FAGOCYTÓZA PARTIKULÍ HEMA

FAGOCYTÓZA PARTIKULÍ HEMA
Vyšetřujeme schopnost krvinek fagocytovat cizorodé částice, konkrétně schopnost ingesce
(pozření) částic.
Ingesce kvasinek
Ingesce partikulí HEMA
Můžeme použít například buňky kvasinek, nebo například uměle připravené částice HEMA
(MSHP – mikrosférické hydrofilní partikule). V tomto cvičení použijeme partikule HEMA.
Jejich předností je standardní velikost (1µm), nízká adherence a sklon k agregaci a dobrá
barvitelnost.
Pomůcky:
Savčí (včetně lidské) krev či hmyzí hemolymfa, souprava suspenze MSHP a PBS pufru,
zkumavky Eppendorf, pipety, podložní skla, roztoky na panoptické barvení., termostat nastavený
na 37 °C
Postup:
1. Připravíme ředěnou suspenzi mikročástic. Souprava obsahuje dvě ampule: jednu s
mikročásticemi a druhou s PBS pufrem, před použitím se ampule s pufrem nalije do
ampule s MSHP a důkladně protřepe.
2. Krev či hemolymfu smícháme se suspenzí MSHP částic, vždy v poměru 2:1.
A) Množstevní poměry pro lidskou krev
1 ml čerstvě odebrané (do 1h po odběru) nesrážlivé krve a 0,5 ml ředěné suspenze
MSHP partikulí a promíchám.
B) Množstevní poměry pro hmyzí hemolymfu
10 µl hemolymfy a 5 µl ředěné suspenze MSHP partikulí a promíchám.
3. Inkubace 60 minut při teplotě 37°C v termostatu; občas protřepat.
4. Zhotovení roztěrů, panoptické barvení Pappenheimovou metodou.
5. Hodnotí se alespoň ze 200 až 300 buněk na světelném mikroskopu.
Hodnocení:
Hodnotí se celková fagocytární aktivita leukocytů periferní krve. Jako fagocytující se hodnotí
buňka s více než třemi pohlcenými partikulemi. Vyjádříme fagocytární aktivitu buněk a
fagocytární index.
Fagocytární aktivita (FA) = počet fagocytujících buněk/počet počítaných buněk
Fagocytární index (FI)= počet všech fagocytovaných partikulí/počet fagocytujících buněk
Výsledky:
Závěr:
Datum a podpis studenta:..............................................
Hodnocení a podpis vyučujícího:..............................................