Interpretace:
Garant:
Název:
Typ metody:
Princip stanovení:
Materiál:
Statim:
Dostupnost:
Provádí:
Poznámky:
Jednotky:
Referenční meze:
Indikace:
Interpretace:
Garant:
triacylglyceroly do 17 mmol/l a kyselina askorbová do 9 mmol/l
neinterferují
mol/l
věk
koncentrace
0 – 5 týdnů
12 – 48
5 týdnů - 1 rok
18 – 55
1 rok – 15 let
26 – 80
15 let – 18 let
26 – 90
muţi nad 18 let
63 – 104
ţeny nad 18 let
46 – 90
0 – 15 let
> 150 mol/l
nad 18 let
> 300 mol/l
doplňuje vyšetření kyseliny močové pro výpočet indexů (index dle
Stapletona, exkreční frakce);
susp. porucha syntézy kreatinu (mentální/psychomotorická
retardace/regres, porucha vývoje řeči, hypotonie, extrapyramidové
příznaky, epilepsie, autistické příznaky)
sníţená koncentrace - primární porucha syntézy kreatinu;
sekundárně sníţená koncentrace - úbytek svalové hmoty, postiţení jater;
zvýšená koncentrace - nefropatie, rhabdomyolýza, zmnoţení svalové
hmoty
Václava Mašková, Eva Košťálová
Kreatinin v moči
kvantitativní
Jaffé reakce bez deproteinace - kinetické, fotometrické stanovení
moč
ano
1 pracovní den
vliv materiálu - stanovení v moči mohou ovlivnit Jaffé pozitivní
chromogeny - např. acetoacetát, 2-oxoglutarát, pyruvát, hippurát a
askorbát ve vysokých koncentracích;
koncentrace kreatininu v moči je ovlivněna pitným reţimem, mnoţstvím
svalové hmoty, funkcí ledvin;
koncentrace kreatininu < 1 mmol/l - sniţuje přesnost kvantifikace látek
vylučovaných močí, výsledky některých semikvantitativních metod
mohou být falešně negativní;
koncentrace kreatininu > 10-15 mmol/l - výsledky některých
semikvantitativních metod mohou být falešně pozitivní
mmol/l
0,6 – 15,0
provádí se v kaţdém vzorku moče pro standardizaci vylučování
vyšetřovaných analytů do moči
Václava Mašková, Eva Košťálová
Název:
Typ metody:
Princip stanovení:
Materiál:
Statim:
Dostupnost:
Provádí:
Poznámky:
Jednotky:
Referenční meze:
Indikace:
Interpretace:
Garant:
Název:
Typ metody:
Princip stanovení:
Materiál:
Statim:
Dostupnost:
Provádí:
Poznámky:
Jednotky:
Referenční meze:
Indikace:
Interpretace:
Garant:
Název:
Typ metody:
Princip stanovení:
Materiál:
Statim:
Dostupnost:
Provádí:
Poznámky:
Kyselina fenylpyrohroznová
semikvantitativní
Føllingův orientační test s chloridem ţelezitým
moč
ne
2 pracovní dny
nespecifická zkouška - k nespecifickým barevným reakcím dochází i
s metabolity léků (salicylát, p-aminosalicylát, antipyrin atd.) a s dalšími
látkami (4-hydroxyfenylpyruvát, větvené -ketokyseliny,
imidazoylpyruvát, homogentisát aj.)
arb. j.
0
susp. fenylketonurie;
provádí se u kaţdého poprvé vyšetřovaného pacienta (jako součást
screeningu při dodání dostatečného mnoţství moče)
pozitivní nález při vysoké koncentraci fenylalaninu v krvi (cca nad 1200
mol/l) u klasické fenylketonurie;
pozitivní nález je doplněn kvantitativním vyšetřením fenylalaninu v
aminokyselinách v séru
kvantitativní
hmotnostní spektrometrie s izotopovým zřeďováním, extrakce do
ethylacetátu, trimethylsilylace, vnitřní standard deuterovaná kyselina
metylmalonová
plazma
ano
2 týdny
mol/l
0
monitorování pacientů s metylmalonovou acidémií
monitorování pacientů s metylmalonovou acidémií
Lucia Krouská, Eva Košťálová
Kyselina močová
kvantitativní
enzymatické fotometrické stanovení, 546 nm, urikáza, peroxidáza
sérum, EDTA plazma, moč
ne
3 pracovní dny
standardizované vyšetření kyseliny močové a purinového metabolismu se
Jednotky:
Referenční meze:
Kritické hodnoty:
Referenční meze:
Indikace:
Interpretace:
provádí po 3 denní bezpurinové dietě
promíchat, aby v odlitém vzorku i ve zbylé moči v nádobě byla shodná
koncentrace kyseliny močové !!
vliv materiálu: výsledky stanovení nejsou ovlivněny přítomností
hemoglobinu do 5 g/l, bilirubinu do 513 µmol/l, triacylglycerolu do 23
mmol/l, kys. askorbové do 0,3 g/ l
mol/l (sérum), mmol/l (moč)
Sérum, plazma
věk
koncentrace v mol/l
< 6 týdnů
140 – 340
6 týdnů – 15 let
120 –340
muţi > 15 let
120 – 416
ţeny > 15 let
120 – 340
v séru/plazmě > 600 mol/l
Moč
koncentrace v mmol/l
věk
0 – 110 let
0,4 – 4,6
susp. hyperurikémie
1. familiární dna, zejména u ţen v mladém věku, akutní dnavá arthritis,
urolitiáza, zvl. familiární, familiární intersticiální nefritida
2. susp.deficit hypoxanthinfosforibosyltransferázy (HPRT)
kompletní deficit (Lesch-Nyhanův syndrom) - psychomotorická retardace,
křeče, automutilace, extrapyramidové symptomy, dna, urolitiáza, dnavá
nefropatie
parciální deficit (Kelley-Seegmillerův syndrom) - bez neurologických
symptomů
3. susp. zvýšená aktivita fosforibosylpyrofosfátsyntetázy (PRPPs) ataxie, psychomotorická retardace, dysmorfie, hluchota, dna, urolitiáza,
dnavá nefropatie
4. susp. familiární juvenilní hyperurikemická nefropatie (FJHN) - dna,
progresivní nefropatie s chronickým renálním selháním, autosomálně
dominantní dědičnost
5. glykogenózy jaterní i svalové aj. sekundární hyperurikémie
6. monitorování pacientů s hyperurikémií
susp. hypourikémie
1. susp. xanthinurie (deficit xanthinoxidázy) – xanthinová urolitiáza
2. susp. kombinovaný deficit xanthinoxidázy a sulfitoxidázy - xanthinová
urolitiáza, symptomatologie deficitu sulfitoxidázy (psychomotorická
retardace, křeče, ataxie, dislokace oční čočky)
3. susp. deficit purinnukleosidfosforylázy – SCID, imunodeficit
s postiţením buněčné imunity
4. susp. deficit fosforibosylpyrofosfátsyntetázy (PRPPs) – mentální
retardace, křeče, megaloblastická anémie
5. susp. dědičná renální hypourikémie – izolovaná hypourikémie
zvýšení či sníţení koncentrace v krvi ukazuje na moţnou poruchu
metabolismu purinů;
opakovaně zjištěné abnormální hodnoty jsou indikací k vyšetření kyseliny
močové v moči a purinového metabolismu a po vyloučení sekundárních
Garant:
Název:
Typ metody:
Princip stanovení:
Materiál:
Statim:
Dostupnost:
Provádí:
Poznámky:
Jednotky:
Referenční meze:
Indikace:
Interpretace:
Garant:
Název:
Typ metody:
Princip stanovení:
Materiál:
Statim:
Dostupnost:
Provádí:
Poznámky:
Jednotky:
Referenční meze:
Indikace:
Interpretace:
příčin indikací k cílenému enzymatickému vyšetření
nespecifické odchylky - při nestandardní stravě
Kyselina močová - Index podle Kaufmana (IK)
výpočtová
IK = kyselina močová v moči / kreatinin v moči
udává vylučování kyseliny močové močí
moč
ne
3 pracovní dny
1
věk
hodnota
< 2 měsíce
0,10 – 1,80
2 měsíce – 2 roky
0,10 – 1,60
2 – 8 let
0,10 – 1,30
8 – 15 let
0,10 – 1,00
> 15 let
0,10 – 0,80
určen k dynamickému vyšetření kyseliny močové a metabolismu purinů
zvýšené vylučování – hyperurikurie při endogenní nadprodukci kyseliny
močové, např. z deficitu HPRT či při zvýšené aktivitě PRPPs;
sníţené vylučování - dědičná xanthinurie z deficitu xanthinoxidázy nebo
z kombinovaného deficitu xanthinoxidázy i sulfitoxidázy
viz téţ Kyselina močová v séru a moči;
nespecifické sekundární zvýšené vylučování - při nestandardní stravě,
metabolickém rozvratu, rozpadu krvinek (po ozařování,
onkohematologická onemocnění aj.)
Kyselina močová - Index podle Stapletona (IS)
výpočtová
IS = (kyselina močová v moči : kreatinin v moči) x kreatinin v séru;
hodnotí vylučování kyseliny močové ve vztahu ke kreatininu v séru
sérum, moč
ne
3 pracovní dny
mol/l
< 100
určen k dynamickému vyšetření kyseliny močové a metabolismu purinů
zvýšené hodnoty – hyperurikurie při endogenní nadprodukci kyseliny
močové, např. z deficitu HPRT či při zvýšené aktivitě PRPPs
Garant:
Název:
Typ metody:
Princip stanovení:
Materiál:
Statim:
Dostupnost:
Provádí:
Poznámky:
Jednotky:
Referenční meze:
Indikace:
Interpretace:
Garant:
Název:
Typ metody:
Princip stanovení:
Materiál:
Statim:
Dostupnost:
Provádí:
Poznámky:
Jednotky:
Referenční meze:
Kritické hodnoty:
Indikace:
Kyselina močová - Exkreční frakce kyseliny močové EFKM
výpočtová
EFKM = (kys. močová v moči : kreatinin v moči) x (kreatinin v séru : kys.
močová v séru) x 100
sérum, moč
ne
3 pracovní dny
%
věk
hodnota
< 13 roky
5,0 – 20,0
muţi > 13 let
5,0 -12,0
ţeny > 13 let
5,0 – 15,0
k dynamickému vyšetření kyseliny močové a metabolismu purinů
susp. familiární dna, hyperurikémie, hyperurikemická nefropatie
susp. dědičná renální hypourikémie
sníţení EFKM – familiární juvenilní hyperurikemická nefropatie (FJHN),
výrazné zvýšení EFKM - dědičná renální hypourikémie
Kyselina orotová
kvantitativní stanovení
fotometrické stanovení, 480 nm, s p-dimethylaminobenzaldehydem po
odsolení moči na ionexu, bromaci a redukci kys. askorbovou
moč
ano
5 pracovních dnů
nutné uvést léky (allopurinol)
u intermitentní symptomatologie je nutné vyšetřit také moč z akutní ataky
mmol/mol kreatininu
věk
vylučování
< 1 rok
< 6,6
1 – 10 let
< 3,5
> 10 let
< 2,4
> 10 mmol/mol kreat.
hyperamonémie
susp. poruchy cyklu močoviny
susp. HHH syndrom (hyperammonémie, hyperornithinémie,
homocitrulinurie)
Interpretace:
Garant:
Název:
Typ metody:
Princip stanovení:
Materiál:
Statim:
Dostupnost:
Provádí:
Poznámky:
Jednotky:
Referenční meze*:
Indikace:
Interpretace:
Garant:
susp. intolerance bílkovin s lysinurií (LPI)
zátěţový test s allopurinolem k detekci heterozygotek pro deficit ornithintranskarbamoylázy (OTC)
susp. dědičná orotová acidurie z deficitu uridinmonofosfátsyntetázy
(UMPS) - megaloblastická anémie rezistentní na léčbu, urolitiáza
zvýšené vylučování – dědičné metabolické poruchy se zvýšenou produkcí
karbamoylfosfátu (deficit OTC, citrulinémie, argininjantarová acidurie,
argininémie, HHH syndrom, LPI), dědičná orotová acidurie z deficitu
UMPS;
sekundárně zvýšené vylučování – hepatopatie;
pozitivní nález je doplněn kvantitativním vyšetřením (aminokyseliny
v séru/plasmě, moči, puriny a pyrimidiny v moči - uracil, event. cílené
enzymatické nebo molekulárně-genetické vyšetření)
Kyselina sialová
kvantitativní
fotometrická metoda, 549 nm, s kyselinou 2-thiobarbiturovou
moč
ne
3 týdny
mmol/g kreatininu
Volná
Celková
Věk
kyselina sialová
kyselina sialová
0 – 6 měsíců
1,06 0,64
1,97 1,05
7 měsíců – 1 rok
0,79 0,50
1,49 0,82
1 – 2 roky
0,55 0,24
1,01 0,46
2 roky – 5 let
0,44 0,20
0,84 0,30
5 – 10 let
0,24 0,14
0,41 0,23
> 10 let
0,21 0,11
0,35 0,21
susp. zvýšené vylučování kyseliny sialové u poruchy jejího transportu
přes lysosomální membránu:
infantilní forma (ISSD – infantile free sialic acid storage disease) - časné
neprospívání, hepatosplenomegalie, těţká psychomotorická retardace,
faciální dysmorfie s hrubšími rysy obličeje, dysostosis multiplex;
pozdější forma (Salla disease) - po bezpříznakovém období opoţďování
psychomotorického vývoje aţ regres, ataxie
pozitivní nález je specifický pro obě formy poruchy transportu kyseliny
sialové přes lysosomální membránu;
současně bývá zvýšené vylučování sialyloligosacharidů v moči
- viz Oligosacharidy
Karolína Pešková, Sylvie Šťastná
Název:
Typ metody:
Princip stanovení:
Materiál:
Statim:
Dostupnost:
Provádí:
Poznámky:
Jednotky:
Referenční meze:
Kritické hodnoty:
Referenční meze:
Interpretace:
Garant:
Laktát a pyruvát
kvantitativní
enzymatické spektrofotometrické stanovení, 340 nm,
laktátdehydrogenáza, NAD/NADH
krev (laktát, pyruvát), likvor (laktát), moč (laktát)
ne
5 pracovních dnů
odběr heparinizované krve bez ischemizace končetiny do dvojnásobného
objemu studené 8% kyseliny chloristé, důkladně protřepat, transport
zkumavky v malém mnoţství vody s ledem, centrifugovat, odsát
deproteinát;
stanovuje se pouze L-laktát (nikoliv D-laktát);
metabolická acidóza se objevuje aţ při koncentraci laktátu v krvi
> 5 mmol/l;
společný odběr pro stanovení laktátu, pyruvátu a 3-hydroxybutyrátu
v krvi;
poměr L/P v krvi = koncentrace laktátu/koncentrace pyruvátu;
poměr L/P se vypočte pouze v případě zvýšené koncentrace laktátu
mmol/l (krev, likvor), mmol/molKr (moč)
Laktát v krvi: 0,5 – 2,2
Laktát v likvoru: 1,2 – 2,1
Laktát v krvi: ≥ 5,0 mmol/l
Laktát v likvoru: ≥ 4,0 mmol/l
Laktát v moči
věk
vylučování
< 1 měsíc
< 150
1 – 6 měsíců
< 100
6 měsíců – 2 roky
< 70
2 – 10 let
< 40
> 10 let
< 30
Pyruvát v krvi: 0,035 – 0,140
Poměr laktát/pyruvát v krvi: 10 – 20
příčiny laktátové acidózy (L-laktát):
1. glykogenózy, poruchy glukoneogeneze, Krebsova cyklu, -oxidace
mastných kyselin, deficit pyruvátkarboxylázy, deficit
pyruvátdehydrogenázy, poruchy respiračního řetězce, organické acidurie
(metylmalonová, propionová, isovalerová), citrulinémie
2. po námaze (k vzestupu koncentrace v krvi nedochází u poruch
glykogenolýzy a glykolýzy ve svalech), při křiku dětí při odběru,
hypoxémie, porucha cirkulace, jedy poškozující buněčnou respiraci
3. infekce, průjmy, hepatopatie, poruchy výţivy
u intermitentní laktátové acidózy nemusí být současně hyperlaktacidémie
a hyperlaktacidurie
v likvoru můţe být zvýšená koncentrace laktátu u mitochondriálních
encefalopatií i bez hyperlaktacidémie
zvýšený poměr laktát/pyruvát:
deficit pyruvát karboxylázy a poruchy respiračního řetězce
Název:
Typ metody:
Princip stanovení:
Materiál:
Statim:
Dostupnost:
Provádí:
Poznámky:
Jednotky:
Referenční meze:
Indikace:
Interpretace:
Garant:
Název:
Typ metody:
Princip stanovení:
Materiál:
Statim:
Dostupnost:
Provádí:
Poznámky:
Jednotky:
Referenční meze:
Mukopolysacharidy semikvantitativně
(glykosaminoglykany)
semikvantitativní
screeningový test s azurovou modří
moč
ne
2 pracovní dny
vylučování mukopolysacharidů kolísá během dne a klesá s věkem,
k vyšetření je proto vhodný vzorek z 12 hodinového sběru;
koncentrace mukopolysacharidů !!
arb.j.
0
susp. střádavé onemocnění ze skupiny mukopolysacharidóz (MPS) kostní deformity, faciální dysmorfie s hrubšími rysy, retardace/regres
psychomotorického vývoje, hepatosplenomegalie, zákaly rohovek, hernie;
provádí se u kaţdého poprvé vyšetřovaného pacienta (součást screeningu
při dodání dostatečného mnoţství moče)
specificky zvýšené vylučování - mukopolysacharidóza
nespecificky zvýšené vylučování - rachitida, revmatické choroby,
myokarditida, pacienti v těţkém stavu na intenzivní terapii,
kortikoterapie, heparinová terapie
falešně negativní nález - v málo koncentrované moči
fyziologický nález nevylučuje diagnózu MPS
kvantitativní
fotometrické stanovení, 520 nm, dimethylmethylenová modř,
modifikovaná metoda s TRIS
moč
ne
5 pracovních dnů
g/mol kreatininu
Věk
Vylučování
< 6 měsíců
< 50,0
6 měsíců – 1 rok
< 30,3
1 – 2 roky
< 26,4
Indikace:
Interpretace:
Garant:
Název:
Typ metody:
Princip stanovení:
Materiál:
Statim:
Dostupnost:
Provádí:
Poznámky:
Jednotky:
Referenční meze:
Indikace:
Interpretace:
2 – 4 roky
< 18,4
4 – 6 let
< 15,5
6 – 8 let
< 12,8
8 – 10 let
< 10,0
10 – 18 let
< 7,7
> 18 let
< 4,6
ověření zvýšeného vylučování zjištěného orientačním vyšetřením
specificky zvýšené vylučování – MPS
nespecificky zvýšené vylučování - rachitida, revmatické choroby,
myokarditida, pacienti v těţkém stavu na intenzivní terapii,
kortikoterapie, heparinová terapie, terapie topiramátem
falešně negativní nález – v málo koncentrované moči
zvýšené vylučování mukopolysacharidů bude doplněno elektroforetickým
vyšetřením mukopolysacharidů a vyšetřením oligosacharidů v moči
fyziologický nález nevylučuje diagnózu MPS, zvláště u větších dětí a
dospělých a u MPS III a IV
při přetrvávajícím podezření na. MPS je nutné provést cílené enzymatické
vyšetření i při fyziologickém vylučování mukopolysacharidů
Mukopolysacharidy kvalitativně – elektroforéza
kvalitativní, profilová
izolace s cetylpyridinium chloridem, 1-D-elektroforéza, barvení
alciánovou modří
moč
ne
2 týdny
vţdy jsou přítomny chondroitinsulfáty (CS);
heparansulfát (HS) a dermatansulfát (DS) můţe být ve stopách vzhledem
k intenzitě CS
doplňující vyšetření po zjištění zvýšeného vylučování mukopolysacharidů
zjištěného kvantitativním vyšetřením
hodnocení profilu mukopolysacharidů analytikem-biochemikem
vyšetření stanovuje jednotlivé frakce mukopolysacharidů a slouţí
k předběţné typizaci MPS:
Garant:
Název:
Typ metody:
Princip stanovení:
Materiál:
Statim:
Dostupnost:
Provádí:
Poznámky:
Jednotky:
Referenční meze:
Indikace:
Interpretace:
HS, ( DS); HS > DS – nález susp. pro MPS III
DS, ( HS); DS > HS – nález susp. pro MPS I, II nebo VI
KS – nález susp. pro MPS IV
CS, ( DS, HS) – nález susp. pro MPS VII;
typ MPS musí být stanoven enzymatickým vyšetřením;
fyziologický nález nevylučuje diagnózu MPS, při trvajícím podezření na
konkrétní typ MPS je třeba provést cílené enzymatické vyšetření
Oligosacharidy, sialyloligosacharidy
TLC, detekce orcinolem nebo resorcinolem nebo ninhydrinem
moč
ne
2 týdny
k vyšetření je vhodný vzorek z 12 hodinového sběru, protoţe vylučování
oligosacharidů kolísá během dne
koncentrace oligosacharidů !!
vysoká koncentrace solí a barviv (orcinolpozitivní látky) v moči
způsobuje sníţenou transparenci chromatogramu a znemoţňuje správnou
interpretaci nálezu
vysoká koncentrace solí způsobuje zdeformování frakcí a znemoţňuje
správnou interpretaci nálezu
vylučování oligosacharidů klesá s věkem
susp. střádavé onemocnění ze skupiny glykoproteinóz a lipidóz;
enzymatické poruchy v odbourávání oligosacharidů a lipidů
v lysosomech, které mají za následek střádání inkompletně odbouraných
substrátů)
hodnocení profilu oligosacharidů a sialyloligosacharidů analytikembiochemikem
specifické nálezy - -mannosidóza, mannosidóza, -fukosidóza, GM1
gangliosidóza, Schindlerova choroba, sialidóza, galaktosialidóza,
aspartylglykosaminurie, glykogenóza II
zvýšené vylučování sialyloligosacharidů by mělo být doplněno
vyšetřením kyseliny sialové v moči – viz Kyselina sialová
málo specifické nálezy - mukolipidóza II, Gaucherova choroba, GM2
gangliosidóza, mukopolysacharidóza I
všechny případy (nejčastěji adultní formy) nemusí být zachyceny
nález u kojenců na mateřském mléce můţe připomínat -mannosidózu
positivní nález je vţdy nutné ověřit enzymatickým vyšetřením
při přetrvávajícím podezření na. konkrétní střádavé onemocnění ze
skupiny glykoproteinóz a lipidóz je nutné provést cílené enzymatické
vyšetření i při fyziologickém profilu oligosacharidů a sialyloligosacharidů
Garant:
Název:
Typ metody:
Princip stanovení:
Materiál:
Statim:
Dostupnost:
Provádí:
Poznámky:
Jednotky:
Referenční meze:
Kritické hodnoty:
Indikace:
Interpretace:
Garant:
Název:
Typ metody:
Princip stanovení:
Materiál:
Statim:
Dostupnost:
Provádí:
Poznámky:
Organické kyseliny v moči
profilová, semikvantitativní
GC/MS, ethoximace, extrakce do ethylacetátu, trimethylsilylace, vnitřní
standard kys. fenylmáselná
moč, sběr moči (nejlépe 12 hodinový), případně moč z akutní ataky
ano
2 týdny
nutno uvést výţivu, dietu, léky
u intermitentní symptomatologie je nutné vyšetření moče také v akutní
atace
mg/g kreatininu
susp. organická acidurie, aminoacidopatie, porucha -oxidace mastných
kyselin nebo jiná porucha energetického metabolismu;
susp. hyper IgD syndrom, tyrosinémie typ I, choroba Cannavanové,
alkaptonurie;
nejasné akutní, recidivující nebo chronické stavy s metabolickou acidózou
nebo alkalózou, hyperamonémií, hyperlaktacidémií, hypoglykémií,
ketonurií, epileptická encefalopatie, progredující neurologické nebo
multisystémové onemocnění, neprospívání
hodnocení profilu organických kyselin analytikem-biochemikem;
stanovuje sumu L-laktát + D-laktát (bakteriální původ);
vybrané specifické nálezy:
mevalonát - hyper IgD syndrom, mevalonová acidurie
sukcinylaceton - tyrosinémie typ I
N-acetylaspartát - choroba Cannavanové
homogentisát – alkaptonurie;
riziko falešně negativního nálezu – u intermitentních forem některých
DMP
Organické kyseliny v séru/plazmě
profilová, semikvantitativní
GC/MS, deproteinace, ethoximace, extrakce do ethylacetátu,
trimethylsilylace, vnitřní standard kys. fenylmáselná
sérum, plasma
ano
2 týdny
nutné uvést výţivu, dietu, léky
u intermitentní symptomatologie je nutné vyšetření séra/plasmy také
v akutní atace
Jednotky:
Referenční meze:
Indikace:
Interpretace:
Garant:
Název:
Typ metody:
Princip stanovení:
Materiál:
Statim:
Dostupnost:
Provádí:
Poznámky:
Jednotky:
Referenční meze:
Indikace:
Interpretace:
Garant:
Název:
Typ metody:
Princip stanovení:
Materiál:
Statim:
Dostupnost:
Provádí:
Poznámky:
Jednotky:
Referenční meze:
Indikace:
mol/l
doplňující vyšetření k vyšetření organických kyselin v moči; event. nelzeli získat moč
susp. porucha -oxidace mastných kyselin (deficit MCAD, VLCAD,
LCHAD, glutarová acidurie typu II)
hodnocení profilu organických kyselin analytikem-biochemikem
uvedených DMP
Pteriny
HPLC, oxidace oxidem manganičitým, fluorimetrická detekce
moč chráněná před světlem (zkumavku zabalit do alobalu), zamrazit
ne
2 týdny
–
mmol/mol kreatininu
1. odlišení hyperfenylalaninémie/fenylketonurie z deficitu fenylalaninhydroxylázy od hyperfenylalaninémie s poruchou metabolismu pterinů
2. při klinickém podezření na poruchu metabolismu pterinů
hodnocení profilu pterinů analytikem-biochemikem
Lucia Krouská, Sylvie Šťastná
Puriny a pyrimidiny
HPLC, UV detekce
moč, plazma, likvor
ne
2 týdny
nejlépe 24 hodinový sběr nebo ranní moč
interference některých běţně uţívaných léků (ibuprofen, acetaminophen,
acycloguanosin aj.)
den před sběrem a v den sběru moče je vhodné vyloučit ze stravy nápoje a
jídla obsahující metylxantiny (káva, černý čaj, kakao, lékořice)
mmol/mol kreatininu (moč), µmol/l (plazma, likvor)
moč – mentální/psychomotorická retardace, tonusové poruchy
(hypo/hyper/dystonie), ataxie, automutilace, křeče, poruchy chování,
urolitiáza/nefrolitiáza, nejasná hyperurikémie s hyperurikurií, zejména
v mladém věku nebo familiární, renální selhání, SCID, nejasný
Interpretace:
Garant:
Název:
Typ metody:
Princip stanovení:
Materiál:
Statim:
Dostupnost:
Provádí:
Poznámky:
Jednotky:
Referenční meze:
Indikace:
Interpretace:
Garant:
imunodeficit s postiţením buněčné imunity, susp. deficit
ornithintranskarbamoylázy (OTC), anémie megaloblastická/hemolytická,
monitorování pacientů léčených allopurinolem
plazma - monitorování léčby allopurinolem - k vyloučení rizik
neţádoucích účinků
likvor – pouze u susp. deficitu adenylosukcinátlyázy (ADSL)
hodnocení profilu purinů a pyrimidinů analytikem-biochemikem
pozitivní nálezy u:
def. HPRT (hypoxanthinguanosinfosforibosyltransferáza)
nadprodukce PRPPs (fosforybosylpyrofosfátsyntetáza)
def. XO (xanthinoxidáza)
def. ADSL (adenylosukcinátlyáza)
def. PNP (purinnukleosylfosforyláza)
def. APRT (adeninfosforibosyltransferáza)
def. ADA (adenosindeamináza)
def. OTC (ornithintranskarbamoyláza)
def. DPD (dihydropyrimidindehydrogenáza)
def. TP (thymidinfosforyláza)
def. UMPS (uridinmonofosfáttransferáza)
falešně negativní nález - infekce močových cest (bakterie významně
sniţují mnoţství purinů a pyrimidinů v moči)
Redukující látky
semikvantitativní
Benedictova zkouška se síranem měďnatým
moč
ne
2 pracovní dny
prokazuje zvýšenou koncentraci sacharidů v moči;
pozitivní reakce - glukóza, fruktóza, galaktóza, maltóza, laktóza, xylóza a
dextróza;
negativní reakce - sacharóza;
falešně pozitivní nález - vysoká koncentrovanost moče, vitamin C a jiné
redukující látky (4-hydroxyfenylpyruvát, kyselina homogentisová,
kyselina močová, oxalát, salicyláty, hippurát)
arb. j.
0
susp. melliturie;
susp. galaktosémie, susp. hereditární intolerance fruktózy;
pozitivní nález doplní kvantitativní vyšetření sacharidů, kyseliny
homogentisové a kyseliny močové a oxalátu v moči
Název:
Typ metody:
Princip stanovení:
Materiál:
Statim:
Dostupnost:
Provádí:
Poznámky:
Jednotky:
Referenční meze:
Indikace:
Interpretace:
Garant:
Název:
Typ metody:
Princip stanovení:
Materiál:
Statim:
Dostupnost:
Provádí:
Poznámky:
Jednotky:
Referenční meze:
Indikace:
Interpretace:
Garant:
Název:
Typ metody:
Princip stanovení:
Materiál:
Statim:
Dostupnost:
Provádí:
Poznámky:
Jednotky:
Sacharidy
2-D-TLC, detekce naftolresorcinolem
moč
ne
2 týdny
hodnotí semikvantitativně zvýšenou koncentraci sacharidů proti
standardům
susp. melliturie (viz redukující látky)
zvýšená koncentrace galaktózy – galaktosémie, sekundární galaktosurie u
hepatopatie a postiţení střevní sliznice, častý nález u kojenců
zvýšená koncentrace fruktózy - heteditární intolerance fruktózy, deficit
fruktóza-1,6-bifosfatázy, esenciální fruktosurie, sekundární fruktosurie u
hepatopatie a postiţení střevní sliznice, deficit disacharidáz;
nález jiných sacharidů je z hlediska DMP nevýznamný
Sfingolipidy
kvalitativní
extrakce lipidů směsí chloroformu a metanolu, HPTLC, detekce
orcinolem, resorcinolem
tkáně
ne
3 týdny
autoptický materiál (játra, slezina, ledviny, mozek atd.)
susp. lysosomální střádavé onemocnění, zejména pro post mortem
vyšetření, kdy není k dispozici materiál ke stanovení enzymatické aktivity
pozitivní nález svědčí pro lysosomální střádavé onemocnění
Jana Ledvinová, Sylvie Šťastná
Siřičitany
semikvantitativní
diagnostický prouţek Sulfitest Merck
moč
ne
2 pracovní dny
siřičitany jsou nestabilní, test je nutno provést v čerstvé moči;
přítomnost kys. askorbové ruší stanovení
mg/l
Referenční meze:
Indikace:
Interpretace:
Garant:
Název:
Typ metody:
Princip stanovení:
Materiál:
Statim:
Dostupnost:
Provádí:
Poznámky:
Jednotky:
Referenční meze:
Indikace:
Interpretace:
Garant:
Název:
Typ metody:
Princip stanovení:
Materiál:
Statim:
Dostupnost:
Provádí:
Poznámky:
Jednotky:
Referenční meze:
Indikace:
Interpretace:
0
susp. deficit sulfitoxidázy a deficit molybdenového kofaktoru;
pozitivní - deficit sulfitoxidázy a deficit molybdenového kofaktoru;
falešně pozitivní - interakce s léky (podání 2-merkaptoethansulfonátu);
negativní výsledek nevylučuje deficit sulfitoxidázy;
viz téţ Thiosulfáty kvantitativně
Sukcinylaceton
kvantitativní
enzymatické fotometrické stanovení, 555 nm, inhibiční metoda, aminolevulináthydratáza, Ehrlichovo činidlo
moč
ne
2 týdny
se stanovením můţe interferovat řada Ehrlich-pozitivních látek, ale
vzhledem ke značnému zředění moči je jejich vliv omezen
mol/l
< 2,0
susp. tyrosinémie I. typu;
monitorování pacientů s tyrosinémií I. typu léčených NTBC;
ověření nálezu zvýšeného vylučování sukcinylacetonu v rámci vyšetření
organických kyselin v moči
zvýšenou koncentraci je nutno ověřit vyšetřením sukcinylacetonu v rámci
vyšetření organických kyselin v moči;
specifický nález pro tyrosinémii I. typu
Sukcinylaminoimidazolkarboxamidribosid (SAICAr)
kvalitativní
TLC, detekce Paulyho činidlem
moč
ne
2 týdny
nedetekován
susp. deficit adenylosukcinátlyázy (ADSL) - psychomotorická retardace,
autistické rysy, křeče, hypotonie, ataxie
pozitivní nález – specifický nález u deficitu ADSL;
riziko falešně negativního nálezu - v alkalické moči, při nízké
koncentrovanosti moče, metabolit je nestabilní při pokojové teplotě;
při pozitivním nálezu se indikuje profilové vyšetření purinů a pyrimidinů
Garant:
Název:
Typ metody:
Princip stanovení:
Materiál:
Statim:
Dostupnost:
Provádí:
Poznámky:
Jednotky:
Referenční meze:
Indikace:
Interpretace:
Garant:
Název:
Typ metody:
Princip stanovení:
Materiál:
Statim:
Dostupnost:
Provádí:
Poznámky:
Jednotky:
Referenční meze:
Kritické hodnoty:
Indikace:
v moči, případně v likvoru
Sulfatidy
kvalitativní (HPTLC), kvantitativní (MS/MS)
HPTLC: extrakce směsí chloroformu a metanolu, detekce orcinolem;
MS/MS: extrakce směsí chloroformu a metanolu
moč ranní celá porce včetně sedimentu;
při přelévání moči do jiné nádoby je nutné celý objem moči v původní
nádobě důkladně promíchat a teprve poté přelít do nádoby, ve které bude
moč transportována
ne
3 týdny
susp. metachromatická leukodystrofie (MLD)
susp. mnohočetný sulfatázový deficit (MSD)
positivní nález
1. MLD s deficitem arylsulfatázy A;
2. MSD - v moči téţ zvýšené vylučování mukopolysacharidů;
3. deficit proteinového aktivátoru saposinu B (dříve SAP1) nebo deficit
prosaposinu (prekursor saposinů A,B,C,D) – normální aktivita
arylsulfatasy A v leukocytech, v moči kromě sulfatidů téţ zvýšené
vylučování globotriaosylceramidu;
viz téţ Globotriaosylceramid
Jana Ledvinová, Eva Košťálová
Tandemová hmotnostní spektrometrie (MS/MS)
aminokyseliny a acylkarnitiny
screeningová
MS/MS, extrakce do metanolu, butylace, kvantifikace pomocí
deuterovaných vnitřních standardů
suchá krevní kapka
ano
5 pracovních dnů
u intermitentní symptomatologie je nutné vyšetření také v akutní atace
1. susp. poruchy metabolismu aminokyselin - hyperfenylalaninémie,
hypertyrosinémie, leucinóza, citrulinémie I
2. susp. organické acidurie a poruchy oxidace mastných kyselin se
zvýšeným vylučováním specifických acylkarnitinů - glutarová acidurie
Interpretace:
Garant:
Název:
Typ metody:
Princip stanovení:
Materiál:
Statim:
Dostupnost:
Provádí:
Poznámky:
Jednotky:
Referenční meze:
Indikace:
Interpretace:
Garant:
Název:
Typ metody:
Princip stanovení:
Materiál:
Statim:
Dostupnost:
Provádí:
Poznámky:
Jednotky:
Referenční meze:
Indikace:
typu I, metylmalonová acidémie, propionová acidémie, isovalerová
acidémie, deficit -ketothiolázy, deficit 3-metylkrotonyl-CoA
karboxylázy, 3-hydroxy-3-metylglutarová acidurie, deficit karnitinacylkarnitintranslokázy, deficit SCAD, MCAD, LCHAD, VLCAD,
glutarová acidurie II. typu, deficit CPT I a CPT II
hodnocení profilu aminokyselin a acylkarnitinů analytikem-biochemikem;
uvedených DMP a po transfuzi krve nebo erymasy;
pokud pacient dostal transfuzi plné krve nebo erymasy, doporučujeme
kontrolní vyšetření z nového vzorku odebraného tři měsíce po poslední
transfuzi;
při opakovaných transfuzích doporučujeme kontrolní vyšetření před další
transfuzí
Petr Hornik, Sylvie Šťastná
Thiosírany kvalitativně
kvalitativní
orientační test s azidem sodným a jodem
moč
ne
2 pracovní dny
nadbytek kyseliny askorbové ruší stanovení
arb. j.
0
susp. deficit sulfitoxidázy a deficit molybdenového kofaktoru;
pozitivní - deficit sulfitoxidázy a deficit molybdenového kofaktoru
falešně pozitivní - interakce s léky (po podání 2-merkaptoethansulfonátu)
v případě pozitivního výsledku nutno provést kvantitativní stanovení
thiosíranů
viz téţ Siřičitany; Thiosírany kvantitativně
kvantitativní
fotometrické stanovení, thiosírany tvoří s kyanidem a ţelezitými ionty
barevný rhodanid
moč
ne
5 pracovních dnů
ampicilin a salicyláty (vč. paracetamolu) ruší stanovení
mmol/mol kreatininu
0 - 90
susp. deficit sulfitoxidázy a deficit molybdenového kofaktoru
Interpretace:
Garant:
Název:
Typ metody:
Princip stanovení:
Materiál:
Statim:
Dostupnost:
Provádí:
Poznámky:
Jednotky:
Referenční meze:
Indikace:
Interpretace:
Garant:
pozitivní - deficit sulfitoxidázy a deficit molybdenového kofaktoru
falešně pozitivní – lékové interference (např. ampicilin, salicyláty vč.
paracetamolu atd.)
viz téţ Siřičitany; Thiosírany
Velmi dlouhé mastné kyseliny (VLCFA)
GC-FID, extrakce do hexanu, methylesterifikace, vnitřní standard C15 a
C27
sérum, plazma
ne
2 týdny
stanovuje velmi dlouhé mastné kyseliny:
nevětvené (kyselina behenová C22:0, lignocerová C24:0, cerotová C26:0) a
s rozvětveným řetězcem (kyselina pristanová, kyselina fytanová)
stanovuje kyseliny volné i vázané ve formě lipidů
vyšetření nelze provést z hemolytického séra
µg/ml
kys. fytanová < 3,5
kys. pristanová < 0,65
C26 < 0,50
C26/C22 < 0,021
C24/C22 < 1,000
susp. peroxisomální onemocnění – v různé kombinaci příznaky
neurologické (encefalopatie, hypotonie, křeče, periferní neuropatie,
poruchy chůze), oční (retinopatie, slepota, katarakta), hepatální dysfunkce
(hepatomegalie, hepatopatie, cholestáza), kraniofaciální dysmorfie a
kostní abnormality
patologické nálezy u poruch peroxisomální biogeneze a u poruch
v odbourávání VLCFA, kyseliny pristanové a kyseliny fytanové;
heterozygotky X-ALD - mohou mít normální koncentrace VLCFA;
kyselina fytanová a kyselina pristanová jsou exogenního původu, jejich
koncentrace je ovlivněna stravou a věkem (proto např. u některých
novorozenců a kojenců s peroxisomální poruchou mohou být koncentrace
kyseliny fytanové a kyseliny pristanové v normě)
15. Metabolické vyšetření pro samoplátce
Vyšetření pro samoplátce se provádí za přímou úhradu.
Současnou cenu 1 bodu uvádí Tabulka 38.
Tabulka 38: Cena bodu pro cizince
Výkony
Cena 1 bodu
Akutní výkony
1,12 Kč
Neakutní výkony
3 Kč
Bodové ohodnocení kódů i cena bodu se můţe měnit.
Konzultace o vyšetření pro samoplátce je moţná na TF 224 967 710 (MUDr. Šťastná).
V Tabulkách 32, 33 a 34 je uveden seznam nabízených vyšetření a jejich bodové ohodnocení
dle Seznamu zdravotních výkonů s bodovými hodnotami v roce 2010.
Tabulka 39: Seznam klinických vyšetření s bodovým ohodnocením
Kód
Klinická vyšetření
28021 Komplexní klinicko-genetické vyšetření se stanovením diagnózy
28022 Klinicko-genetické vyšetření při dosud neuzavřené diagnóze
28023 Kontrolní klinicko-genetické vyšetření
29001 Komplexní vyšetření dětským neurologem
29002 Cíleně zaměřené vyšetření dětským neurologem
29003 Kontrolní vyšetření dětským neurologem
31021 Komplexní vyšetření pediatrem
31022 Cílené vyšetření pediatrem
31023 Kontrolní vyšetření pediatrem
81021 Komplexní vyšetření klinickým biochemikem
81022 Cílené vyšetření klinickým biochemikem
81023 Kontrolní vyšetření klinickým biochemikem
Body
2472
1600
321
638
324
161
640
326
162
632
318
158
Tabulka 40: Seznam vyšetření metabolitů s bodovým ohodnocením
Kód
81647
81655
81265
81665
81667
81339
81669
81645
81751
81413
81651
81659
Vyšetření metabolitů
Aktivita biotinidázy screening
Aktivita biotinidázy kvantitativně
Aktivita enzymů HPLC
Aktivita lyzosomálních enzymů s neradioaktivním substrátem
Aktivita lyzosomálních enzymů s radioaktivním substrátem
Aminokyseliny kvantitativně
Aminokyseliny screening papírovou chromatografií
Disulfidy
Expertíza pro laboratorní diagnostiku DMP
Fenylalanin
Galaktosa + galaktosa-1-fosfát
Galaktitol
Body
34
568
1087
1635
2656
642
232
13
316
213
105
286
Kód
81651
81655
81651
91427
91433
81461
81655
81487
81645
81499
81645
81463
81661
81661
81523
81655
81525
81521
81645
81549
81651
81747
81651
81661
81567
81663
81663
81587
81645
81377
81749
97111
81651
81651
81645
81263
81649
81651
81645
81655
81657
Vyšetření metabolitů
Glykogen v erytrocytech
Guanidinoacetát
Izolace lymfocytů
Izolace leukocytů sedimentací (buffy coat)
3-hydroxybutyrát
Karnitin (2x - celkový a volný karnitin)
-Ketokyseliny
Kreatinin
Kyselina fenylpyrohroznová (fenylpyruvát)
Kyselina homogentisová screening
Kyselina homogentisová kvantitativně
Kyselina močová
Kyselina orotová
Kyselina sialová
Laktát
Mukopolysacharidy orientačně
Mukopolysacharidy elektroforésa
Novorozenecký screening DMP tandemovou hmotnostní spektrometrií
Oligosacharidy
Organické kyseliny
Oxaláty ZRUŠIT
Pteriny
Puriny a pyrimidiny
Pyruvát
Redukující látky screening
Sacharidy
Selektivní screening DMP tandemovou hmotnostní spektrometrií
Separace séra nebo plazmy
Sfingolipidy
Sialyloligosacharidy
Siřičitany
Sukcinylaceton fotometricky
Sukcinylaminoimidazolkarboxamidribosid (SAICAr)
Sulfatidy
Thiosírany orientačně
Velmi dlouhé mastné kyseliny a kyselina fytanová (VLCFA)
Body
105
568
105
215
165
473
568
340
13
17
13
12
451
451
22
568
59
53
13
112
105
184
105
451
151
552
552
81
13
266
184
16
105
105
13
147
76
105
13
568
271
Tabulka 41: Seznam molekulárně genetických vyšetření s bodovým ohodnocením
Kód Molekulárně genetické vyšetření
Body
94119 Izolace a uchování lidské DNA (RNA)
1223
94123 PCR analýza lidské DNA
2204
94127 Elektroforéza nukleových kyselin v polyakrylamidu
888
94183 Štěpení DNA restrikčními enzymy
380
94191 Fotografie gelu
23
94193 Elektroforéza nukleových kyselin
418
94195 Syntéza cDNA reverzní transkripcí
362
94199 Amplifikace metodou PCR
997
94211 Dlouhodobá kultivace buněk
6232
94213 Zmrazení buněčných linií
7659

Ústav dědičných metabolických poruch VFN

Transkript

Podobné dokumenty

Metabolická příručka - Ústav dědičných metabolických poruch

Dědičné metabolické poruchy v pediatrii

Metabolická příručka 2012 - Ústav dědičných metabolických poruch

Kyselina listová a prevence rozštěpových vad centrálního

MICRONAUT RPO stručný návod

Fulltext

Metabolická příručka - Ústav dědičných metabolických poruch