S_dsDNA_IF

Datum aktualizace: 28. 2.2014
Příloha – list Laboratorní příručky
Název metody: dsDNA IF
Název metody na výsledku laboratorního vyšetření: S_ds DNAF
Jednotky: slovní hodnocení
Indikace:
Vyšetření jsou indikována při podezření na systémové autoimunitní onemocnění SLE a monitorování průběhu
jeho léčby.
Při diagnóze systémového lupusu erythematodes (SLE) je velmi důležitá detekce autoprotilátek proti
kyselině deoxyribonukleové (DNA). Autoprotilátky proti DNA se dělí na dva různé typy: protilátky proti
nativní, dvouvláknové DNA (dsDNA, nDNA) a protilátky proti denaturované, jednovláknové DNA
(ssDNA). Protilátky dsDNA se nacházejí téměř výhradně u SLE. Prevalence těchto protilátek dosahuje
až 90%, v závislosti na detekční metodě a aktivitě onemocnění.
Protilátky proti dsDNA detekujeme příležitostně také u pacientů s jinými autoimunitními onemocněními
a infekcemi a ve vzácných případech také u klinicky zdravých lidí. U 85 % lidí z druhé skupiny se
rozvine SLE do 5 let od první detekce anti-dsDNA .SLE však nelze zcela vyloučit ani v případě, že
anti-dsDNA protilátky nejsou detekovány.
Systémový lupus erythematodes je systémové autoimunitní onemocnění pařící do skupiny kolagenóz.
Termín „lupus” (vlk) je odvozen z možných obličejových deformací způsobených SLE lézemi.
Diagnóza SLE je založena na 11 tzv. ARA kritériích (ARA =American Rheumatology Association),
která byla přejmenována na ACR kritéria v roce 1988 (ACR= American College of Rheumatology) a
revidována v roce 1997. Jsou-li přítomna 4 z 11 kritérií, je pravděpodobnost přítomnosti SLE mezi 80
a 90 %.
Kritéria jsou následující:
1. motýlový erytém
(červená vyrážka v obličeji šířící se na obě tváře),
2. červená, vymezená, vystupující vyrážka na kůži na jiných částech těla,
3. fotosenzitivita,
4. puchýře a vředy na sliznici úst,
5. bolest kloubů a efúze v kloubech,
6. serositis (zánět tzv. serózních tkání, jako jsou pohrudnice nebo perikard),
7. poruchy ledvin,
8. neurologické poruchy,
9. hematologické příznaky jako hemolytická anémie s retikulocytózou, leukopenie, lymfopenie,
trombocytopenie,
10. imunologické nálezy jako dsDNA , Sm, ACLA
11. ANA při IIFT
V průběhu onemocnění se v podkožních kapilárách, v ledvinách a jiných orgánech ukládají
imunokomplexy dvouvláknové DNA a příslušné autoprotilátky. Aktivací komplementárního systému
zde způsobují poškození orgánu. Primárním cílovým antigenem patogeneticky relevantních
autoprotilátek není “obnažená” DNA, ale komplex DNA s nukleosomy. Protilátky proti dsDNA patří
mezi nejdůležitější kritéria při diagnóze SLE kvůli jejich vysoké specifičnosti (70% až 98%). Protože
koncentrace těchto protilátek koreluje s aktivitou onemocnění, zvláště s aktivitou lupus nefritis, je
stanovení titru vhodné při sledování léčby. K detekci autoprotilátek proti dsDNA nepřímou
immunofluorescencí se používají zvířecí patogenní bičíkovci druhu Crithidia luciliae. Tito jednobuněční
bičíkovci jsou vybaveni velkou mitochondrií obsahující ds DNA (kinetoplast), která nevykazuje žádný
ze zbývajících antigenů obsažených v jádru lidské buňky. Protijaderné protilátky reagující s
kinetoplastem jsou proto namířený pouze proti antigenům dvouvláknité DNA. Díky specifičnosti pro
toto onemocnění umožňuje tento test Crithidia-luciliae dsDNA IIFT spolehlivou diagnózu SLE u
pacientů vykazujících příslušné symptomy. Změny v koncentraci protilátek proti dsDNA korelují s
aktivitou SLE, a jsou proto užitečným prognostickým markerem tohoto onemocnění.
Nejistota měření: výrobce neudává
________________________________________________________________________________
Karlovarské imunologické centrum, s.r.o.
Bezručova 10, 360 01 Karlovy Vary
tel. 353228907 , fax. 353228906
Systémy primárního vzorku
Druh odběrového materiálu: dle typu materiálu pro laboratorní stanovení – kapitola C8 - Odběr
materiálu Laboratorní příručky
Typ materiálu odebíraného: venózní krev
Odebírané množství vzorku: 5 ml
Typ materiálu pro laboratorní stanovení: S_sérum
Množství pro analýzu včetně mrtvého objemu: 50 µl
Množství pro analýzu bez mrtvého objemu: 20µl
Stabilita odebíraného materiálu
20-25° C:
1 den
Stabilita materiálu pro stanovení
20-25° C:
1 den
Stabilita materiálu pro stanovení
4-8 °C:
týden
Stabilita materiálu pro stanovení
-20 °C:
3 měsíce
Manipulace podle běžných zásad práce s biologickým infekčním materiálem.
Interference: Hemolytické, lipemické ani ikterické vzorky nevykázaly žádnou interferenci.
Omezení: Pro získání spolehlivých výsledků je nutná technická zkušenost a přesné dodržování
postupu. Bakteriální kontaminace nebo tepelná inaktivace mohou ovlivnit výsledky testu.
Dostupnost pro rutinní vyšetření:
Dostupnost pro statimová vyšetření:
Odezva pro rutinní vyšetření:
Odezva pro statimová vyšetření:
1x týdně
není statimové vyšetření
do týdne
není statimové vyšetření
Referenční rozmezí:
dsDNA reaktivita (IgG)
žádná reakce při 1:10
pozitivní reakce při 1:10
Vyhodnocení
Negativní. V pacientských vzorcích nebyly detekovány žádné
protilátky proti ds DNA
Pozitivní. Indikuje systémový lupus erythematodes
Zdroje variability: výrobce neudává
Interpretace výsledků:
Výsledky testu se udávají kvalitativně jako pozitivní nebo negativní protilátky třidy IgG proti ds DNA.
Hodnocení výsledků je uvedeno v tabulce v části Referenční rozmezí.
Negativní výsledek znamená, že protilátky nebyly v krvi pacienta přítomny.
Pozitivní výsledek znamená přítomnost dsDNA a může podporovat diagnózu. Při diagnóze je třeba
spolu se sérologickými výsledky brát vždy v úvahu klinické příznaky pacienta.
SLE se projevuje mnoha různými způsoby. Je třeba si uvědomit, že mimo anti-dsDNA i jiné
sérologicky detekovatelné autoprotilátky mohou být zodpovědné za individuální obraz tohoto
onemocnění. Proto je nutné zkoumat také protilátky proti nukleosomům, Sm, nRNP/Sm (U1-nRNP),
SS-A (Ro), SS-B (La), ribozomálnímu P-proteinu a jiným antigenům buněčného jádra.
Hlášení výsledků provádí pracovník pověřený hlášením výsledků, konzultace k výsledkům podává
úsekový vedoucí.
________________________________________________________________________________
Karlovarské imunologické centrum, s.r.o.
Bezručova 10, 360 01 Karlovy Vary
tel. 353228907 , fax. 353228906