Martina Kadlecová

MOLEKULÁRNÍ BIOTECHNOLOGIE
aneb jak dnes vyrábíme inzulin
T-exkurze, podzim 2012
vypracovala: Martina Kadlecová
lektor: Lukáš Chrást
Proč jsem si zvolila toto téma?
...připadalo mi takové zvláštně provokativní
●
●
●
GMO organismy! Nesežere mě to?!
Biotechnologie. Tak se dělá těsto, pivo a sýr. Ale
inzulin?
Molekulární... hm.. to zní jako výzva..
TEORETICKÁ ČÁST
GMO organismy nemusí být nutně
škodlivé
●
přijmutí okolní cizorodé DNA bakterií
se vyskytuje docela běžně
1928 Griffitův experiment
●
●
všechno je pod přísným dohledem
vynesení GMO materiálu z laboratoře
se trestá vysokými pokutami
… není potřeba se bát
Jak udělat bakterii, co produkuje
inzulin?
1. do plazmidu vložíme úsek DNA, který kóduje
výrobu cílového produktu
2. vypěstujeme si vhodnou bakterii – třeba E. coli
3. přinutíme bakterii, aby plazmid přijala
4. bakterie obohacené o novou DNA pěstujeme
ve fermentoru
5. sklidíme výsledný produkt
PRAKTICKÁ ČÁST
18. prosince 2012 Loschmidt laboratories,
Masarykova univerzita
8:45 – 15:00
●
●
●
plášť a přezůvky s sebou
nastudovat si bezpečnostní pokyny pro práci v
laboratoři
oběd zajištěn v Academic canteen
ÚLOHA 1: chemická transformace
buněk
Jak dostat plazmid s cílovým
genem do bakterie?
●
●
●
Nejdříve musíme umět pipetovat
malé objemy.
Plazmid se přidá k bakteriím, celé
se to zahřeje, zchladí, protřepe.
Pak naneseme na misku s
agagrem a necháme přes noc
kultivovat.
...na fotce vidíte, co mi vyrostlo!
ÚLOHA 2: křížový roztěr
bakteriální kultury
Máte směs několika neznámých druhů
bakterií. Chcete vědět, co jsou zač. Co
uděláte?
●
Na Petriho misku s agarem naneseme do
jednoho místa směs bakterií.
●
Kličkou z tohoto místa vedeme čáry.
●
Vyměníme kličku a děláme další čáry.
●
A nakonec had.
… celým postupem se směs bakterií naředí a
až narostou, budeme schopni jednotlivé
kolonie určit
… když to dělá profesionál, může to vypadat
jako na tomto obrázku
… když jsem to dělala já, dopadlo to takhle
●
směs bakterií Micrococcus luteus (žluté) a
Kocuria rosea (růžové)
ÚLOHA 3: exprese rekombinantního
proteinu v laboratorním fermentoru
… jak se ty rekombinantní
potvůrky vlastně pěstují
●
●
musí se s nimi míchat, zajistit
jim optimální teplotu a pH
potřebují také něco žrát
… a my jsme si je chvíli
zkusili pěstovat ve fermentoru
podobném tomu na obrázku
Jak je to vlastně s inzulínem?
●
●
●
pro pacienty s cukrovkou ho potřebujeme hodně
není technicky možné získávat ho ze slinivek
prasat a krav... museli bychom mít těch slinivek
strašně moc
proto je jednodušší chovat místo krav
rekombinantní bakterii E. coli, která izulín
vyprodukuje rychle, levně a šetrně k životnímu
prostředí
… to jsem teď chytrá, že! :)
ZÁVĚR
… celá exkurze byla zábavná
●
dozvěděla jsem se spoustu nových věcí
●
vše jsem pak viděla v praxi
●
dostala jsem se do moderních laboratoří
… víte, že pracují i s halogenalkan
dehalogenasou??
●
zjistila jsem, jak že je to s tím inzulínem
… jsem moc spokojená, díky moc!!!