Ing. Eva Procházková

Autor prezentace: Ing. Eva Procházková
Dezintegrace buněčné
stěny
Dezintegrace
buněčné stěny
uvolnění obsahu buňky
zachovává se biologická aktivita látek
změna buněčné morfologie
permeabilizace cytoplazmatické
membrány
e bá y
Eva Procházková
Biotechnologická laboratoř
CPN s. r. o.Dolní Dobrouč
Způsoby dezintegrace
fyzikální (mechanické) – opakované
zmrazování a rozmrazování, tryskové
homogenizátory, vysokootáčkové mixery,
zubová čerpadla
chemické – využívají účinky sloučenin
způsobujích
permeabilizaci buněčné membrányy
j
biologické – využívají lytické enzymy schopné
štěpit buněčnou stěnu např. lysozym, enzymy
trávícího traktu
Fyzikální dezintegrace
buněčné stěny
mechanické a nemechanické rozrušení
y
buněčné stěny
homogenizátory
mixery
i
opakované
opa
o a é zmrazování
a o á a rozmrazování
o
a o á
(osmotický šok)
působení teplot
teploty
Chemická dezintegrace
buněčné stěny
rozrušení buněčné stěny pomocí chemických
činidel
alkalické prostředí
organická rozpouštědla
tenzidy
solné roztoky
ostatní chemická činidla
Autor prezentace: Ing. Eva Procházková
Výroba glukomananu
Candida utilis
získávaný
í ká
ý produkt
d kt je
j intracelulární
i t
l lá í
glukomanan
souběžné působení fyzikálních metod
((vysoká
y
teplota)
p
) a chemických
ý činidel
(alkalické prostředí NaOH)
odstranění biomasy filtrací nebo
odstředěním
vysrážení
srážení konečného prod
produktu
kt
Dezintegrace při výrobě
HA SCH a glukomananu
HA,
Candida utilis – kombinace chemického a
y
způsobu
p
fyzikálního
Streptococcus equi – chemická
dezintegrace
Schizophyllum commune – použití
fyzikálních způsobů dezintegrace
Výroba HA
Streptococcus equi
získávaný produkt je ochranný obal buňky
ý kyselinou
y
hyaluronovou
y
tvořený
čistě chemický způsob rozrušení buněčné
stěny účinkem SDS a chelatonu III
odstranění biomasy filtrací a následované
vysrážení produktu
Autor prezentace: Ing. Eva Procházková
Výroba shizophylanu
Schizophyllum commune
získávaný produkt je extracelulární
polysacharid
p
y
schizophylan
p y
působení vysoké teploty následované
mechanickým rozrušením
odstranění biomasy (filtrace, centrifugace)
vysrážení konečného produktu
Praktická část I
realizace v laboratořích BTL
příprava
p
p
inokul p
pro fermentace ((zkompletování
p
kultivačního média a zaočkování kultury z misky)
příprava fermentorů k inokulaci a následná
inokulace
Streptococcus equi
Praktická část III
Praktická část II
sterilizace fermentorů in situ a v autoklávu
v autoklávu
kontaminace
in situ
po uplynutí předepsané doby kultivace
zpracování média
měření viskozity a obsahu biomasy
dezintegrace biomasy
filtrace a srážení kyseliny hyaluronové
sušení a stanovení konečných parametrů
získané kyseliny hyaluronové (hmotnost, sušina)
Praktická část IV
optimalizace fermentačních podmínek
vliv pH
vliv míchání (RPM, typ míchadla)
a vzdušnění (vvm)
vliv různého složení kultivačního média
Děkuji za pozornost
Autor prezentace: Ing. Eva Procházková