CHORUS Epstein Barr Early Antigen IgG

CHORUS
EPSTEIN BARR EARLY ANTIGEN IgG
81058
(36 testů)
Výrobce:
DIESSE Diagnostica Senese
Via delle Rose 10
53035 Monteriggioni (Siena) – Itálie
CHORUS Epstein Barr Early Antigen IgG
CZ
OBSAH
1
Úvod ................................................................................................................ 3
2
Princip testu ..................................................................................................... 3
3
Složení soupravy .............................................................................................. 4
4
Další potřebné vybavení k provedení testu ...................................................... 5
5
Skladování a stabilita komponent .................................................................... 6
6
Bezpečnost práce ............................................................................................. 6
7
Technické připomínky ...................................................................................... 7
8
Vzorky a jejich skladování ................................................................................ 8
9
Pracovní postup. .............................................................................................. 8
10 Validita testu.................................................................................................... 8
11 Hodnocení výsledků ......................................................................................... 9
12 Interpretace výsledků....................................................................................... 9
13 Charakteristika soupravy ................................................................................ 10
14 Literatura ....................................................................................................... 11
15 Vysvětlení symbolů ........................................................................................ 12
2/12
Rif. IO-09/315-C; Inf. Tecn. 81058/MIT – Ed. 16.01.2012
CHORUS Epstein Barr Early Antigen IgG
CZ
Kvalitativní stanovení IgG protilátek proti Early antigenu viru
Epstein-Barrové v lidském séru na přístrojích Chorus pomocí
jednorázového testovacího zařízení
1 Úvod
Časné antigeny viru Epstein-Barrové (EBV-EA) jsou virové proteiny, produkované
v časných stádiích lytické infekce. Již dlouho se při diagnostice infekční
mononukleózy (IM) používají metody nepřímé imunofluorescence pro stanovení
specifických protilátek proti EBV-EA, a to spolu s detekcí IgG a IgM protilátek proti
kapsidovým antigenům (VCA) a IgG proti nukleárnímu antigenu (EBNA-1).
V poslední době se ukázalo, že imunoenzymatické stanovení specifických IgG a IgM
protilátek proti dvěma časným proteinům (p138 a p54) dobře koreluje s metodou
nepřímé imunofluorescence a lze jej použít nejen jako komplementární metody při
stanovování anti-VCA protilátek, ale i jako náhradu za tyto metody při diagnostice
IM.
Souprava Chorus pro imunoenzymatické stanovení anti-EBV-EA IgG a IgM protilátek
používá rekombinantní polypeptidy z epitopů proteinů p138 a p54 produkované
v E. coli.
2 Princip testu
Test je založen na principu ELISA (Enzyme linked Immunosorbent Assay).
Antigen se naváže na pevnou fázi. V průběhu inkubace vzniká vazba mezi
specifickými protilátkami vyšetřovaného séra a imobilizovaným antigenem. Po
promytí, která eliminují nenavázané proteiny, se provádí inkubace s konjugátem.
Konjugát je roztok s obsahem monoklonálních protilátek proti lidskému IgG
značených křenovou peroxidázou. Po další sérii promytí, které odstraní nenavázaný
konjugát, se přidá substrát reagující s peroxidázou. Intenzita modrého zbarvení,
které vznikne, je přímo úměrné koncentraci specifických protilátek přítomných
v testovaném lidském séru.
Jednorázový test obsahuje všechny reagencie nutné k provedení testu na přístrojích
Chorus.
3/12
Rif. IO-09/315-C; Inf. Tecn. 81058/MIT – Ed. 16.01.2012
CHORUS Epstein Barr Early Antigen IgG
CZ
3 Složení soupravy
Souprava umožňuje provést 36 stanovení.
Testovací jednotka
6 × 6 ks
6 samostatných balení po 6 jednotlivých jednorázových
testech
Kalibrátor
1 × 425 µl
Roztok lidského séra o známé koncentraci protilátek,
obsahující Proclin a Gentamicin, v pracovním ředění
Pozitivní kontrola
1 × 425 µl
Roztok lidského séra o známé koncentraci protilátek,
obsahující Proclin a Gentamicin, v pracovním ředění
Pracovní návod
1 ks
Soupravu nechte vytemperovat na laboratorní teplotu a ze samostatných balení
odeberte stanovený počet jednorázových testů pro vlastní analýzu. Zbylé
jednorázové testy vraťte zpět do obalu se sušidlem (silikagel – gel obsahující oxid
křemičitý), vytlačte vzduch a hermeticky uzavřete stisknutím uzávěru. Skladujte při
+2 °C až +8 °C.
4/12
Rif. IO-09/315-C; Inf. Tecn. 81058/MIT – Ed. 16.01.2012
CHORUS Epstein Barr Early Antigen IgG
CZ
Obrázek 1 Schéma jednorázového testu
Pozice 8
Místo pro štítek s čárovým kódem
Pozice 7
Prázdná pozice
Pozice 6
Mikrotitrační jamka s potaženým antigenem
Rekombinantní proteiny EBV-EA
Pozice 5
Nepotažená mikrotitrační jamka
Pozice 4
TMB Substrát
0,35 ml
Tetrametylbenzidin 0,26 mg/ml a 0,01% H2O2 stabilizovaný
v 0,05 mol/l citrátového pufru (pH 3,8)
Pozice 3
Ředicí roztok vzorků
0,35 ml
Proteinový roztok obsahující 0,05% fenol, 0,02% Bronidox
a indikátor přítomnosti séra
Pozice 2
Konjugát
0,35 ml
Roztok monoklonálních protilátek značených peroxidázou
ve fosfátovém pufru obsahujícím 0,05% fenol a 0,02%Bronidox
Pozice 1
Prázdná jamka
Do této jamky se přidá neředěné vyšetřované sérum
4 Další potřebné vybavení k provedení testu
Tyto reagencie nejsou součástí balení.
Promývací roztok
83606
Čistící roztok 2000
83605
Sanitační roztok
83604
Destilovaná nebo deionizovaná voda
Běžné laboratorní sklo: odměrné válce, zkumavky atd.
Mikropipety na přesný odběr 50 až 200 μl roztoku
Jednorázové rukavice
Roztok chlornanu sodného (5 %)
Nádoby na potenciálně infekční materiál
Přístroj Chorus/Chorus Trio
5/12
Rif. IO-09/315-C; Inf. Tecn. 81058/MIT – Ed. 16.01.2012
CHORUS Epstein Barr Early Antigen IgG
CZ
5 Skladování a stabilita komponent
Reagencie se musí skladovat při teplotě +2 °C až +8 °C. V případě skladování při
nesprávné teplotě se musí zopakovat kalibrace a validovat test pomocí kontrolního
séra (viz 10, Validita testu).
Datum exspirace je uvedeno na každé komponentě a na štítku soupravy.
Po otevření mají reagencie omezenou stabilitu.
 Jednorázový test – 8 týdnů při teplotě +2 °C až +8 °C
 Pozitivní kontrola – 8 týdnů při teplotě +2 °C až +8 °C
 Kalibrátor – 8 týdnů při teplotě +2 °C až +8 °C
6 Bezpečnost práce
Souprava je určena pouze pro diagnostické účely in vitro.
Tato souprava obsahuje materiály lidského původu, které byly testovány a vykázaly
negativní výsledky při použití metod schválených FDA pro stanovení přítomnosti
HbsAg a anti-HIV-1, anti-HIV-2 a anti-HCV protilátek. Protože však žádný
diagnostický test nemůže poskytnout úplnou záruku, že infekční agens nejsou
přítomna, je třeba s veškerým materiálem lidského původu zacházet tak, jako by byl
potenciálně infekční. Při zacházení s materiálem lidského původu je nutné dodržovat
všechny místní předpisy týkající se bezpečnosti práce.
Likvidace zbytků pro provedení testu
S použitými vzorky sér, kalibrátory, jednorázovými testy je třeba zacházet jako
s potenciálně infekčním materiálem a likvidovat je v souladu s platnou legislativou.
Zdravotní a bezpečnostní informace
1. Nepipetujte ústy. Používejte rukavice na jedno použití a ochranu očí. Po umístění
jednorázového testu do přístroje Chorus si důkladně umyjte ruce.
2. Některé reagencie obsahují nízké koncentrace škodlivých nebo dráždivých látek
Pokud se některá s těchto reagencií dostane do kontaktu s kůží nebo očima,
důkladně omyjte dané místo vodou.
 Konjugát obsahuje fenol
 TMB Substrát je roztok kyseliny
3. Neutralizované kyseliny nebo jiný tekutý odpad by se měl dekontaminovat
přidáním dostatečného množství chlornanu sodného tak, aby konečná
koncentrace dosahovala minimálně 1,0 %. Pro zajištění účinné dekontaminace
ponechejte tento odpad 30 minut v 1% chlornanu sodném.
4. Rozlitý potenciálně infekční materiál je třeba okamžitě odstranit pomocí
absorpčního papírového ručníku a kontaminovanou oblast umýt, například 1,0%
chlornanem sodným, a to předtím, než budete v práci pokračovat. Chlornan
6/12
Rif. IO-09/315-C; Inf. Tecn. 81058/MIT – Ed. 16.01.2012
CHORUS Epstein Barr Early Antigen IgG
CZ
sodný nepoužívejte na rozlité tekutiny s obsahem kyseliny, ty musíte nejprve
otřením vysušit.
5. Materiály použité k čištění potřísněných povrchů, včetně rukavic, se musí
likvidovat jako potenciálně životu nebezpečný odpad. Materiály obsahující
chlornan sodný nevkládejte do autoklávu.
7 Technické připomínky
Pro získání spolehlivých výsledků je nutné přesné dodržování návodu.
Soupravu nechte vytemperovat na laboratorní teplotu (+18 °C až +30 °C) a test
proveďte do 60 minut.
Zkontrolujte a dodržujte následující informace:
 Substrát obsažený v pozici 4 je bezbarvý. Nepoužívejte jednorázové testy, které
toto nesplňují.
 Testovaný vzorek je dokonale na dně jamky rozprostřen.
 Zkontrolujte zda-li všechny reagencie v testu jsou přítomny a jestli není
jednorázový test poškozen. Nepoužívejte testy, které nemají reagencie.
 Jednorázové testy jsou určeny pro použití na přístroji Chorus. Důkladně
dodržujte pokyny pro použití a řiďte se návodem k obsluze přístroje.
 Chorus přístroj správně nastavený (viz návod k obsluze).
 Neměňte čárový kód umístěný na držadle jednorázového testu. Nepoužívejte
testy s poškozenými štítky s čárovými kódy.
 Defektní čárové kódy lze vložit do přístroje manuálně.
 Během skladování a použití nevystavujte jednorázové testy silnému světlu ani
výparům chlornanu.
 Použití silně hemolytických vzorků nebo vzorků s mikrobiální kontaminací může
vést k nereprodukovatelným výsledkům.
 Než vložíte jednorázový test do přístroje, zkontrolujte, že reakční jamka
neobsahuje cizí tělesa.
 Pipetujte sérum (50 µl) do pozice 1 jednorázového testu (viz obrázek 1).
 Nepoužívejte jednorázový test po uplynutí expiračního data.
7/12
Rif. IO-09/315-C; Inf. Tecn. 81058/MIT – Ed. 16.01.2012
CHORUS Epstein Barr Early Antigen IgG
CZ
8 Vzorky a jejich skladování
Jako vzorek k vyšetření může být použito sérum, získané odběrem žilní krve. Zachází
se s ním v souladu se všemi opatřeními předepsanými správnou laboratorní praxí.
Čerstvé sérum lze skladovat 4 dny při +2 °C až +8 °C. Séra je možné uchovávat
při -20 °C a lze je rozmrazit maximálně 3krát. Neskladujte vzorky v mrazácích s funkcí
vlastního rozmrazování.
Rozmrazené vzorky je potřeba před použitím důkladně protřepat. Kvalita vzorku
může být vážně narušena kontaminací, která vede k chybným výsledkům.
Nepoužívejte silně lipemické, ikterické, hemolytické nebo kontaminované vzorky.
Test nelze použít na lidskou plazmu.
9 Pracovní postup.
1. Otevřete balení, vyjměte požadovaný počet jednorázových testů a zbytek
uzavřete zpět do sáčku poté, co vytlačíte vzduch.
2. Zkontrolujte stav jednorázového testu (viz 7 Technické připomínky).
3. Pipetujte 50 μl neředěného séra do pozice 1 každého testu. Při každé změně
šarže soupravy použijte jednorázový test pro kalibraci.
4. Jednorázový test umístěte do přístroje. Proveďte kalibraci (je-li nutná) a vlastní
stanovení podle pokynů uvedených v návodu k obsluze Chorus přístroje.
10 Validita testu
Pomocí kontrolního séra ověřte správnost získaných výsledků. Použijte je v souladu
s instrukcemi uvedenými v návodu na obsluhu. Pokud test ukáže, že se hodnota
kontrolního séra pohybuje mimo přijatelné rozmezí, kalibraci je třeba opakovat.
Předchozí výsledky budou automaticky opraveny.
Pokud je výsledek kontrolního séra i nadále mimo přijatelné rozmezí, kontaktujte
prosím:
Tel:
+39-0577-587121 (technická podpora)
Tel:
+39-0577-587154
8/12
Rif. IO-09/315-C; Inf. Tecn. 81058/MIT – Ed. 16.01.2012
CHORUS Epstein Barr Early Antigen IgG
CZ
11 Hodnocení výsledků
Přístroj Chorus vyjadřuje výsledky jako INDEX (je to poměr mezi naměřenou
hodnotou absorbance testovaného vzorku a CUT-OFF hodnotou). Tento INDEX je
možné použít jako kvantitativní míru, jelikož je přímo úměrný množství přítomných
specifických IgG protilátek v testovaném vzorku lidského sér.
Hodnocení výsledků je popsáno v tabulce (Tabulka 1).
Tabulka 1 Hodnocení výsledků
INDEX
Hodnocení
menší než 0,8
negativní
0,8 až 1,2
hraniční
větší než 1,2
pozitivní
V případě hraničního výsledku zopakujte test. Pokud zůstává test nadále hraniční, je
vhodné opakovat z nového odběru, který bude proveden s určitým časovým
odstupem (1 až 2 týdny.)
12 Interpretace výsledků
Test nelze použít pouze jako jedinou metodu pro stanovení klinické diagnózy.
Existuje možnost zkřížené reakce se vzorky obsahujícími specifické protilátky proti E.
coli.
Tato souprava je určena pro stanovení protilátek při onemocnění infekční
mononukleózou. Souprava není validována pro stanovení protilátek u pacientů
postižených nazofaryngálním karcinomem, Burkitovým lymfomem nebo jinou
lymfadenopatií asociovanou s EB virem.
Potvrzení diagnózy infekční mononukleózy nelze stanovit na základě jediného
parametru. Přesná intepretace infekce musí být založena nejen na průkazu
heterofilních protilátek, ale i na výsledcích testů VCA IgG, IgM, EBNA IgG, EA IgG a
IgM.
Serologický nález je třeba vždy interpretovat pouze v kontextu s výsledky ostatních
laboratorních testů a s klinickým obrazem pacienta.
9/12
Rif. IO-09/315-C; Inf. Tecn. 81058/MIT – Ed. 16.01.2012
CHORUS Epstein Barr Early Antigen IgG
CZ
13 Charakteristika soupravy
13.1 Analytická specifita
Bylo testováno 10 vzorků negativních na anti-EA IgG a obsahujících specifické
protilátky proti CMV, HSV, Varicella. V žádném z testovaných vzorků nebyla
prokázána zkřížená reaktivita s těmito protilátkami.
13.2 Diagnostická citlivost a specifita
Pro stanovení citlivosti a specifity bylo využito srovnání výsledků na jiné referenční
soupravě. Výsledky srovnání jsou uvedeny v tabulce (Tabulka 2).
Tabulka 2 Výsledky srovnání zařazení testovaných vzorků
Referenční souprava
DIESSE
Pozitivní
Negativní
Celkem
Pozitivní
1
4
5
Negativní
0
49
49
Celkem
1
53
54
Souprava vykazuje 91% specifitu (CI95% 82až 97) a 100% citlivost (CI95% 72 až 100).
13.3 Přesnost měření
 Intra-assay: testované vzorky byly opakovaně změřeny (na třech různých
šaržích); průměr naměřených hodnot, směrodatná odchylka a variační koeficient
(%) jsou uvedeny v tabulce (Tabulka 3).
Tabulka 3 Intra-assay stanovení
10/12
Šarže
Opakování
vzorku
Průměr
naměřených
hodnot
Směrodatná
odchylka
Variační
koeficient (%)
019
9
1,8
0,17
9
020
9
2,4
0,19
8
021
9
2,5
0,14
6
Rif. IO-09/315-C; Inf. Tecn. 81058/MIT – Ed. 16.01.2012
CHORUS Epstein Barr Early Antigen IgG
CZ
 Inter-assay a návaznost mezi šaržemi: všechny testované vzorky byly
analyzovány na třech šaržích; průměr naměřených hodnot, směrodatná odchylka
a variační koeficient (%) každého vzorku jsou uvedeny v tabulce (Tabulka 4).
Tabulka 4 Inter-assay stanovení a návaznost mezi šaržemi
Průměrná hodnota INDEX
Vzorek
Průměr
Směrodatná
naměřených
odchylka
hodnot
Variační
koeficient
(%)
Šarže 019
Šarže 020
Šarže 021
1
0,3
0,2
0,3
0,3
0,06
20
2
1,3
1,7
1,7
1,6
0,23
14
3
3
3,2
3,6
3,3
0,31
9
14 Literatura
1. Gorgievski H.M., Hinderer W. et al. Serodiagnosis of infectious mononucleosis by
using recombinant Epstein- Barr virus antigens and enzyme-linked
immunosorbent assay technology. J. Clin. Microbiol. 28: 2305 (1990).
2. Middeldorp, J.M. and Herbrink, P. Epstein-Barr virus specific marker molecules
for early diagnosis of infectious mononucleosis. J. Virol. Methods 21: 133-146
(1988).
3. Luka, J., Chase, R.C. and Pearson G.R. A sensitivite enzyme linked
immunosorbent assay (ELISA) against the major EBV-associated antigens. I.
Correlation between ELISA and immunofluorescence titers using purified
antigens. J. Immunol. Methods 67: 145.156 (1984).
4. Motz, M., Fan J., Seibl R., and Wolf H. Expression of the Epstein Barr Virus 138
KDa early protein in E. coli for the use as antigen in diagnostic tests. Gene 42:
303-312 (1986).
11/12
Rif. IO-09/315-C; Inf. Tecn. 81058/MIT – Ed. 16.01.2012
CHORUS Epstein Barr Early Antigen IgG
CZ
15 Vysvětlení symbolů
Datum výroby
Použít do data
Nepoužívat opakovaně
Čtěte přiložené dokumenty
Výrobce
Počet testů
Skladovací teplota
Čtěte návod k použití
Biologická rizika
Katalogové číslo
Diagnostický zdravotnický prostředek in vitro
Číslo šarže
Diesse Diagnostica Senese
Via delle Rose 10
53035 Monteriggioni (Siena) – Italy
Tel. 0577-587111
12/12
Rif. IO-09/315-C; Inf. Tecn. 81058/MIT – Ed. 16.01.2012