CESTa - Prvouk P37

Y
C ESTa\
,
srpen 2013
4/7s
GYNEKOLOGIE
vroÁvÁ čEsrÁ
lÉraŘsrÁ spoLEčNosT
J. E.
puRKyNĚ
CZECH
CYNECOLOGY
čRsopls črsxr cyNrxoLoGlCKE A poRoDNlCKr sporrčNosrt
JoURNAL oF THE CZECH GYNECoLOGY AND oBSTETRtcs soctrry-
{í}
Z OBSAHU:
a
V
-iASE,/Excerpta Medica, MEDLINE/|ndex Medicus, lNIS Atomindex, Scopus,
a]_ \E Comp ete, Excerpováno v Bib|iographia medica čechos|ovaca
-::':
"án
v Seznamu recenzovaných neimpaktovaných periodik Rady pro výzkum, vývoj a rnovace
úřadu v|ády čR,
lssN (Přint) l210-7832
lssN (on-line) 1805-4455
MKČRE87
Solubilní Toll-Iike recep tor 2
vpupečníkovékrvi u těhotenshd
k9-plikovaných předčas nPn
odtokem plodové vody
umbilical cord blood soluble Toll-Iike recep
toq2
in pregnancies c_omplicated by preterm
premature
rupture of membranes
Mitášová E.l, Kacerovský
Krejsek J.l, Hornychová
M.2,
H.3,
Andrýs C.l
'Ústav,klinicke imunologie a alergologie LF U[ rru, Hradec
,poroonlcká
Králové, přednosta prof. RNDr. J. Krejsek,
a gynekologická klinika LF UK Fl,9
HTo.T Králové, pr"Ónosia JÓi. lluOi L, Šň"ček, CSc.
,Flngerlandův
3,
Ph.D.
ústav patologie LF UK a FN, Hradec
Knílové,přednosta prof. MUOr. n. nvŠň,"Pn,O,
A§§TRe€T
objective: To determine whether umbilical
cord blood
concentrations of so|ub|e.Tott-like recéóiÓ,
in the dragnosis of histo|ogicár
9iyg|.uu
(HCA) and funisitls in oreo
rŠriňZli,
Čňóiiou.iiČnito
by preterm
premature rupture
,ó;Tr';::;:mPlicated
"i
lelisn: Retrospective study,
Setting: Charles University iÁ Pra9ue,
Faculty of Medicine
and University Hospita|, Ěradec Řiáróňóěp"irJnt
or
CI inical
l
m
munoIogy and Al Iergy
and Gynecoloqv.
PóóJň.*řžř'óOř.tn.
Methods: Eighty six women wrth PPROM
between
gestation ages 24 and 36 weeks
were ináuOěň'rn tn"
samp|es
of the umbiIicul .orJňĚoi'*"r"
;tydv. _The
fr9T the clamped umrlticul
I9!..:
ly dlL,er
ňj
iř,","'JOiát"-
oellvery ol the newborn. The placenta,
fetal
membranes and umbi ical cord were
.r5rrJt"jřbiir,"
presence of inflammatory
changes. rne cóňi-eÉrJiions
I
§§§r,{&§§
Cíl studie: Stanovit hladiny solubilního
Tol1-1ike re2 (sT,LR2)
v pupeéníkovO ro,ui nóřorá)"n.t
::g|o|.Y
"oř"ču.pact entek s tehotenstvím
kom o i kova nV,
n ý
m
odtoke
m
nebo absence
a funisitidy.
I
p lo d o v
h
e
u
Řoil i)3 ó i iř" ňi'"rt i
cňo,ioá.Á.nitl jř i ijčnl
oo ý i
istoIoo icke
p p
Typ studie: Retrospektivní studie.
l\9zeJ a sídlo pracoviště: Univerzita Karlova v Praze,
Lékařská
fakulta a Fakultní nemocnice v Hradci
králové,
in the umbiljcalcord blood were
measured by
ELlSA method,
Results: Women with HCA did not have
different umbiIica] cord blood sTLR2 tevets
tňaň wJr.ř *iiň"rřLCn
(with HCA; median Z.O nqlmL,
iňterqruňii" i.'nóěiionl
5.l.- ]2.3 vs without HCÁ median e.b
ňsl*L, iňŘ'á,o -
9|:]iR2
9
!,p
=
O79). No differences Oeiwčun *-ómó
ňiini.o
funisjiis were found (..Jň. ;.i ;iZrL,
rOn
- 4.3 vs, without funisitis; median Z.Ó nÓ7r|, rOn
ylho!!
2'
5.2-10,5,, p
=
0.3])
Conclusion: Umbi|ica| cord blood sTRL2
levels are not
affected by the presence of eitňei H'CT
oiřuňři, in
pregnancies compIicated with
PPROM
rEYwoRp§
- histological chorioamnionitis
lli:i!:
lnn_mlnlty - přelglm přematu]e
membřanes - sTLR2
- innate
rupture of
Ustav klinjcké imunologie a alergolo9ie,
Porodnické a 9ynekologická klinika.
s.tudte by|o zařazeno 86 žen s PPRoM
36. tydnem gestačního,tari. ňil<v puoee
!9!olika:_D:
:.:!!11a
nlKove
krve byly odebrány z podvázaného púp"e
nirou
ihned po porodu novoror*.e, ýž"řnv
vých obalů a pupečníkuby|y vyšetřenyói..žňďňi"O"
nu Órliórnort
zá nětl ivých zm ěn, Ko n ceÁt..Ó
iiLŘŽ u
iiio".
krvi.novorozenců by|a měiena metodou ň,iÓ.Š.
EriSa
Výsledky: U žen s HCR neby|a ,;Žň.r..á;;
rozdíl
ná koncentrace sTLR2 v pubečníkovó
řrř
2013,78,
řu
i-"
č.4 čEsKÁ GyNEKoLoGrr
365
náni s ženam bez HCA (s HCA, medlán 7,6 ng/
mL, nterkt,ar:'o,"lý rozsah ilOR] 5,1 - 12,3 vs. bez
lCA: mecán B,O ng/m!, lOR 6,0 - 9,4, p = 0,79)
Neby la ezen r-ozdi v koncentrac sTLR2 v pupeč1i[9r,i-l (;l,, mez skupinami pacientek s funisitidou
a cez 'L-n s t dy (s íunisitidou: medlán 7,2 ag/ml,
CR
55
CR52
- 223
vs. bez fun s]tidy: medién 1,9 ng/ml,
10,5;p=g,31;
Závěr: H|adiny sT!R2 v pupečníkovékrvt nejsou ov] vněr;,
přitomnostilCA nebo funlsit dy u těhotenstvi komp iko-
vaných PPROM
funisitida - histolo9ická chorioamnionitida
- předčasný odtok plodové vody - STLR2 vrozená imunita
Čes, Gynek,, 2013, 78, č, 4, s. 365-372
Předčasný porod je závažnou komplikací moderního porodnictví. Jde o porod před 37. týdnem
gestačníhověku. V Evropě postihuje zhraba 5 %
všech těhotenství, ve Spojených státech amerických je jeho četnost více než dvojnásobná a v některých afrických státech šplhá výskyt předčasných porodů k20 % [s]. předčasný odtok plodové
Vody (pretelm premature rupture of membraneS,
PPROM) je definován jako porušenícelistvosti plodových obalů s následným odtokem plodové vody,
ktený předchází rrrinimálně 2 hodiny před nástupem děložních kontrakcí. Nastává mezi 24, - 37 .
týdnem těhotenství [12]. Faktor, kterýje silně asociován s PPROM, je intrauterinní infekce. Nejen
samotný výskyt a působení patogenů na okolní
tléně matky a plodu, ale i narušení imunologické
homeostázy m:ůžezapŤíčinitmnoho obtížív těhotenství [+:]. Po mi]<robiální invazi amniální dutiny
docházík migraci imuno}<ompetentních buněk do
kulární úrovni |28]. Porozumění jejímu vlivu na
zdárný průběh těhotenství se jeví jako esenciální
[26]. Součástí přirozené imunity je rodina Toll-
-like receptorů (tott-like leceptoTs, TLRs), jež hraje
zásadní roli při rozpoznání a eliminaci patogenŮ.
Nyní již známe deset lidských TLRs [szJ. rrns isou
transmembránové glykoproteiny rczpoznáv ající
tzv. signály nebezpečíči poškození |1]. Molekulové
vzory potenciálně nebezpečných mikroorganismů
(např. lipopolysacharid) jsou TLRs schopné iden-
tifikovat jako vzory PAMP (pathogen associated
molecular patterns) [a1l. Stejně tak TLRs rozeznáv ali endogenní molekuly (damage-associated
molecular patterns, DAMPs) uvolněné z aktivovaných či nekrotických buněk a extracelulárního
matrix pod vlivem probíhajícíhozánětu a infe]<ce
[39]. ]de například o stresový protein HSP70 nebo
kyselinu hyaluronovou I37, 55J. Aby nedocházelo
k hyperaktivaci imunitního systému při infekci,
a tím možnému poškození orgánů a chronickým
místa napadení a k zahájení obranné odpovědi [19l. zánětům, musí být odpověd přísně regulována
Mateřská odezva na infekci koreluje s histologic- |33] . Iedním z mechanismů kontroly TLR aktivace
kou chorioamnionitidou (histological chorioam- je tvorba solubilní formy TLR (sTLR). Tato forma
nionitis, HCA), která je definována histologickým kompetuje o přirozené ligandy s povrchovými TLRs
průkazem zánětlivých změn v piacentě. Pacientky
|a0]. Solubilní forma je zřejmě produkována dvěma
s HCA jsou asymptomatické, bez horečky, bolestí způsoby. První možnostíje pohlcení povrchových
v podbřišku, mateřské či fetální tachykardie [50J.
TLRs zpět do buňky, kde jsou TLRs posttranslačně
Odezvou plodu na expozici patogenních agens modifikovány na solubilní formu a poté uskladněmůžebýt v něktenich případech aktivace jeho imuny v intracelulárním váč]<u. V případě potřeby je
nitního systému, tzv. syndrom fetální zánětlívé buňka uvolní do prostoru [10, 31]. Druhým způsoodpovědi (fetal inflammatory response syndrom,
bem vzniká sTLR odštěpením TLR z povrchu buňky
FIRS) [14]. Jako morfologický korelát FIRS se někdy
proteázami (tzv. sheddinc) [58].
udává funisitida. Histologický nález funisitidy lze
TLR2 zaujímá speciální místo mezi TLRs. ieho
stanovit post paítum. Zánět pupečníku je spojen se schopnost rozeznávat patogeny je dobře probádazvýšeným rizikem poškození plodu a novorozence,
ná a zahrnuje širokou škálu bakterií, virů, plísnapříklad moz]<ovou obrnou [16] nebo chronický,m
ní, mykobakterií a parazitů [1] , Mnohostrannost
plicním onemocněním [8].
v rozpoznávání ligandů je umožněna schopností
I{íčovouúlohu při průniku mikrobiální infek- TLR2 vytvářet heterodimery s TLR1 nebo TLR6 [53,
ce má vrozená imunita, ktelá u člověka zaýímá 54]. TLR2 má svoji solubilní formu (sTLR2), která
první obrannou linii. Jde o archaický způsob obra- byia nalezena v plazmě, v mateřském mléku, ve
ny, který je fyiogeneticky konzervovaný na mole- slinách a v plodové vodě [10, 31, 51]. Hlavní důvočEsKÁGYNEKoLoGE 2a:'3,lB,č 4
-------
dy, proč jsme se rozhodli stanovit hladiny sTLR2
v pupečníkovékrvi, byly dva. Za prvé, rrnZ.1."
schopen rozezTlat PAMP grampozitivních bakte-
rií,,jakými jsou peptido§tyt<arry, kyselina hpo-
teichoová
[+z] neuo iipoproteinyllipobeptiay |:b].
grampozitivní bai<terie r. r.á1 e"riO1 i vyskytují při mikrobiální invaziamniální dutíny a aktivují TLR2 Lsll. za druhé, v dřívějšístudii byl
potvrzen signifikantní nárůst sTLR2 v plodové voáě
u^pacientek s HCA oproti pacientkámbez HCA
[3,
19]. sTLR2 v plodové vodě ie ukázal být nadějnýá
markerem HCA. Proto nás zajímal o, zdaobdobná
závislost platí i v pupečníkovékrvi. Vzhledem k neinvazivnímu způsobu odběru pupečníkovékrve by
š1o o velmi šetrnou metodu, beŽ rizlk pro matku
a dítě. Cílem našístudie bylo stanovit kóncentraci
sTLR2 v pupečníkovékrvi novorozence a určit vztah
k těhotenstvím komplikovaným PPROM a HCA
nebo funisitidou.
Právě.
placentární tkáně fixovány v lO% neutráIně pufrovaném formalinu. Standardně byly po fiiaci
odebírány k dalšímu zpracování do paiaiinových
bloků minimálně dva vzorky z placeniy, dva vzorky
z plodových obalů ajeden vzorekzpupečníku. Řezý
byly obarveny hematoxylin-eozin-em.
Diagnostika HCA a funisitidy
Diagnóza HCA byla stanovena podle klasifi]<ace Salafia et al. [26], která hodnbtí intenzitu
(stupně - grade 1-4) infiltrace neutrofily v konkrétníchkompartmentech placenty, pupečníku
a plodových obalů. HCA byla definováňa jako:
grade 1-4 ve tkáních amnia a/nebb grade 3-4 ve
tkáních choria a deciduy a/nebo graáe 3-4 v choriové ploténce a/nebo grade 1-4 vďtkáních pupečníku, Funisítida byla diagnostikována při náIezu
v pupečníku- grade 1-4. Vzorky byly vyhbdnoceny
jedlrím patologem, který nebyl obeznámen s
klinikou pacientek.
Stanovení sTLR2 v pupečníkovékrvi
Koncentrace sTLR2 byla zjišťována metodou
Soubor pacientek
ELISA. Po.stup byl prováděn podle pokynů výrobStudie byla schvátena Etickou komisí FN Hradec ce komerčního
kítu pro lidský sriRZ (Uscn Life
Itálové. Všechny pacientky podepsaly informo- Science
&Technology Company, China). Detekční
vaný souhlas. Celkem Uyto ÓaeUráno 86 vzorků lim_it pro
sTLR2 byl 0,098 ng/ml. Absorbance byia
pupečníkové]<rve na porodním sáIe Porodnické
měřena na Multiskan RC irtsa reader (Thermo
a gynekologické kliniky Fakultní nemocnice Fischer Scientific, USA) při
vlnové délce 450 nm.
Hradec lGálové v období od června 2OO8 do záŤí
2010 v gestačnímtýdnu 24+O až 36+6. Ze studle
§tatistika
byly vyloučeny pacientky s vícečetným těhotenDemografické a klinické charakteristiky znaků
stvím, s komplikovaným těhotenstvím (hr,,per- s kontinuáiní
variabilitou se hodnotily parametrickým t-testem (uvedeny jako průměi t smě_telze.,._preeklampsie, diabetes mellitus, nemoci
štítnéžIázya jiné) a/nebo s vrozenýmí qivojodmi r_odatná
odchylka) nebo nepárametrickým
vadami plodu či známkami neprospíváni plodu Wilcoxonovým
testem (uvedeňy jako medián
(váha plodu o IO % nižšípro aané gástatní
itáří, {interkvartilový rozsahl). Znaky's kategorickou
určeno ultrazvukovým vyšetřenim). Vaginální binární variabilitou
byly hodnoceny-nepa.avýtok a známky hypoxie plodu byly rovněžáůvoay metrickým
Fisherovým exaktním testem J Uyty
k vyřazení ze studie.
uvedeny jako počet (%). Normaiita dat byla tesPPROM byl definován jako porušení integrity tována I(olmogorovovým-Smirnovovým
testem
plodových obalů s následným odtokem plodové a
Vzhledem k tomu, že koncentrace
X2testem.
vody, který předcházel minimálně 2 hodiny před sTLR2 pupečníkové
v
krvi nesplňovaly normálnástupem děIožních kontrakcí. PPROM byl potvr- ní distribuci,
byl pro jejich vyhodnocóní pollžit
zen Temešváryho testem a pozitivním teit"- na neparametrický
insulin-Iike growth factor-binding proteín (ACTIM zentovány jako Wilcoxonův test a výsledky prePROM test, Medix Biochemicá,- I(auniainen, Za statisticky medián (interkvartilový rozsáh).
význarnné byly považovány rozdíFiniand) v poševním hlenu.
}y s p < 0,05. Všechny p-hodnóry byly zpracovány v softwarovém programu MedCalc (MedCalc
sběr vzorků
Software, Mariakerke, Belgie).
. Yzo.rky pupečníkovékrve byly odebírány zpod.vázaného pupečníkunovorozence před pórodem
placenty- Sběr pupeční]<ové]<rve prorrěrri pomocí
uzavřeného vakuového systému pro odUěr t<rve.
Následně byly vzorky centrifugovány a jejich su- Demografi
cká a klinická charakteristika
pernatanty uschovány v polypropyienových zkuDemografické a klinické charakteristiky žen
mavkách píi -7O "C až d"o anal.tlzy. no poróau Uyly a novorozenců jsou
uvedeny v tabulce 1. Pacientky
2013,78, č.
4
čEsKÁ GYNEKoLoG|E
367
!!r
,l;
t Demografické a klinické charakteristiky pacientek s těhotenstvím komplikovaným předčasným odtokem plodové Vody
za přítomnosti nebo absence histologické chorioamnionitidy (HCA) a funisitidy
Tab.
(n
=
p-hodnotar
Absence HcA
Přítomnost HcA
(n
61)
=
25)
přítomnost
Absence furiisitidy
funisitidy
(n = 68)
(n
L!54
Věk pacjentek (rokV)
3l (5l
PrVorod]čky
Body rnass
index
,
ó| o, ó]
l
23,4 (2]
26
??,1::,6
ll
%)
3)
216
(4,1 %)
(]9,1 247)
32
r5
064
0,000l
a2+2 (.29+5 ,
9 (50
221
j0-6
i
5,2
0,5l
32(41
%)
1.00
3o,8
(.2a,5
26,4
038
(26+3 ,31+4)
0,0001
]5 l O t33+l
a3()+()
5,2
%)
(2O 2 - 25,a)
B3
31,7 1
9498
O.C8
= 18)
p-hodnota'
5 (20 %)
podání kort kostero
cjů
ndukce porodu
43 (1O %)
6 (24 %)
0 ,0qo!
25 (41%')
8 (32y")
:4l
?a (8a
Porod cisařským řezem
Apgar skóre,
J^o.o
a'a-
l0 (9 l0)
m n
o,ooó
a
80,-8(
l0 (56
%)
5l (75
%)
)6 (24 y")
0(0%)
0(O%)
9 (8 l0)
l0 (9,10)
Ap!]ar skóre. 5 min
1O
9á)
..]J
] -Q
2a (33 y")
0 (0
Póród k]ešten,l
%')
33 (49 %)
l0 (l0 l0)
2264 J 54a
0,001
znaky s kontinuální variabilitou byly hodnoceny paíametrickým t-testem (uvedeny jako prúměř ! směíodatná odchylka) nebo neparametlickým
WilcoxonoVým testem (uvedeny jako medián Iinterkvařtilový řozsah]).
abylyuvedenyjakopoČet(%).
znaky5kategorickoubinárnívariabilitoubylyhodnocenyneparametíickýmFi5herovýmexaktnímte§iem
p-hodnolár : pořovnání skupiny s přítomností a absencí HcA
p-hodnota' i pořovnání skupiny s přítomností a absencí funisitidy
stati5ticky významné výsledky jsou vyznačeny tučně.
Koncentrace sTLR2 v pupečníkovékrvi vevztahu k funisitidě
Při porovnávání výsledků ve skupině pacienCientek byla HCA diagnostikována u st (lt z) žen
(21
gestačního
tek
s PPROM a funisitidou se skupinou pacientek
%) žen. Medián
a funisitida u 18
stáří pacientek s PPRoM a HCA při porodu byl s PPROM bez funisitidy nebyla nalezena statistická
než u pacientek s PPROM bez významnost (s funisítidou: medián 7,2 ng/ml, IQR
významně nížší
HCA. Rovněž medián gestačníhostáří pacientek 5 ,5 - 22 ,3 vs . bez funisitidy: medián 7, 9 ng/ml, IQR
5,2-10,5; p= 0,31) (graf2,tab.2).
s PPROM a funisitidou při porodu byl signifikantně nižšínežlženbezznámek záné:llpupečníku.
Hmotnost novorozencŮ pacientek s PPROM a HCA
a pacientek s PPROM a funisitidou byla výrazně
Předčasný porod se stává velmi častým disnižšínež
hmotnost novolozenců ženbez HcA a bez
kutovaným problémem. Ieho management je
funisitidy.
mnohdy zkomplikován přítomností HCA a fuKoncentrace STLR2 v pupeČníkovékrvi vevzta- nisitidy, ]<teré se podílejína zvýšeníperinatální
morbidity a mortality novorozenců. Při obraně
hu k HCA
Hladiny sTLR2 se nalezly ve všech testovaných proti mikroorganismům zastávají jednu z nejvzorcích pupečníkovékrve. Mediány ]<oncentrace důležitějšíchrolí mechanismy vrozené imunity.
Rozpoznání patogenů Ieceptory PRR na povrchu
STLR2 byly u pacientek s PPRoM a HCA a u pabuněk je první krok k jejich eliminaci. Jako jeden
cientek s PPROM bez HCA naměřeny na podobných
hodnotách (s HCA: medián 7,6 nglmL, IQR 5,1 - z regulátorů imunitní odpovědi sloužírozpustné
formy receptorů, j ež br ání nepřiměřen é zánétov é
12,3 vs. bez HCA: medián 8,0 ng/ml, IQR6,0 - 9,4;
p = 0,79). Statistická významnost nebyla zjištěna reakci.
(graf1, tab.2).
s PPROM byly rozděleny na zá]<ladě přítomnosti
nebo absence HCA a funisitidy. Z celkových 86 pa-
368
čEsKÁ GyNEKoLoGlE 2013,78, č.4
|ll
s HcA
Bez HcA
(n = 61)
s funisitidou
(n = 25)
l Koncentrace STLR2 V pupečníkovékrvi u žen s předčasným odtokem plodové vody rozdělených podle přítomnosti a absence histolo9ické choíioamnionitidy (HcA). NenaIezen signif ikantGraf
(n = 68)
@aí 2
Koncentrace STLR2 V pupečníkovékrvi u žen s předčasným odtokem plodové vody rozdělených podle přítomnosti a absence funisitidy. Nenalezen sígnifikantní rozdíl (p = 0,31). Vodorovnou
ní rozdíl (p = 0,79), Vodorovnou značkou jsou označeny médiány
Tab.2
Beeíunisitidy
(n = 18)
značkou jsou označeny mediány
Hladiny sTLR2 v pupeČníkovékřVi Ve Vztahu k přítomnosti nebo absenci HcA a funisitidy u žen
s PPRoM
Počet žen
Průměr
Medián
(laR)
j
p-hodnota
Přitomnost HCA
L\9
Il,sllel
f u n
l1,0
7,6
7.9
B,0
(,5,1
_ 12,3)
(6,0
isltidy
9,4)
7,2 (5,5 _ 22,3)
7,9
(5,2,10,5
VYsvětlivkY; STLR2, so|ubilní Tol1,1ike řeceptor 2; HCA, histolo9ická chorioamnionitida; loR,
inte]kvartilový řozsah; plůměí,
medián a loR přezentovány v jednotkách nglmL.
Existují důkazy, že vstup patogenů a aktivace
signální cesty TLR můžespustit buněčné a cytokinové a]<tivity, které vedou k předčasnémupolod,u
[18, 36]. Nejčastěji docházik navýšeníhladin IL-6,
IL-8, prostaglandinŮ, cyklooxygenázy a oxytocinových receptorů na buňkách trofoblastu [34, 49]. 11ž
dříve naše skupina zkoumala koncentrace mnoha
prozánětových molekul v plodové vodě a v pupečníkovékrvi. Zde se ukázala být velmi slibná molekula solubi]ního vychytávacího receptoIu pro
hemoglobin (sCD163). Hodnoty sCD163 v piodóvé
vodě a zároveň v pupečníkové]<rvi byly r,"ýrazně
navýšenéu pacientek s přítomnou HCA a funisitidou ve srovnání se skupinou bez zánétliýcih
změn [21,24]. Mohlo by jít o potenciální marker
HCA a funisitidy. V nedávné době jsme se zaměřili
na koncentrace sTLR v plodové vodě v závislosti na
přítomnosti nebo absenci HCA a funisitidy u žen
s PPROM. Zjistili jsme, že koncentrace sTLR2 v p1odové vodě významně stoupá u pacientek s PPROM
s mikrobiáIní invazí amniální dutiny a s potvrzeným zánětem ve srovnání s pacientkami bez
invaze patogenů abezzánétu [19, 20]. Proto jsme
se rozhodli k vyšetření solubilní formy Toll-like
receptoru 2 v pupečníkovékrvi novorozenců ve
vztahu k HCA a funisitidě.
jde o prioritní studii, jelikož koncentrace sTLR2
v pupečníkovékrvi nebyla zatím nikdy zkoumána.
Ve všech testovaných vzorcíchbyl sTLR2 přítomen.
Naše výsledky nepotvrdity signifikantní nárůst
koncentIace sTLR2 v pupeČníkovékrvi u pacientek
s PPROM a s HCA nebo funisitidou oproti ženám
bez HCA nebo bez funisitidy. Mediány ]<oncentrace
sTLR2 byly u všech skupin naměřeny na podobných hodnotách. Limitací našípráce je menší
počet pacientek, zejména ve skupině žen s PPROM
funisitidou.
Pokud chceme hledat vysvětlení, proč se nám
podařilo objevit elevaci hladin sTLR2 v plodové
vodě v závislosti na zánětu, a v pupečníkóvékrvi
nikoliv, musíme si nejprve zodpovědět otázk:u,
jaké buňky sTLR2 uvolňují do prostolu. TLR2 je
v době těhotenství u žen exprimován nejen na
ímunitních buňkách, tj. na dendritických buňkách, monocytech, placentáIních makrofázích
a děložních NI( buňkách, ale i na buňkách nea
2013,78, č-
4
ČEsKÁ GYNEKoLoGtr
369
E
linunltní povahy. TLR2 je vyjádřen na buňkách
amnionu, chorion-deciduální membrány nebo
také na buňkách trofoblastu I27,38]. ByIo prokázáno, že v případě diagnostikované HCA docházelo
k výraznému nárůstu vyjádření TLR2 na povrchu
bun ě k chorioamni onu |27 l. B uněčnézďr oj e sTLR2
v plodové vodě mohou být velmi rozrnanité, TLaTozdíl od pupečníkovékrve, kde jsou zřejmě lrlavním
producentem sTLR monocyty l48] . Jak se ukázalo,
vyjádření TLR2 na monocytech je poměrně stálé.
Nebyl nalezen zásadní rczdíL v expresi TLR2 na
monocytech u novorozenců mezi 25. až 42. týd,
nem porodu [44]. Určitézastoupení má TLR2 i na
povrchu fetálních NI( buněk, ale to je v porovnání
s NI( buňkami dospělého jedince zanedbatelné |33] .
O vyjádření TLR2 na povrchu endoteliálních buněk
je uveřejněno mnoho prací, ovšem o expresi TLR2
na endotelu cév v pupečníku se zmiňuje pouze
jedna čínskástudie. Ta potvrdila ponze genovou
expresi mRNA molekuly TLR2 v endoteliálních
buňkách pupečníkov é žíry|32] .
Výskyt bakterií je pro zahájení imunitní odpovědi esenciální. U žen s předčasným porodem
se nejčastěji v plodové vodě vyskytovaly bakterie
Mycoplasma homínís, U reaplasma spp . , Chlamydía tra-
o m atis, Str e pto c o c c us mitis či F us ob a ct e rium n ucl e atu m
[9J. Bylo objeveno, že exprese TLR2 na amniálních
ch
bez přítomnosti HCA. Ve skupině s potvrzenou
funisitidou analýza nemohla být provedena pro
nízký počet vzorků.
Ač se nám nepodařilo potvrdit naši hypotézu
o zvýšenékoncentraci sTLR2 v pupečníkovékrvi
u žen postižených HCA a funisitidou, existují jiné
markery, které by bylo možnépoužítk identifi-
kaci zánětlivých změn. Například již zmíněný
sCD163 nebo IL-6 a IL-8. Všechny tyto molekuly
byly signifikantně zvýšenév pupečníkové]<rvi
u pacientek s HCA a funisitidou oploti ženárnbez
známe]< zánětu 12, 24l . Hledání dalších ukazatelů
zánétu u pacientek s PPROM touto neinvazivní
metodou můženapomoci včasnéléčebnéintervenci.
,]:,.j:]l':,:' ii:: ti:l,
Námi studovaný biomarker sTLR2 se vyskytovš e ch analy z ov aný ch v zor cích p up e č n íko v é
krve. Neprokázali jsme však změny v koncentraci
sTLR2 v pupečníkovékrvi při porovnání jeho hladin
u žen s HCA nebo funisitidou.
v
al ve
Práce byla podpořena přoiektem,,PRVOUK",
P37/1O, Univerzity KarIovy v Praze,
Lékařskéfakulty UK v Hradci Králové
a deciduálních buňkách se signifikantně zvýšila
při bakteriální či virové infekci u předčasných a gřantem NT13461-4/2o12lGA MzČR.
porodů ve srovnání
s
plodovými obaly bez infekce
[15J. Egawa a kol. zkoumali přítomnost bakterií
U r eaplasma urealytícum a My coplasma ho mínísv pupeční]<u u předčasně narozených dětí a pouze :uI0 %
z analyzovaných vzor]<ů byla přítomna alespoň jed-
na z bakterií. Zároveň u těchto 10
%
novolozenců
byla potvrzena funisitida [11]. K invazí patogenŮ
do pupečníku a rozsáhié imunitní reakci dochází
zřejmě jen v těch nejzazšíchpřípadech. Tím by se
mohla vysvětlit absence změn v koncentraci sTLR2
v pupečníkovékrvi.
V neposlední řadě je potřeba zmínit možný vliv
dávek ]<orti]<osteroidů na hladiny sTLR2 v pupečníkovékrvi. I(ortikosteroidy se využívajív porodnictví k indu]<ci maturace plicní tkáně u nezralých
ptodů. Podávají se pacientkám v gestačnímtýdnu
mladšímnež 33+6 [Z]. Patří ovšem mezi imunosupresivní léky, jež potlačují produkci mnoha a]<tivačníchmolekul v imunitních buňkách a mohly
by mít potenciální v]iv na uvolňování sTLR2 [6].
I( vyloučení vlivu dávek koItikosteroidů na koncentrace sTLRv pupečníkovékrvi, byla provedena
přídatná anaLýza dat (není zobrazeno). Nebyly
nalezeny významné rozdíIy v hladinách sTLR2
mezi pacientkami, kterým byly kortikosteroidy
podány (gestační stáří < 33+6), a těmi, které kortikosteroidynedostaly (gestačnístáří > 34+0). Tato
analýza porovnávala skupinu s HCA a skupinu
čEsúGYNEKoLoGlE
_,-a
Akiřa, S., Uematsu, S., Takeuchin O, Pathogen recognit on and
innate mnlun ty, Cel|,20O6, 124,p.783 B01.
2. And]ys, C., Drahosova, M., Hořnychova, H., et al. Umb icaI
cord b ood concentrat ons of lL-6, L-B, and ]V]VP-B ]n pre9nancy
comp lcated by preterm premature rupture of the membranes
and hlsto og ca] chorioamn on tls, Neuro Endocrlno Lett,2Ol0,3l,
l,
p, 857-B63,
3,
f|u
And]ys, C., Kacerovsky, M., Díahosova, M,, et al. Amnlot c
d so ub e To| - ike receptor 2 in pregnancies comp icated by
preterm pre abor rupture of membranes, J Matern FetaL Neonata
Med, 2012 [Epub ahead of pr nt],
TNF, L l,
to chorioamn oni
tls and premature abor, J Perlnat lv]ed, l99B, 26, p.17 26.
5. Blencowe, H., cousens, s., oesteřgaaíd, Mz., et al. National,
4. A]ntzen, KJ., Kjollesdal, AM., Halgunset, J., et al.
It-6, L-B and so ub e TNF receptors in
re at on
regiona , and wor dw de estlmates of preterm b rth rates in the year
l990 for se ected countries: a systema
tic ana ysis and imp lcations, Lancet,2012, 379,p.2162 21]2
20]O with time trends since
Blottá, MH., DeKruyfí, RH., Umetsu, DT. Corticostero ds inh
bit lL l2 production in human monocytes and enhance their capacity to nduce LL 4 synthes s ln CD4+ ymphocytes J mmuno,
6.
l997, ]58, p, 5589-5595
7. Břownfoot, Fc., c]owtheí, cA., Middleton, P, Different cor
ticostero ds and req mens for acce]eratinq feta] unq maturation
'fr
Sr.l
Women at r]Sk of preterrn birth, Cochrane Database
2OOB(4),
p CD006764
De§sardo, N§., Mustaé, E., Des§aído, s., et al. Chot c:
:nd chronic ung d sease of prematur ty a paih ana , s :
ty, Am.] Perinato ,2a12,29, p, ]33 14O,
9, DiGiulio, DB., Romeřo, R., Amogan, HP., et al.',' :.,l,
F.e
8.
..
6 . pl, ii, a1o aburoon, o 1 o^ o
,,
"|.r6p,
labor: a molecu]ar and cu]ture-based ini,es. c:
2008,3, p, e3056
l0. Dulay, AT., Buhimschi, cs,, zhao, G., et al. s:
present n human amniotic f]uid and ra], ..:: _-:
tic lnf ammatorV response tc níec: c^ _
,:
-
::
( ntrace Iular react ve oxygen radica s) of fetal, but not materna],
7244 ]253.
Egawa, T., Morioka, l., Morisawa, T., et al.
ol, .J" ono V].opd -.
a
associated with pathogenes s of
'r
_.:::::-.a
:
_ :
53, 9.241-249.
'l2. Goldenbeřg, RL., Culhane, JF.,
Ep demio ogy and causes of preterr
p,75 84,
-- -
_::
_ '. -_,
Jre:
:-,
2c07.
lams, JD., Romero
. -.- _]-
. _]-E
R.
37l,
Goldenbéřg, RL., Hauth, Jc., Andlews, WW. - .._. -' ll-! l| _Dctonand preter[nde very, N Enq].] ir]e: -,,, :-_
r,0 l507,
14. Gomez, R., Romeřo, R,, Ghezzi, F., et al. . '= :: ni am
,]98,
matory response syndrome, Am : C::.-. :,--,:
l79,
13.
:_
o 194 2a2,
15.
Hayati, AR., Mohamed, AE,, Tan, Gc.
ca study of
m
To| , ike receptors 2
w thout nfectlon. !1alays J
]6. He]man§en,
an:
,- -,-
.l -
Patho,20 0. 3- l'
MC,, Hetmansen, MG.
:,
-:
:=.,-
- ]- s_oChe
_.,--_- , th and
_
-.,
. ,'-_
cerebra pa|sy, C|ln Per nato ,2a06 33 c j-a-j]:
Howman, RA., chařles, AK., Jacques, A., et al.
p e5l836,
:'
llievski, V., Lu, SJ., Hirsch, E. Act vat c:
,
2 or 3 and preterm de ivery ln the mouse, i.::.:-;
p,315 320,
, ';
.
:'
"..=,
Neonata l4ed, 2a12, 25, 1699-17 a 4
Kaceřovsky, M., And]ys, C., Hornychova, H., et al. fuld souble To1 ke receptor 4 n pregnanc3s::--a
by preterm preabor rupture of the membranes _ :'a.:20.
]l48 ll55,
on of to
O'Neill, LA. Negative regu
a
Jl
kl er ce s n the mechan sms respone for spontaneous preterm abor and dellvery Am J Obstet
C]",neco, 2aa9,Zaa, p. 3OB e]-9,
37. osteřholt, HC., Lundeland, B., soneíud, T,, et al. The impact
a; ^l,a uronan on monocyte ToIl ike receptor express on n term
t c pat on of uter ne natura]
2l. Kaceřovsky, M., Dřahosovan M., Andtys, c,, et
al. f utd concentrations of soluble scaven9er recep:c. ':
n (sCD]63) n pregnancy colŤp icated by pre::.^ture rupture of the membranes and h sto og c chor c;--,
.] lVatern Fetal Neonata Med, 20]], 24, p 995-100l
22, Kace]ovský, M., Dřahosová, M., Hoínychová, H,,
s b
g ob
Amniotic f]uld lnter eukln 6 eve]s n preterrn premature
membranes, Ces Gyneko|, 2a09, 7 4, p, 403-4lO,
p 5l6-51B,
ke receptor-med ated mmune responses, Nat Rev
mmuno|, 2005, 5, p, 446-458,
34, Lindstróm, TM., Bennett, PR. The ro|e of nuc|ear factor kappa
B n human abour. Reproduction,2O05, l30, p 569-58],
35. López, MC., Palmer, BE., Lawíence, DA. Phenotyp c d ffe
rences between cord b ood and adu t per pheral b ood Cytometry
B C|]n Cvtom, 2a09, 76, a. 37-46.
36. Muřphy, sP., Hanna, NN., Fast, LD., et al. Evidence for par-
p
rL][
-':rl
et al.
_t.l.,'
Kace]ovsky, M., Dřahosova, M., Hořnychova, H,, et al. Va ue
cf amn oilc f uid ]nterleukin-8 for the prediction of h sto ogica
chorioamnionitls in preterm preTnature rupture of membranes,
l',]euro EndocrlnoI Lett, 2009, 30, p, 733 738,
23.
LeBoudeř, E., Rey-Nores, JE., Rushmere, NK., et al. So|ub e
forms of To ] l ke receptor (TLR)2 capabIe of modu at ng TLR2
t
Kaceíov§ky, M., Andly§, C., Drahosova, M., et al.
Neonata] Med,2Ol2,25, p,
2B7, p, l3170-138l
33. Liew, FY,, Xu, D., Brint, EK.,
|-
w th preterm prelabor rupture of the membran:: _
lO99 ll06
lchikawa, R., et al, Novel bacter a | poproteln structures conserved in |ow-GC content 9rarn-pos tive
bacterla are recognized by To |- ike receptor 2, J B oI Chem, 2Ol2,
32,
::
To
:'
28, p,
30. Kuřokawa, K., Ryu, KH.,
2Oa3,171,p 6680,6689
32. Liang, F., Huang, N., Wang, B. Human to |lke receptor gene
expression in human puImonary granuIe epithe a ceI s and urn
bii caI vein endothe ia cells. Hua X Yi Ke Da Xue Xue Bao, 2O0],
19.
ike receptorlfam ly members n the alTn c.
King, AE., Kelly, RW., Sallenave, JM., et al. Innate mmune
defences n the human uterus dur ng pregnancy P acenta, 2007,
29.
s gnaling are present in human plasma and breast rn k. J Immunol,
and haernatolog ca1 markers in the mate,-: _., :, _
nfant c rcu|ation in histo|oglca chor oamr :- .. ]_,i
7,
monocytes and granu ocyies in the fetai inf ammatory response
syndrome. .] Perinat Med, 2009, 37, p, 543-5ý,
27.Kim, YM,, Romeío, R., Chaiworapongsa, T., et al. To l- ke receptor-2 and -4 ln the chor oamniot c membranes in spontaneous
|abor at term and n preterm partUrit on that are aSSoC ated W th
chortoamn onit s, Arn J Obstet Gynecol, 2aa4,191, p. l346 1355
28. Kimbřel!, DA, Beutleí, B. The evo ut on and genetics of lnnate
immunity, Nat Rev Genet,2001,2,a 256 267.
3].
:ns and
'l7.
ta,
p 1228-1234.
Kaceřovsky, M., To§net, J., D]aho§ová, M., et al. Pentrax n
J ln amn ot c fluid as a marker of lntra-amniotic nf ammat on
l] \r'Jomen W th preterm premature rUi:)ture of membranes, nt .]
Gynaeco Obstet, 2O10, 10B, p, 2O3 2O6,
26. Kim, sK., Romeío, R., chaiwořapongsá, T., ét al. Evidence of
changes n the immunophenotype and metabo c characteristics
.'
_
lis, J Matern Feta Neonata Med, 20ll, 24,
25.
.]
-
:- r j
11.
24. Kaceřovsky, M., Drahosova, M.n Hotnychova, H., et al.
, --:: ce] cord b ood concentration of solub e scavenger receptor
':, le.noglob n, but not pentraxin 3, is of va ue for the ear y postl:;:_um dent f catton of ihe presence of h sto ogica chorioamnio
cord blood, Acta Paediatr,2aP 1al,a.7a6-713.
38, Patni, S,, Synem, LP.,
sesteř, AL., et al, Expression and
-::
, t;r of Toli L ke Receptors'l 9 in the Human Term Placenta
8,0
;.243 248
.-a
Cl.anges ASSoC ated wlth Labor at Term, B o] Reprod, 20O9,
Piccinini, AM,, Midwood, KS. DAMPen ng lnf ammat on by
mocu aI I.g TLR signa ling, Med ators nf amm 2ala r:.1 21.
40. Raby, Ac., Le Boudeř, E., colmont, c., et al. So ub e TLR2
39.
2013,78,
č,4
ČEsKÁ GYNEKoLoGlE
371
],,-:
^' 3TTation W thoUt cornprornlsing bacter a cIearance
] s-_.: r9 TLR2 trigger ng, J mrnuno1,2009, l83, p,506 517.
4], Ráy, A., cot, M., Puzo, G., et al. Bacteria ceI walI macroam:- a^ es Pathogen-/microbe-assoc ated mo ecu ar patterns de-
5l. s]iniva§an, M., Kodumudi, KN., Zunt, §L. So ub e CD]4 and
::::ed by mammal an innate irnmune system, Biochimie, 20l3, 95,
52.
:
:,_,
:33
42
42. Rome]o, R., Espinoza, J., Goncalves, LF., et al. The ro|e of
nf ammatlon and
infection n preterrn birth, Sem n Reprod
lý]ed,
2a01,25,a,21-39.
43. Rome]o, R., Gotschr F,, Pinéles, B., Kusanovic JP. Inflarnrnation in pregnancy. its ro es in reproductive phys oIogy,
obstetricaI compI cations, and
p.3194 2a2,
feta injury, Nutr Rev, 2007,
65,
sadeghi, K., Betgel, A., Langgartnel, M., et al. mmaturity
of infection contro| in preterm and term newborns s assoclated
44,
wth
mpaired to
|-1ike
receptor signaI ng, J lnfect Dis, 2007,195,
p.296-302.
saláíia, cM., Weigl, c., silbe]man, L. The prevalence and d s-
i
126, p.31-37.
Takeda, K., Akira, S. To
mmuno|, 20a5,17, p.1 14.
53.
of
smitht R. Parturltion. N Enq] .] Med, 20O7, 356, p,271-283,
50. smulian, Jc., shen-schwařz, s,, vintzileos, AM., et al.
CI nica chorloamnion t s and h sto ogic placenta inf]ammation,
Obstet Gvneco| ,1999,94, p, l000-]005
cEsKAGYNEKoLoGlE
2a.B,78,č_4
nt
Takeuchi, o., Kawai, T., Můhlíadt, PF., et al. Discrimination
bacteria poprote
ns by To |- ike receptor 6, lnt Immunol, 20Ol,
receptorl n mediat ng immune response to m crobia
lipoprotelns, J mmuno ,2aa2,rcg, p, l0-14.
55. Te]ai, K., Mochizuki, N. Heat shock protelns regulates cardiomyocytes via To|]-like receptors, Crc J,2a11,75,p.2322 2323,
Tutdibi, E., Hunecke, A., Lindner, U., et al. Levels of cytokines in umbllica cord b|ood ln relation to spontaneous term abor,
55.
J Perinat |4ed,2012,40,
p,52l
532.
Velemínský, M., Tosne], J. Re ationsh p of vagina microflo,
ra to PRoM, pPRoM and the rsk of ear|y-onset neonata sepss,
58.
p,959 962
iy,
of To l-]ike
tributlon of acute piacentaI inf|ammation in uncompl cated term
pregnancies, Obstet Gynecol,1989,73, p, 3B3 3B9,
46. satář, M., Turhan, E., Yapicioglu, H,, et al. Cord b|ood cytokine |evels n neonates born to mothers with pro onged premature rupture of membranes and its relationship wlth morbid ty and
49.
ke receptors in innate mmun
p,933-94a.
54. Takeuchi, o., §ato, s,, Hoíiuchi, T., et al. Cutt ng edge: roIe
57.
i
1-1
13,
45.
rnortaI ty, Eur Cytokine Netw, 20OB, 19, a.37-41.
47.Schwandner, R., Dziarski, R.,Wesche, H., etal. PeptidogIycanand 1ipoteichoic acid- nduced ce|l activation ls mediated by to||ke receptor 2, J B o| Chem, 1999, 21 4, p- 17 406-17 409.
48. Shen, CM., Lin, §C., Niu, DM., Kou, YR. Labour ncreases the
surface expression of two To]l- ike receptors ln the cord b ood
rnonocytes of hea thy term newborns. Acta Paediatr, 2009, 98,
: L
to |-l ke receptor-2 are potent a sa ivary biomarkers for oral
chen p anus and burnlng mouth syndrome, C| n mmuno, 20OB,
Neuro Endocrinol Lett, 2O0B, 29, o. 205-221.
Wypych, J., Bennett, LG., schwartz, MG.n et al. So ub|e kit
receptor in human serum, B ood,1995, 85, p,66-73,
59. Yoon, BH., Rome]o, R., Shim, JY., et al. C-reactive protein
in umbi] cal cord bood a s mpe and widey ava labe c|inical method to assess the risk of amn otic f]uid nfection and fun slt s,
J Matern FetaI NeonataI Med,2003,14, p, B5-9O,
Mgr. Eva Mitášová
Ústav klinické imunologie a alergolo9ie
univerzita karlova v praze
LF a FN Hradec Králové
Sokolská 58]
500 05 Hradec Králové
e-mail: [email protected]