Časopis - Beckman Coulter

Transkript

informační magazín číslo 3 - 2006
ANALYZÁTORY BUNĚK A ČÁSTIC
AKTIVINY A INHIBINY V KLINICKÉM
VÝZKUMU I PRAXI
SOUPRAVY PSA FREE IRMA A PSA TOTAL IRMA
NAKALIBROVÁNY NA MEZINÁRODNÍ STANDARD
V roce 1953 zakládají
bratři Wallace
a Joseph Coulterovi
rodinnou, brzy velmi
úspěšnou, společnost
Coulter Electronics
pro výrobu a distribuci
čítačů částic.
Odkaz zakladatelů
společnosti
Úvodník minulého čísla našeho časopisu byl
věnován Dr. Arnoldu Beckmanovi. Stejnou pozornost bychom chtěli věnovat i zakladatelům
Coulter Corporation, druhé společnosti, z níž
vznikla současná korporace Beckman Coulter,
bratrům Wallaceovi a Josephu Coulterovým.
Wallace Henry a Joseph Richard se narodili v rodině Josepha
Coultera staršího, který byl výpravčím a drážním telegrafistou.
V mládí se bratři Joseph a Wallace Coulterovi (na snímku zleva
doprava) vyznačovali oduševnělým výrazem.
Wallace Henry Coulter (1913 – 1998) byl těmi, kdo ho znali, popisován jako mimořádně všestranný člověk, inženýr, vynálezce a vizionář i úspěšný podnikatel, a také jako génius a podivín vybavený
velkou dávkou pokory a soucitu.
Wallace H. Coulter prožil velmi bohatý život plný zvratů. S mimořádným zaujetím se celý život věnoval možnostem využití fyzikálních principů ve vědeckém výzkumu. Tento zájem ho přivedl k vynálezu Coulterova principuTM, referenční metodě pro stanovení počtu a velikosti částic suspendovaných
v kapalině.
Vedle toho ho velmi zajímala různorodost kultur národů, které poznal během
svých mnoha dlouhodobých, během 2. světové války i nedobrovolných, pobytů
v různých koutech světa (pobýval v Manile, Hong Kongu, Macau, Cantonu,
Šanghaji, Singapuru, do USA se vracel přes Afriku a Jižní Ameriku). Čínská kultura a umění ho doslova fascinovaly a byly impulsem pro založení jeho pověstné sbírky uměleckých předmětů z jadeitu.
Převratný objev volumetrické impedance - a vynález spočívající ve využití
měření elektrického odporu ke stanovení počtu a velikosti mikroskopických
částic - se zrodil v r. 1948 v domácí laboratoři, když hledal postup pro zjišťování velikosti částic a napadlo ho použít vzorek vlastní krve.
2
Pokusy o přihlášení patentu byly zprvu neúspěšné, když několik právníků považovalo za nemožné
patentovat „otvor“, vyhrála však Wallaceova houževnatost a v 1953 mu byl patent konečně přiznán.
V témže roce zakládají bratři Wallace a Joseph
Coulterovi rodinnou, brzy velmi úspěšnou, společnost Coulter Electronics pro výrobu a distribuci čítačů částic. Podíl druhého z bratrů Josepha (1924
– 1995) na úspěchu firmy byl zcela rovnocenný; byl
presidentem firmy, autorem a spoluautorem prvních patentů a spolutvůrcem celkové filosofie společnosti a jejího poslání „věda sloužící humanitě“.
Ucelené pojetí firmy (výzkum, vývoj, výroba, prodej a servis přístrojů spolu s nabídkou reagencií
a kontrolních materiálů a odborným zaškolením)
bylo doslova novátorské a nemělo nikde obdoby.
Spektrum přístrojů se kromě hematologických
analyzátorů rozšířilo o průtokové cytometry a analyzátory částic pro řadu odvětví od plynárenského,
přes kosmetický až po potravinářský průmysl. Využití Coulterova principu se tak, aniž si to uvědomujeme, dotýká mnoha stránek našeho každodenního
života.
Joseph Coulter jako nadaný technolog a organizátor se zasloužil o praktické aplikace, o tvorbu
projektů jednotlivých výrobních řad a v pozdějších
letech se zaměřil na výzkum a léčbu nádorových
onemocnění a AIDS.
Wallace Coulter zůstal přes veškeré úspěchy
a mimořádné zásluhy i nadále sám sebou, soustředěně se věnoval svému oboru a výsledek byl mimořádný: celkem mu bylo uděleno 82 patentů, mnoho
z nich za vynálezy z pozdějších let. Byl nositelem
řady ocenění a vyznamenání (nejvýznamnější John
Scott Award for Scientific Achievement – udělované od roku 1816 geniálním mužům a ženám za
vynálezy, které měly revoluční význam pro lidstvo),
získal čestný doktorát a byl významným členem
vědeckých společností. Posmrtně byl uveden do
Národní síně slávy vynálezců (National Inventor´s
Hall of Fame).
BĚLA ŘÍČAŘOVÁ
E-MAIL: [email protected]
Obsah
Analyzátory buněk a částic
4
V roce 1953 Wallace Coulter (1913-1998), zakladatel a bývalý prezident
společnosti COULTER Corporation, patentoval tzv. Coulterův impedanční
princip, metodu pro stanovení počtu a velikosti částic v kapalině.
Nové rotory
6
Pro stolní ultracentrifugy a vysokovýkonné centrifugy Beckman Coulter
Aktiviny a inhibiny v klinickém
výzkumu i praxi
7
Inhibiny spolu s opačně působícími aktiviny jsou glykoproteiny, které se řadí
do rodiny transformujícího růstového faktoru α (TGF α) Oba typy molekul
ovlivňují prostřednictvím zpětné vazby hypofyzární produkci FSH.
Imunochemie – stanovení BNP
9
Reagencie umožňující stanovení natriuretického peptidu typu B – BNP na
imunochemických analyzátorech Beckman Coulter: Access, Access 2 a UniCel
DxI 800
Časopis vydává a distribuuje
IMMUNOTECH a.s., Radiová 1, 102 27 Praha 10
Časopis připravují
Mgr. Jiří Moos, CSc.
Mgr. Patrik Šaf
RNDr. Helena Kurzweilová,
RNDr. Běla Říčařová, CSc
Ing. Petr Suchan
Mgr. Markéta Krupařová
Ing. Roman Šandrik, PhD
Monika Lahodová
BIOSITE Triage BNP
na Beckman Coulter UniCel DxI 800
9
Natriuretický peptid typu B patří mezi hormony regulující krevní tlak. Jeho
zvýšená tvorba provází městnavé srdeční selhání (srdce nedodává dostatečné
množství krve), hypertrofii stěny levé komory srdeční, systolickou a/nebo
diastolickou dysfunkci LK, ischemickou chorobu srdeční (zejména její akutní
formy), přetížení krevního oběhu aj.
Soupravy PSA free IRMA a PSA total IRMA
12
nakalibrovány na mezinárodní standard
Do časopisu přispěli
RNDr. Běla Říčařová, CSc
Mgr. Pavel Kružík
Mgr. Jiří Moos, CSc.
RNDr. Helena Kurzweilová
Ing. Petr Matějka
RNDr. Zdeněk Veškrna, OKB Nemocnice
Znojmo
Mgr. Patrik Šaf
Dr. Mária Gavelová, CSc.
Ing. Tichomír Torda, CSc.
Mgr. Markéta Krupařová
Ing. Petr Suchan – titulní foto
Grafická podoba
Nina Nováková
Tiskárna
REPRO servis s. r. o.
Starochuchelská 15/195, 159 00 Praha 5
Boli sme pri tom
14
Dňa 21. apríla 2006 prvé súkromné laboratórium na Slovensku ADL s.r.o. so
sídlom v Prešove si pripomínalo 10.výročie svojho vzniku.
Prenatálna diagnostika
15
Dňa 30. marca 2006 sa v Žiline uskutočnil pracovný deň na tému
Prenatálna diagnostika
Prezentácia firmy na podujatí
15
V. Martinské dni imunológie, ktoré sa konali: 29. marca – 1. apríla 2006
v Kine Strojár, Vajanského námestie 2 v Martine.
Kde se můžeme setkat
(červen - září 2006)
16
Konference/seminář s účastí společnosti Immunotech, a.s.
formou stánku
Náklad čísla
1000 výtisků
3
Analyzátory
buněk a částic
V roce 1953 Wallace Coulter (1913-1998), zakladatel a bývalý prezident společnosti
COULTER Corporation, patentoval tzv. Coulterův impedanční princip, metodu pro stanovení počtu a velikosti částic v kapalině.
ato technologie navždy změnila klinickou diagnostiku a lékařský výzkum
a stala se základem hematologických analyzátorů. Coulterův princip je
v současnosti nejrozšířenější metodou pro stanovení počtu a velikosti
částic v kapalině v lékařských a průmyslových aplikacích.
Po patentování principu zahájil Wallace společně se svým bratrem Josephem výrobu prvních přístrojů Coulter Counter pro počítání částic a buněk.
Po úspěšném startu v roce 1958 bratři Coulterové společně založili společnost Coulter Electronics, Inc. v Miami na Floridě.
COULTER princip
Metoda COULTER počítá a stanoví velikosti buňky zjištěním a změřením změn
elektrického odporu, když částice (např. buňka) ve vodivé kapalině prochází
malou aperturou.
Každá buňka suspendovaná ve vodivé kapalině (ředícím roztoku) funguje jako
izolátor. Průchod každé jednotlivé buňky aperturou zvyšuje v daném okamžiku
elektrický odpor mezi dvěma ponořenými elektrodami, umístěnými na obou
stranách apertury. To vyvolá elektrický impuls, který lze načítat a měřit jeho
velikost.
Zatímco počet impulsů indikuje
počet částic, velikost elektrického
impulsu je úměrná buněčnému
objemu.
Společnost Beckman Coulter
nabízí ucelenou řadu analyzátorů
pro měření fyzikálních vlastností
částic. Součástí této koncepce
jsou také analyzátory počtu a velikosti částic nebo buněk COULTER Z1, Z2 a Multisizer. Tyto přístroje nachází široké uplatnění
v biologických laboratořích, potravinářství a pivovarnictví, výrobě kosmetiky
a dalších průmyslových oborech např. ve výrobě cementu, tonerů, atd.
Analyzátory série Z jsou plně automatizované přístroje s jednoduchou kalibrací, které jsou ovládány pomocí klávesnice s LCD displejem. Jsou obzvlášť vhodné
jako náhrada pracných a nepřesných postupů manuálního počítání buněk pod
mikroskopem. Vyznačují se jednoduchou obsluhou a zanedbatelnými provozními
náklady. Přístroje měří buňky a/nebo částice o velikosti 1 až 120 µm. Analyzátory
serie Z pracují samostatně bez PC pracovní stanice, u typu Z2 je možno použít
připojení k PC a vyhodnocovat data pomocí externího software.
COULTER Z2 je nejnovější v řadě analyzátorů Z. Je určen pro měření velikosti
buněk včetně zobrazení distribuční křivky velikosti. Volitelně je možno pro zobrazení a vyhodnocování dat použít připojení k PC pracovní stanici se software
AccuComp.
V biologických laboratořích přístroj umožňuje analyzovat buněčné linie, řasy,
krevní buňky, plankton, spermie, kvasinky …
4
COULTER Multisizer je nejflexibilnější analyzátor
částic ve své třídě a je určen pro stanovení velikosti a počtu částic o velikosti 0,4 až 1200 µm. Kromě
biologických laboratoří přístroj nachází uplatnění
ve farmaceutickém průmyslu, ve výrobě polymerů,
barviv a tonerů a v potravinářství.
Přístroj je ovládán pomocí specializovaného software, který umožňuje ukládání dat a jejich off-line
analýzu a práci s grafy.
Vi-Cell XR - analyzátor
životnosti a velikosti buněk
Analyzátor Vi-Cell pracuje na principu analýzy obrazu a kromě velikosti, distribuce velikosti, počtu
a koncentrace buněk automaticky stanovuje i životnost buněk pomocí barvení trypanovou modří.
Trypanová modř barví cytoplazmu, ale neprochází
skrze intaktní buněčnou membránu - barví se tedy
pouze mrtvé buňky. Tato metoda je používána při
monitorování buněčných linií v kultuře, pro kontrolu přežití po rozmražení nebo např. v buněčné
toxikologii.
Průtokové cytometry CELL LAB QUANTA
a CELL LAB QUANTA SC
Obraz buněčné populace je snímán CCD kamerou
v ploché průtočné cele a vyhodnocen pomocí obrazové analýzy ve stupních šedi.
Výsledkem měření je stanovení koncentrace buněk, koncentrace a procentuální zastoupení živých buněk, distribuce velikosti buněk v populaci,
vyhodnocení cirkularity buněk a analýza shluků
buněk – clusterů. Vi Cell XR umí vyhodnotit buňky
velikosti od 2 µm do 70 µm, tj. od velikosti kvasinek až po shluky několika set buněk. Výsledky
analýzy tělísek o velikosti až několika set buněk
byly velmi konzistentní a byly pro nás milým překvapením.
Vi Cell XR analyzuje suspenze buněk v rozmezí
koncentrací 5×104 to 1×107 /mL. V tomto rozmezí
je korelace koncentrace naměřené a koncentrace
skutečné velmi dobrá a závislost je lineární.
Pro analýzu dynamiky populace je v software obsažena možnost „bioprocess“, umožňující sledovat
dynamiku populace.
Přístroj je vybaven autosamplerem na 12 pozic.
Na jednu analýzu spotřebuje pouze 0,5 ml vzorku,
analýza je plně automatická („walk away“) a trvá
méně než 3 minuty včetně „úklidu“ a přípravy přístroje pro další analýzu. Přístroj nevyžaduje žádnou
denní údržbu, celková údržba je minimální.
Pokročilá zobrazovací technologie je vybavena
automatickým zaostřováním, CCD kamerou o rozlišení 1394 x 1040 a dodatečným zoomem k rozlišení detailů jednotlivých buněk a jejich shluků.
Systém je vybaven uživatelsky příjemným a intuitivním software, který umožňuje kvantitativní
zpracování dat, statistické vyhodnocení, 3D grafy či
sledování trendů. Data mohou být exportována
jako soubor v MS Excel. Software vyhovuje požadavkům 21 CFR Part 11.
Průtokový cytometr QUANTA je určen především pro výzkumné aplikace.
Kombinuje měření objemu buněk Coulterovou metodou a fluorescencí na dvou
fotonásobičích s použitím více zdrojů světla. Na měření objemu nemá vliv tvar,
barva a optické vlastnosti částic.
Volitelně je možno použít argonový laser (488 nm) nebo rtuťovou výbojku
(excitace při 366, 405 a 435 nm). Analyzátor je vhodný pro měření absolutních
počtů buněk a stanovení buněčného cyklu, apoptózy, životnosti buněk, měření
povrchových a intracelulárních znaků apod.
Pro přístroj jsou k dispozici kompletní postupy pro značení buněk, nastavení
přístroje, měření a hodnocení. Pro měření různých typů buněk (např. kvasinek
nebo bakterií) lze použít tři volitelné průtokové kyvety 125, 70 a 25 µm.)
Analyzátor CELL LAB QUANTA SC je navíc vybaven detektorem pro pravoúhlý rozptyl světla (Side Scatter) a třemi detektory pro fluorescence. Snadno
vyměnitelné optické filtry umožňují použít široké spektrum fluorochromů jako
např. DAPI, Hoechst, FITC, PE, propidium jodid, 7-AAD, LDS751, PC5 a PC7 a fluorescenční proteiny CFP, GFP a YFP. Proliferaci buněk je možné měřit pomocí
5-(6-) karboxyfluorescein diacetát sukcinimidyl esteru (CFSE).
K měření buněčného cyklu je možné využít kombinace stanovení exprese
cyklinu A2-FITC a obsahu buněčné DNA pomocí 7-AAD po permeabilizaci ledovým metanolem.
Měření pravoúhlého rozptylu světla je ideální při měření heterogenních populací buněk a pro jejich odlišení podle granularity. V analyzátorech QUANTA je
použita patentovaná trojúhelníková průtoková komora, která zajišťuje hydrodynamickou fokusaci a stabilní osvětlení procházejících buněk. Při použití průtokové komory o velikosti 125 µm lze analyzovat částice o velikosti 3 - 40 µm.
Stanovení koncentrace buněk ve vzorku je zajištěno pomocí přesného mechanizmu aspirace do průtokové komory bez použití referenčních částic.
K ovládání přístroje a k analýze naměřených dat je určen specializovaný software, který umožňuje nastavení kompenzací překryvů emisních spekter fluorochromů. Data jsou ukládána ve formátu FCS 2.0 a v pracovních skupinách je lze
dále analyzovat v cytometrickém software (CxP Analysis, EXPO32 a další) na
dalších počítačích.
Tyto přístroje společnosti Beckman Coulter jsou důležitou součástí širokého spektra výrobků pro výzkum v oblasti Life Science, které zahrnuje centrifugaci a ultracentrifugaci, sekvenování a fragmentační DNA analýzu,
analýzu genové exprese a SNP analýzy, proteomiku, průtokovou cytometrii,
laboratorní automatizaci, kapilární elektroforézu, HPLC, analyzátory částic,
scintilační měření, spektrofotometry, fluorimetry a luminometry.
PEVEL KRUŽÍK, E-MAIL: [email protected]
JIŘÍ MOOS, E-MAIL: [email protected]
ROMAN VLČEK, E-MAIL: [email protected]
5
Nové monoklonální protilátky
pro průtokovou cytometrii
CD85d (ILT4)-PE
obj.číslo A22334, 100 testů
Molekula CD85d je exprimována na monocytech, makrofázích
a dendritických buňkách.
CD136 (RON)-PE
obj.číslo A22363, 100 testů
Antigen CD136 je exprimován na keratinocytech, makrofázích, erytroblastech a plicních epiteliálních buňkách.
Anti-Cyclin A2-FITC
Obj. číslo A22327, 100 testů
Tato monoklonální protilátka je určena pro studium exprese cyklinu A2 v průběhu buněčného cyklu, zvláště pak v průběhu S fáze, ve které dochází ke zvýšení exprese, a s vrcholem v G2 fázi.Takto lze odlišit buňky v mitotické fázi
(cyklin A2 negativní) od buněk v G2 fázi (cyklin A2 pozitivní). Cyklin A2 je znakem proliferujících buněk.
Stanovení exprese cyklinu A2 je vhodné kombinovat se značením obsahu buněčné DNA pomocí 7-AAD (obj. číslo A07704). K permeabilizaci buněčné membrány lze použít ledový metanol nebo reagencii IntraPrep (obj. číslo A07803).
CDw125 –PE, Anti-IL-5Rα
Obj. číslo A31894, 100 testů
Tato nová monoklonální protilátka detekuje α řetězec receptoru pro IL-5 (IL5Rα) Ten spolu s β řetězcem (CD131) tvoří vysokoafinitní receptor pro IL5.
β řetězec je společný pro receptory pro IL5, IL3 a GM-CSF.
IL-5Rα je exprimován na bazofilech a eozinofilech a jejich prekurzorech. Neutrofily, monocyty a lymfocyty tuto molekulu neexprimují.
ZAP-70
Zvýšená exprese proteinu ZAP-70 v lymfocytech B u pacientů s B-chronickou
lymfatickou leukemií je prognosticky nepříznivým faktorem.
Pro průtokovou cytometrii jsou dodávány dva klony s výběrem z několika
fluorochromů.
klon 1367F12
AlexaFluor647
0,5 ml
obj. č. A24071
klon SBZAP
FITC
0,1 mg
obj. č. 731895
FITC
0,025 mg obj. č. 731896
PE
0,1 mg
obj. č. 731901
PE
0,025 mg obj. č. 731902
biotin
0,1 mg
obj. č. 731899
biotin
0,025 mg obj. č. 731900
Nové rotory
pro stolní ultracentrifugy
a vysokovýkonné centrifugy
Beckman Coulter
MLA-55 – rozšíření možností
stolních ultracentrifug
Stolní ultracentrifugy Optima MAX a Optima TLX jsou
prostorově i finančně úspornou alternativou k sálovým
ultracentrifugám. Parametr, který musíte obětovat jejich úspornosti není rychlost (Optima MAX dosahuje
přetížení až 1 019 000 g), ale kapacita rotoru. Rotory
stolních ultracentrifug mají typicky kapacitu v rozmezí
10 až 60 ml, rotor MLA-55 tuto hranici posunuje výrazně dále – rotor má kapacitu 108 ml (8 pozic po
13.5 ml) a je určen pro ultracentrifugy Optima MAX.
Max RPM 55 000, MAX g 287 000, K faktor 53
Objem zkumavel 8 x 13.5 mL, Objem rotoru 108 mL
AllSpin JS-5.3 – rotor „Nomen Omen“ pro
vysokovýkonné centrifugy
Nový výkyvný rotor pro centrifugy Avanti J26XP
a Avanti J-E, který najde uplatnění v každé laboratoři.
Zde je několik příkladů aplikací:
Buněčná analýza: kapacita až 2L (4 x 500 mL)
Adaptery pro kónické zkumavky (15 - 500 mL) pro separaci buněk, buněčných membrán, tkáňových homogenátů, krevních buněk …
Analýza DNA/RNA: kapacita až 24 mikrotitračních
destiček (4 x 6)
Vhodné pro všechny aplikace na 96-jamkových destičkách, např. izolace a purifikace DNA, čištění produktu
po PCR a sekvenčních reakcích …
Proteinová analýza: Kapacita na 72 (4 x 18) 15 mL
a 28 (4 x 7) 50 mL kónických zkumavek. Vhodné pro čištění proteinových lyzátů, precipitaci či filtraci proteinů.
Max RPM 5 300, MAX g 6 870, Objem rotoru 2 L
JIŘÍ MOOS
Současně jsou v nabídce soupravy vyrobené v rámci CUSTOM DESIGN SERVICE
pro přístroje s jedním nebo dvěma lasery:
CD5-FITC/ZAP-70-PE/CD19-PC5/CD(3+56)-PC7 25 testů
obj. č. 772587
CD5-FITC/ZAP-70-PE/CD19-APC/CD(3+56)-PC7 25 testů
obj. č. 7725887
PAVEL KRUŽÍK
6
nhibiny spolu s opačně působícími aktiviny
jsou glykoproteiny, které se řadí do rodiny
transformujícího růstového faktoru β (TGF β)
Oba typy molekul ovlivňují prostřednictvím
zpětné vazby hypofyzární produkci FSH. Existenci nesteroidního faktoru produkovaného gonádami, který inhibuje produkci FSH, předpověděl již v roce 1932 D.R.McCullagh. Další historie
tohoto faktoru se začala psát až o téměř 50 let později, kdy byla jeho molekula izolována a charakterizována.
Každá molekula inhibinu je tvořena jednou podjednotkou α (18 kDa) a jednou ze dvou podjednotek
β (každá cca 14 kDa). Podjednotky jsou spojeny disulfidickými můstky. Podle typu podjednotky β se
pak heterodimerní glykoprotein označuje jako inhibin A (α-βA) nebo inhibin B (β-βB). Podjednotky β
tvoří současně také molekuly aktivinů A (βA-βA), B
(βB-βB) a AB (βA-βB). Aktiviny a inhibiny se vyskytují
také v komplexu s vazebnými proteiny folistatinem
nebo α2-makroglobulinem. Vazba aktivinu s folistatinem ovlivňuje jeho biologickou i imunochemickou
aktivitu.
Podjednotky α a β jsou syntetizovány v různých
tkáních, např. v mozku a v nadledvinkách. Tyto tkáně mohou být zdrojem aktivinů. Např. aktivin A byl
nalezen v srdci, mozku, kostní dřeni a kosterních
svalech. Aktiviny mají široký rozsah působení. Bylo
zjištěno, že se uplatňují při embryogenezi, krvetvorbě, tvorbě kostí a apoptóze jaterních buněk. Naproti
tomu pravděpodobně jediným zdrojem inhibinů jsou
gonády. U žen jsou inhibiny produkovány granulózními buňkami folikulu. Inhibin B je syntetizován zejména malými antrálními folikuly. Inhibin A je produktem dominantního folikulu a po ovulaci je
uvolňován žlutým tělískem. V těhotenství je pak
jeho hlavním zdrojem fetoplacentární jednotka.
U mužů se v séru nachází především inhibin B, jehož
produkci zajišťují Sertoliho buňky varlat. Primární
úlohou inhibinu B je kontrola gametogeneze pomocí regulace produkce FSH negativní zpětnou vazbou.
V cirkulaci se vyskytuje také volná podjednotka
α. Její molární koncentrace výrazně převyšují koncentrace inhibinů i aktivinů, nicméně její biologická
funkce nebyla zatím objasněna.
Aktiviny a inhibiny
v klinickém výzkumu
i praxi
zvýší úspěšnost detekce trisomie 21 ze 69 % na 76 %, při zachování 5 % úrovně
falešně pozitivních záchytů. Použití inhibinu A v integrovaném testu, který představuje stanovení PAPP-A a měření nuchální translucence v prvním trimestru
a stanovení všech čtyř parametrů v druhém trimestru, zvyšuje míru detekce až
na 94 % při stejné úrovni falešně pozitivních záchytů (obr. 1).
Sledování hladin inhibinu A během těhotenství může přispět k predikci a diagnostice i dalších komplikací. Jednou z nich je preeklampsie, která ohrožuje zhruba 5 % těhotenství. Preeklampsie je charakterizována zejména vysokým krevním
tlakem a proteinurií. Často se vyskytují otoky dolních končetin, případně i jiných
částí těla. Pokud by těhotná nebyla léčena, mohla by se poměrně rychle vyvinout
eklampsie – záchvat křečí, který může přejít až do komatu. Jedná se o stav, který
ohrožuje život matky zejména krvácením do vnitřních orgánů a život plodu nedostatkem kyslíku. Těhotenství je v takovém případě předčasně ukončeno císařským řezem. Bylo provedeno několik klinických studií, jejichž výsledky poukazují
na možnosti využití inhibinu A a aktivinu A při predikci preeklampsie. Jejich zvýšené hladiny v pozdějším stadiu těhotenství (30 týdnů) by mohly být využity pro
screening tohoto onemocnění.
Změny v sérových hladinách aktivinu A signalizují některé další potíže provázející těhotenství. Významný nárůst koncentrace aktivinu A byl pozorován 2 dny
před tím, než byl na základě klinických příznaků diagnostikován předčasný porod.
Počet nedonošených novorozenců je stále hodně vysoký, pohybuje mezi 5 až 10 %.
Intenzivní péče, která je těmto dětem věnována, zvyšuje jejich šance na přežití
a normální vývoj. Časná a spolehlivá diagnostika předčasného porodu by však
umožnila zahájit včas terapii směřující k udržení těhotenství po dobu potřebnou
k normálnímu vývoji plodu. Z tohoto důvodu je dále intenzivně studována možnost využití aktivinu A pro tuto diagnostiku.
Vedle nejrůznějších komplikací souvisejících s těhotenstvím se také intenzivně
ověřují možnosti uplatnění inhibinů a aktivinů v problematice neplodnosti. Neplodnost neboli sterilita je vždy posuzována jako problém páru, nikoliv jedince. Je
jí postiženo asi 15 % všech párů. Příčiny jsou z 30 – 35 % pouze na straně muže
a v podobném rozsahu pouze na straně ženy. Problém se vyskytuje současně
u obou partnerů asi ve 25 % případů. Zbývajících několik procent zůstává neobjasněno.
Obr 1: Míra detekce trisomie 21 pro různé typy testů
Výsledky klinických testů prokazují, že inhibin A je
dalším vhodným markerem v prenatálním screeningu trisomie 21. Jeho hladina v mateřském séru je
v případě Downova syndromu průměrně dvakrát
vyšší než u těhotných bez toho problému. Studie
potvrdily, že zařazení inhibinu A jako čtvrtého parametru do prenatálního screeningu ve druhém trimestru k AFP, hCG a nekonjugovanému estriolu
7
Obr 2: Hladina inhibinu B 5. den po stimulaci
(OHSS = ovariální hyperstimulační syndrom)
Obr 3: Hladiny inhibinu A po in vitro fertilizaci (IVF)
Převzato z: Frawzy et al., Human Reprod., 17: 1535 - 1543 (2002)
Převzato z: Lockwood et al., Biol.Reprod., 57: 1490-1494 (1997)
produkován přímo Sertoliho buňkami, marker sperNa tomto poli se prosazuje zejména inhibin B, který je produkován přímo
matogeneze. Jeho sérová hladina nepodléhá u mumalými vyvíjejícími se folikuly. Z tohoto důvodu představuje jeho sérová hladižů cyklickým výkyvům tak, jako je tomu u žen.
na citlivý indikátor aktuálního počtu folikulů, tzv. ovariální rezervy. Fertilita
Nicméně při studiu různých příčin mužské neplodženy je závislá na funkci ovarií, tedy na ovariální rezervě. Počet folikulů s věkem
nosti bylo zjištěno, že koncentrace inhibinu B je
ženy klesá. V době narození se odhaduje až na 2 miliony, kdežto na počátku
v séru těchto mužů významně nižší než je hladina
fertilního období je jejich počet již jen asi 300 000. Při poklesu počtu folikulů
naměřená u zdravých jedinců (obr. 5).
na přibližně 25 000 je další snižování jejich počtu významně urychleno, takže
Pubertální vývoj a jeho monitorování představují
za zhruba 13 let je jejich počet jen asi 1 000, což signalizuje počátek menopaudalší oblast pro uplatnění inhibinů. Správné načazy. Stanovení ovariální rezervy má značný význam v případě, kdy neplodný pár
sování i průběh jednotlivých fází puberty jsou
uvažuje o využití in vitro fertilizace. V případě malé šance na úspěch díky nedůležitými předpoklady pro získání normální reprodostatečnému počtu oocytů lze pacientku ušetřit zbytečné farmakologické
dukční schopnosti. Pro posouzení stavu pubertálzátěže a následného stresu z neúspěšného pokusu. K odhadu ovariální rezervy
ního vývoje u dívek se jako užitečný pomocník naslouží sérová hladina inhibinu B stanovená 3. až 5. den cyklu. Znalost ovariální
bízejí oba inhibiny. U prepubertálních chlapců se
rezervy také umožňuje lépe stanovit míru farmakologické stimulace. Příliš silná
k hodnocení funkce varlat používá hCG stimulační
stimulace zvyšuje riziko vzniku ovariálního hyperstimulačního syndromu
test. Bylo zjištěno, že hladiny inhibinu B korelují
(OHSS). Zvýšená hladina inhibinu B stanovená 5. den po stimulaci pomáhá invelmi dobře s výsledky tohoto stimulačního testu.
dikovat zvýšené riziko vyvinutí tohoto syndromu (obr. 2).
Nabízí se tedy možnost nahradit časově náročný
Odpověď na otázku, zda byl pokus o fertilizaci úspěšný, může pomoci zodpotest, který zatěžuje pacienta opakovaným odběrem
vědět inhibin A. Jeho sérová hladina A je přímo ovlivněna aktivitou fetoplacenkrve, jednoduchým stanovením.
tární jednotky. Bylo zjištěno, že se jeho koncentrace v séru významně zvyšuje
Inhibiny a aktiviny zřejmě naleznou své uplatnějiž 13 dní po přenosu embrya a že je navíc úměrná počtu úspěšně implantovaní i v onkologii. Kombinací CA 125 a koncentrace
ných embryí. Přetrvávající nízká hladina inhibinu A naopak signalizuje neúcelkového inhibinu v séru lze spolehlivě detekovat
spěšný pokus o oplodnění (obr. 3).
až 95 % ovariálních tumorů s 95 % specifitou. Oba
Inhibin B by se mohl uplatnit i v případě diagnostiky předčasné menopausy,
tzv. předčasného ovariálního selhání. Tento
problém postihuje 1 až 3 % žen ve věku do
40 let. Pro syndrom je charakteristická zvýObr 4: Schéma zpětnovazebné regulace produkce FSH inhibinem
šená hladina FSH v séru. V důsledku poklesu
Zdravá mladá žena
Starší žena nebo mladá žena
funkce ovarií klesá i hladina estrogenů a ins předčasným ovariálním selháním
hibinu B, což zpětnovazebně ovlivňuje prohypofýza
dukci FSH (obr. 4). K určení funkčního stavu
hypofýza
ovarií lze s výhodou využít sérovou hladinu
inhibinu B, který je ovarii přímo produkován
a nepodléhá velkým výkyvům mezi cykly.
Předčasné ovariální selhání představuje pro
ženu všechna rizika spojená s poklesem proFSH
inhibin B
dukce estrogenů, ke kterému dochází po
inhibin B
menopause. Uvádí se, že jejich míra je
v těchto případech ale 1.6 až 2krát vyšší.
Spolehlivá diagnostika tak umožní včasné
aplikování substituční terapie, která výrazně
omezuje zdravotní komplikace plynoucí
z tohoto stavu.
ovarium
ovarium
U mužů představuje inhibin B, který je
8
FSH
Obr 5: Hladiny inhibinu B u zdravých mužů
a u mužů s různými příčinami infertility
A
B
C
D
E
Zdraví muži (n = 16)
Kallmanův syndrom (n = 7)
Infertilní muži se zvýšenou hladinou FSH (n = 29)
Klinefelterův syndrom (n = 9)
Bilaterální orchidektomie (n = 10)
Převzato z: Analwalt et al., JCEM, 81: 3341 - 3345 (1996)
markery se navzájem dobře doplňují díky své odlišné specifitě. Celkový inhibin vykazuje vysokou specifitu pro tumory granulózních buněk ovaria a pro
mucinózní ovariální karcinomy. CA 125 je charakteristický spíše pro ostatní typy ovariálních karcinomů. Další možnost využití stanovení celkového
inhibinu se nabízí při dlouhodobém sledování pacientek po operaci.
Imunochemie
– stanovení
BNP
Reagencie umožňující stanovení natriuretického peptidu typu B – BNP na
imunochemických analyzátorech Beckman Coulter: Access, Access 2 a UniCel DxI 800 byly uvedeny na trh v roce 2005. Jsou vyráběny na základě
spolupráce s firmou Biosite a dodávány její distribuční sítí.
Triage ® BNP je produkt kompletující nabídku panelu srdečních markerů do následující podoby:
Accu TnI (Troponin I, cTnI)
CK-MB
Myoglobin
Digoxin
Triage ® BNP
Ve vývoji jsou dále soupravy pro stanovení D-dimeru a Anti-β2GP1 (autoprotilátky proti β2-glykoproteinu 1).
PETR MATĚJKA
Možnosti využití aktivinů a inhibinů v klinické praxi jsou nepochybně velmi
široké. Některé z možných aplikací jsou již využívány v praxi, jako např. stanovení inhibinu A v druhém trimestru těhotenství pro detekci trisomie 21. Jiné si
cestu k rutinnímu použití teprve hledají a množství dalších klinických aplikací je
v současné době ověřováno v rámci klinických studií.
Výběr z literatury
Anawalt BD et al. J Clin Endocrinol Metab. 1996 Sep;81(9):3341-5. Fawzy M et al.
Hum Reprod. 2002 Jun;17(6):1535-43. Florio P et al. Ultrasound Obstet Gynecol.
2003 Feb;21(2):165-9. Kwee J et al. Hum Reprod. 2004 Mar;19(3):590-5. Epub
2004 Feb 12. Lockwood GM et al. Biol Reprod. 1997 Dec;57(6):1490-4. Lockwood
GM. Hum Fertil (Camb). 2000;3(2):86-92. McCullagh R. Science 1932;76:19-20.
Robertson DM et al. Clin Chem. 1999 May;45(5):651-8. Thakur AN et al.J Exp Biol.
1981 Apr;19(4):307-13. Wald NJ et al. Semin Perinatol. 2005 Aug;29(4):225-35.
Welt CK et al. J Clin Endocrinol Metab. 2005 Feb;90(2):826-30.
Současná nabídka je uvedena v následujícím přehledu
Kód
Produkt
DSL-10-28100-1
Inhibin A, ELISA
DSL-10-28100-4
Inhibin A, ELISA (4 plates)
DSL-10-84100
Inhibin B, ELISA
DSL-10-56100
Total Inhibin ELISA
DSL-10-85100
Free Activin A ELISA
DSL-10-86100
Free Activin B ELISA
DSL-10-86200
Free Activin AB ELISA
DSL-10-87100
Follistatin 315
HELENA KURZWEILOVA
BIOSITE Triage BNP
na Beckman Coulter
UniCel DxI 800
Teorie a použití
Natriuretický peptid typu B patří mezi hormony regulující krevní tlak. Jeho zvýšená tvorba provází městnavé srdeční selhání (srdce nedodává dostatečné
množství krve), hypertrofii stěny levé komory srdeční, systolickou a/nebo diastolickou dysfunkci LK, ischemickou chorobu srdeční (zejména její akutní formy), přetížení krevního oběhu aj.
BNP je produkován převážně mozkovými buňkami a buňkami srdečních komor. Z pre-proBNP se v kardiomyocytu uvolní proBNP a signální peptid. Molekula proBNP se na úrovni sarkolemmy kardiomyocytu štěpí na biologicky aktivní hormon BNP a inaktivní N-terminální fragment NT-proBNP. Hladina BNP
v krvi je relativně stálá, protože jeho vyplavování z kardiomyocytů probíhá
kontinuálně. Biologický poločas BNP je asi 22 minut, NT-proBNP má poločas 60
– 120 minut.
Vyšetřování BNP se používá v následujících indikačních
oblastech:
1) Diagnostika srdeční dysfunkce – uplatňuje se negativní prediktivní hodnota (89 – 99 %) stanovení. Nezvýšené hodnoty BNP v krvi prakticky vylu-
9
čují kardiální etiologii příznaků obvyklých při srdeční
dysfunkci a dovolují upustit od dalších vyšetření
(echokardiografie). Zvýšené
hodnoty BNP však nemají
význam v diferenciální diagnostice, jsou pouze dokladem existující srdeční dysfunkce.
2) Stratifikace onemocnění
– stanovení BNP je účinnějším indikátorem závažnosti srdeční dysfunkce,
než jsou funkční klasifikace
NYHA a standardně používané kritérium LVEF.
3) Stanovení prognózy –
BNP je účinným indikátorem prognózy kardiovaskulární morbidity a mortality, protože vzestup jeho koncentrace odráží nejen systolickou, ale – i když
ne vždy a spolehlivě – i diastolickou srdeční dysfunkci. Jako prognosticky
významná se udává hladina BNP stanovená 3. den po AMI – negativní výsledek svědčí o dobré prognóze onemocnění.
4) Sledování účinnosti léčby – pokles hodnot BNP indikuje účinnost léčby
dokonaleji než dosud běžně používaná kritéria.
krevní obraz (Sarstedt Monovette EDTA K)
Souprava
Hodnocení soupravy Biosite
BNP je provedeno s ohledem
na doporučení v článku B. Friedeckého, J. Kratochvíly: Biomarkery v diagnostice srdečních chorob, FONS 4/2005.
Činidla
BIOSITE Triage BNP pro Beckman Coulter Immunoassay
System, 2 x 50 testů. Souprava obsahuje paramagnetické
částice s navázanou myší polyklonální protilátkou proti
lidskému BNP, konjugát myší monoklonální protilátky proti lidskému BNP a alkalické fosfatázy.
K blokování heterofilních protilátek je použit purifikovaný myší a kozí IgG v pufrovaném fyziologickém roztoku. Po prvním použití je sada činidel (tj.
50 testů) stabilní 28 dní.
Pohled uživatele: Skutečná stabilita činidel je
podle našich zkušeností dvojnásobná.
BNP stanovujeme na imunochemickém analyzátoru Beckman Coulter UniCel
DxI 800 od dubna 2005. Zde jsou naše zkušenosti z ročního provozu.
Kalibrátor, kalibrace
Analyzátor
Beckman Coulter UniCel DxI
800, maximální výkon 400 testů za hodinu. Použivá chemiluminiscenční technologii a stejná
činidla jako systémy Beckman
Coulter Access a Access 2.
Díky přípravě vlastních alikvotů jsou primární zkumavky velice rychle uvolňovány k dalším analýzám.
Vlastní stanovení BNP trvá
16 minut.
Pohled uživatele: Samostatně vložený vzorek je
k dispozici do 1 minuty,
obecně nepřesahuje doba
uvolnění 5 minut. Díky stejným stojánkům mohou být
vzorky ihned vloženy do biochemického analyzátoru Beckman Coulter Synchron LX20, takže analýzy probíhají paralelně. Na UniCel DxI 800 oceňujeme
kromě rychlosti jednoduchou obsluhu a minimální údržbu. Zásoby jsou doplňovány za provozu bez nutnosti čekání na stav „Ready“, prázdné sady činidel
jsou automaticky odhazovány do odpadu, kapalný odpad máme napojen přímo do kanalizace (nemocnice má vlastní čistírnu odpadních vod).
Vzorky
Lze použít pouze vzorky nesrážlivé krve s EDTA jako antikoagulantem. Do 2
hodin od odběru je nutno plazmu oddělit a uložit do lednice. Nebude-li analýza provedena do 4 hodin po odběru, vzorek zmrazit na – 20 °C.
Pohled uživatele: Analýzu provádíme přímo z primárních 2,7ml zkumavek na
10
BIOSITE Triage BNP Calibrators, 6 lahviček (hladin).
Jde o rekombinantní lidský BNP komplex v BSA
matrici s návazností na pracovní kalibrátor výrobce. Skladování při – 20 °C do data exspirace, po
otevření stabilní 1 měsíc při 2 – 10 °C. Kalibrace
(v dubletu) je vyžadována každých 28 dní.
Pohled uživatele: Stabilita kalibrace je podle našich zkušeností 3 měsíce.
Kontrolní materiál
BIOSITE Triage BNP Controls, 3 hladiny (3 x 2 x
2,5 ml). Skladování při – 20 °C do data exspirace, po
otevření stabilní 1 měsíc při 2 – 10 °C.
Pohled uživatele: Kontroly jsou v praxi stabilní 2
měsíce po otevření. Uchováváme je v lednici v uzavřených plastových zkumavkách, ve kterých je
vkládáme do analyzátoru a ihned po uvolnění je
opět vracíme do lednice. Zjednodušuje se tím obsluha a eliminuje se mrtvý objem.
Analytické parametry
Zkřížené reakce - Souprava nevykazuje zkřížené
reakce s ANP, CNP, prepro ANP, prepro BNP, angiotenzinem, reninem, urodilatinem.
Interference - Se stanovením neinterferuje hemoglobin do 5 g/l, triacylglyceroly do 35 mmol/l
a bilirubin do 350 µmol/l.
Rozsah měření - 0,29 – 1145 pmol/l (1 – 5000
ng/l)
Referenční meze ≤ 29 pmol/l (100 ng/l)
Klinické zkušenosti
Opakovatelnost, reprodukovatelnost
Údaje výrobce
hladina
CV (%)
pmol/l
ng/l
v sérii mezi sériemi celková
7,08
24,5
2,7
5,3
5,9
11,8
40,8
3,1
4,5
5,4
22,3
77,2
2,6
3,2
4,1
388
1343
1,0
6,6
6,7
1146
3966
1,1
1,8
2,1
Naše dlouhodobá laboratorní přesnost
z VKK, nejsou splněny podmínky
reprodukovatelnosti:
1. soubor (n = 28, za období 5 měsíců)
hladina
CV (%)
pmol/l
ng/l
25,4
87,9
5,1
118
408
6,1
625
2163
5,3
2. soubor (n = 16, za období 3 měsíců)
hladina
CV (%)
pmol/l
ng/l
26,3
91,0
5,1
121
419
4,1
623
2156
4,7
3. soubor (n = 13, za období 2,5 měsíce)
hladina
CV (%)
pmol/l
ng/l
23,4
81
4,4
112
388
4,0
566
1958
3,4
Naše měření potvrzují reprodukovatelnost uváděnou výrobcem. Dlouhodobá přesnost (CV) v oblasti
referenčního intervalu se pohybuje kolem 5 %, což
více než dostatečně splňuje požadavek ≤ 19 % uváděný ve výše zmíněném FONSu 4/2005.
MUDr. Zdeněk Monhart, JIP – interní oddělení Nemocnice Znojmo
Kasuistika č. 1
85letá pacientka byla přijata pro levostranné srdeční selhávání NYHA IV na podkladě ICHS, oběhová kompenzace zhoršena fibrilací síní s rychlou odpovědí komor.
RTG plic prokazuje městnání v malém oběhu, echokardiograficky těžká dysfunkce
LK ( ejekční frakce 21% ), BNP 1. den více než 1334 pmol/l. Po diuretické léčbě
srdečního selhávání a zpomalení srdeční frekvence dosaženo zlepšení oběhové
kompenzace, pacientka ve funkční třídě NYHA II, rehabilituje do chůze po oddělení. BNP 6. den 29 pmol/l. Pacientka 11. den propuštěna do domácí péče.
Závěr: v tomto případě je patrna velmi dobrá korelace klesajících hodnot BNP
s dosažením oběhové kompenzace pacientky s akutním srdečním selháním na
podkladě ICHS.
Kasuistika č. 2
78letý pacient přijat pro zhoršení levostranného srdečního selhávání na podkladě
ICHS, dlouhodobě ve funkční třídě NYHA III. Echokardiograficky prokázána středně
těžká dysfunkce LK ( ejekční frakce 36% ). BNP 1. den 611 pmol/l. Po maximalizaci
léčby srdečního selhávání jen mírné zlepšení stavu – pacient nadále ve funkční třídě
NYHA II-III, 12. den propuštěn domů. BNP 6. den 229, 12. den 459 pmol/l.
Závěr: přetrvávající zvýšené hodnoty BNP vykazují korelaci s klinickým stavem
pacienta s chronickým srdečním selháváním na podkladě ICHS.
Kasuistika č. 3
68letý pacient přijat pro nově zjištěné levostranné srdeční selhávání s týdenní
anamnesou, při přijetí ve funkční třídě NYHA III, echokardiograficky prokázána
těžká deprese systolické funkce LK ( ejekční frakce 25% ). BNP 1. den 116 pmol/
l. Po zahájení diuretické terapie zlepšení oběhové kompenzace, pacient 15. den
přeložen ke koronarografickému vyšetření, na podkladě kterého byl nález uzavřen
jako dilatační kardiomyopatie. Před překladem pacient ve třídě NYHA I-II. BNP 13.
den 28 pmol/l.
Závěr: v tomto případě pokles zvýšených hladin BNP koreluje se zlepšením oběhové kompenzace u pacienta se srdečním selháváním neischemické etiologie.
MUDr. Pavel Knopp, kardiologická poradna
Kazuistika č. 4
75letý pacient prodělal v roce 2001 IM a plicní embolii, je dlouhodobě antikoagulován pro fibrilaci síní, 10 roků se léčí pro diabetes 2. typu, v posledních pěti letech
hypertenze a hyperlipidemie. Vzhledem k dušnosti proveden před 2 měsíci perfúzní plicní san s negativním nálezem.
Medikace: Tenormin, Isopelet, Tritace, Warfarin, Diaprel, Medostatin, Kornam
V posledních týdnech si stěžuje na zhoršené dýchání, závratě, zvýšenou únavnost.
Laboratoř (výběr): P-Glukóza 7,6, S-AST 0,20, S-ALT 0,32, S-CK 2,66, S-CRP 5,2,
P-BNP 85,4 pmol/l.
TRN konsilium: dušnost kardiální etiologie, z plicního hlediska bez doporučení.
Závěr: dušnost přisouzena kardiální subkompenzaci. U nemocného změněn lék
Tenormin na Dilatrend. Po měsíčním užívání zmírnění subjektivních potíží, kontrolní echo vyšetření prokazuje dobrou systolickou funkci levé srdeční komory. Pro
zlepšení celkové stavu se pacient mohl nadále léčit u svého praktického lékaře.
MUDr. Roman Hrdina, plicní oddělení Nemocnice Znojmo
Kazuistika č. 5
Žena, 66 let, hospitalizovaná na TRN odd. Anamnesa: řadu let sledována pro
CHOPN, cor. pulm. chron., v posledních letech vývoj respirační insuficience (až
GRI) s dlouhodobou domácí oxygenoterapií.
Obj.: dušnost, otoky DKK, auskultačně bronchitické fen. i oj. chrůpky.
11
Rtg s+p: bez zn. infiltrace plicní, masivní dilatace srdce oběma směry.
Echokardiograf. vyš.:v r. 2001 EFLK 28% , vs.klidová plic. hypertenze.
FVP: převaha obstruktivní ventilační poruchy těžkého stupně - FEV1 33% nál.
hodnoty
ABR(art.): pCO2 5,98kPa, pO2 5,04 kPa, CRP: 7,8 (během hospit. 20,8) BNP: vstupní (4.4.) 93,2, kontr. (11.4.) 72,6 pmol/l.
Závěr: klinický stav, zobrazovací vyšetření a FVP svědčí pro kombinovanou etiologii dušnosti (CHOPN s vývojem cor. pulmonale chron., CHICHS), BNP koreluje
s kardiální složkou.
Kazuistika č. 6
Žena, 46 let, hospitalizovaná na TRN odd. v dubnu. Anamnesa negativní, dosud
zdráva, poslední asi měsíc vývoj námahové dušnosti, poslední dny i noční dušnost
char. ortopnoe, tlak na hrudi, otékání rukou i nohou.
Kašel 0, teploty 0.
Obj.:dušnost i klidová, při řeči, auskultačně dých. alv.
s polopřízvuč. chrůpky oboustranně bazálně, otoky
DKK, nově zjištěná hypertenze.
CT vyš.: difusnější bronchopneumonie vlevo, malý
fluidothorax vpravo, obraz kardiopatie, susp. drobný
fluidoperikard.
Echokardiofraf. vyš.: nehomogenní porucha stažlivosti myokardu, EFLK 35%
CRP: 89, BNP: vstupní (19.4.) 348 pmol/l
Závěr: v popředí jednoznačně srdeční selhávání (infiltrace plicní zřejmě sekundární při městnání v malém oběhu), pacientka přeložena na interní JIP, kde
zjištěna i pozitivita TnI.
Závěr
Souprava BIOSITE Triage BNP ve spojení s Beckman
Coulter Immunoassay System UniCel DxI 800 plně
vyhovuje analytickým i klinickým požadavkům na
toto vyšetření.
RNDR. ZDENĚK VEŠKRNA
OKB, NEMOCNICE ZNOJMO
Soupravy PSA
free IRMA a PSA
total IRMA
nakalibrovány na mezinárodní standard
souladu s ustanovením Directive 98/79/EC jsou nyní soupravy na stanovení celkového a volného PSA nakalibrovány
na mezinárodní standard - souprava PSA free IRMA na standard 1st IS NIBSC 96/668 a souprava PSA Total IRMA na 1st IS
NIBSC 96/670. V této souvislosti byla též provedena klinická studie,
která měla prokázat schopnost souprav Immunotech rozlišit mezi
karcinomem prostaty a benigními stavy na základě poměru koncentrací volného a celkového PSA.
Tato retrospektivní studie byla provedena na vzorku 174 pacientů, u nichž
se hodnota celkového PSA pohybovala v rozmezí 4-10 ng/mL, přičemž u 54
jedinců z daného souboru byl potvrzen karcinom prostaty.
Průběh ROC křivky, jakož i plocha pod křivkou (0,821) svědčí o dobré schopnosti stanovení rozlišovat mezi karcinomem prostaty a benigními stavy na
základě hodnoty poměru koncentrací celkového a volného PSA.
Následující tabulka poskytuje informaci o hodnotách cut off, pozitivních prediktivních hodnotách a negativních prediktivních hodnotách při
90 % a 95 % klinické senzitivitě, resp. 90 % a 95 %
specificitě.
Cut off Free/total PSA
Specificita
Sensitivita
ppv
npv
13,1 %
95 %
49 %
80 %
82 %
16,3 %
90 %
63 %
72 %
86 %
23,0 %
38 %
90 %
37 %
90 %
25,9 %
26 %
95 %
35 %
94 %
12
Cut off - diskriminační hladina mezi pozitivními
a negativními hodnotami
Sensitivita - udává procento správně pozitivních
výsledků ze souboru jedinců s karcinomem.
Specificita - udává procento správně negativních
výsledků ze souboru jedinců bez karcinomu.
ppv (pozitivní prediktivní hodnota) - udává
v procentech s jakou pravděpodobností bude mít
pacient hledanou chorobu, když bude výsledek testu pozitivní
npv (negativní prediktivní hodnota) - udává
v procentech s jakou pravděpodobností nebude mít
pacient hledanou chorobu, když bude výsledek testu negativní
Příklad:
Pro cut off hodnotu poměru free/total PSA 16,3 %,
což odpovídá druhé řádce tabulky, dostáváme následující informace:
- 90 % specificita znamená, že 10 % pacientů nemajících karcinom prostaty má hodnotu Free/total PSA pod hladinou cut off, 90 % je nad cut off.
Pokud bychom použili toto cut off, ušetřili bychom pacienty bez karcinomu prostaty zbytečné
biopsie v 90 % případů.
- 63 % sensitivita - 63 % jedinců s karcinomem
prostaty má hodnotu Free/total PSA pod hladinou
cut off, 37 % nad touto hladinou. Pokud bychom
použili toto cut off, jsme schopni identifikovat
63 % pacientů s karcinomem a 37 % případů by
zůstalo nediagnostikováno.
- 72 % pozitivní prediktivní hodnota - pokud je
výsledek pod hladinou cut off, pravděpodobnost
že pacient má karcinom prostaty je 72 %.
- 86 % negativní prediktivní hodnota - pokud
je výsledek nad hladinou cut off, pravděpodobnost že pacient nemá karcinom prostaty je 86 %.
V tabulce jsou uvedeny různé hodnoty cut off pro
různé hladiny specificity a senzitivity. Ale která
hodnota je vlastně ta pravá? Na tuto otázku není
jednoznačná odpověď.
Nadále probíhá diskuze o tom, v jakých případech je lékařská intervence nezbytná, a kdy je lepší
nezasahovat. Uvádí se až 4 % prevalence karcinomu prostaty v populaci mužů nad 50 let, nicméně
většina nakonec umírá ze zcela jiných příčin. Jakákoliv klinická intervence, počínaje biopsií prostaty,
může představovat pro pacienta potenciální riziko,
zejména ve starším věku. Při každém klinickém rozhodování je tedy zapotřebí pečlivě vážit mezi potenciálním přínosem a rizikem pro pacienta, a zvolit řešení optimální nejen z hlediska délky přežití,
ale též kvality života. Lékař je tak postaven před dvě
dilemata:
1. Při stanovení diagnózy - zda provést nebo neprovést biopsii prostaty.
2. Při pozitivním nálezu - zda provést chirurgický
zákrok nebo ne.
Při každém klinickém rozhodování
je tedy zapotřebí pečlivě vážit mezi
potenciálním přínosem a rizikem pro
pacienta, a zvolit řešení optimální
nejen z hlediska délky přežití, ale
též kvality života.
Stanovení poměru free/total PSA může pomoci rozhodnout první dilema, přičemž v principu lze zvolit jeden ze dvou níže uvedených mezních přístupů, případně i jejich kombinaci.
1. přístup - minimalizace rizika falešně negativního výsledku
Tento přístup umožňuje vyhledat jedince, u kterých je reálná potřeba biopsie velmi
nízká, protože je u nich velmi malá pravděpodobnost karcinomu prostaty. Cílem je
zde zejména minimalizovat možnost falešně negativního výsledku. Proto se hodnota cut off nastavuje na hladině 90 %, případně 95 % senzitivity.
Pokud tento přístup aplikujeme na výsledky získané naší studií, mohli bychom se
při použití cut off 23 % vyvarovat zbytečné biopsie u 38 % jedinců nemajících
karcinom. Protože tato část je zpravidla ve skupině pacientů s hodnotou celkového PSA mezi 4-10 ng/mL početně výrazně více zastoupena, umožňuje nám již
i tento přístup redukci počtu zbytečných biopsií u významného množství případů.
Riziko falešně negativního výsledku zůstává přitom stále poměrně malé, u pacientů s hodnotami nad cut off je pravděpodobnost karcinomu pouze 10 %.
Možné schéma postupu pro vyloučení zbytečných biopsií
2. přístup - minimalizace počtu zbytečných biopsií
Tento přístup umožňuje vyhledat jedince, u kterých je pravděpodobnost karcinomu již natolik vysoká, že je zřejmá potřeba biopsie. Cílem je zde zejména minimalizovat počty zbytečných biopsií. Proto se hodnota cut off nastavuje na hladině
90 % případně 95 % specificity. Při tomto přístupu karcinom u jistého nezanedbatelného procenta pacientů zůstává nediagnostikován..
Pokud tento přístup aplikujeme na výsledky získané naší studií, jsme schopni při
použití cut off 16,3 % odhalit karcinom u 63 % z celkového počtu jedinců s karcinomem. Zbytečné biopsie by pak byly provedeny pouze u 10 % ze všech jedinců
bez karcinomu. Tento přístup tak umožňuje provádět biopsii jen v opravdu opod-
13
statněných případech. U pacientů s hodnotou poměru free/total PSA pod cut off je pravděpodobnost
karcinomu již poměrně velká - 72 %. Na druhé straně
ovšem značné množství karcinomů - 37 % - zůstává
nediagnostikováno.
Samozřejmě lze použít i jiný přístup, než jsou
dva výše zmíněné, a svým způsobem, mezní možnosti. Nabízí se například použití šedé zóny s hranicemi odpovídajícími uvedeným hodnotám.
V každém případě by výstup z laboratoře měl být
ve schodě s požadavky příslušného klinického
pracoviště, neboť to rozhoduje o provedení či neprovedení biopsie. Při tom je nutné zohledňovat
další faktory, jako je například věk nebo celková
kondice pacienta.
PATRIK ŠAF
Boli sme pri tom
Dňa 21. apríla 2006 prvé súkromné laboratórium
na Slovensku ADL s.r.o. so sídlom v Prešove si pripomínalo 10. výročie svojho vzniku. Z príležitosti tohto
významného výročia sa v Prešove v Divadle Jonáša
Záborského konala slávnostná vedecká konferencia
na tému Imunológia: od teórie k praxi.
V odbornej časti konferencie vystúpili so svojimi
prednáškami poprední slovenskí imunológovia
a odborníci v laboratórnej praxi Prof. Ing. Miroslav
Ferenčík, DrSc., Prof. MUDr. Viera Štvrtinová, CSc.,
Prof. MUDr. Jozef Rovenský, DrSc.,
Ing. Ján Balla. Riaditeľka a majiteľka
ADL s.r.o. RNDr. Anikó Kužmová oboznámila prítomných s históriou a súčasnosťou laboratória.
Po odborných prednáškach bol urobený krst monografie Imunológia a alergológia v základných heslách a termínoch od autorov M. Ferenčík, J. Rovenský
a Erika Jensen-Jarolím. V kultúrnej časti
slávnostnej konferencie zazneli operetné melódie v podaní bratislavských
umelcov. Po skončení kultúrnej časti sa
v priestoroch Divadla Jonáša Záborského uskutočnila
slávnostná recepcia pre zúčastnených.
A čo dodať na záver ?
Prajeme Analyticko diagnostickému laboratóriu
s.r.o., ktorého oddelenie imunológie získalo osvedčenie o akreditácií ako prvé na Slovensku, ďalšie
úspechy v práci.
MÁRIA GAVELOVÁ
E- MAIL: [email protected]
14
Prezentácia firmy
na podujatí
Prenatálna
diagnostika
Dňa 30. marca 2006 sa v Žiline uskutočnil pracovný
deň na tému Prenatálna diagnostika, ktorý organizovala Slovenská spoločnosť lekárskej genetiky SLS,
Nemocnica s poliklinikou Žilina, Ženská klinika
Martinskej fakultnej nemocnice, Gynekologicko-pôrodnicke oddelenie NsP Žilina a Oddelenie lekárskej genetiky NsP Žilina. Usporiadateľom akcie
bol MUDr.František Cisárik, CSc. z NsP Žilina.
Cieľom pracovného dňa bolo vymeniť si skúsenosti a znalosti v oblasti skríningu I.trimestra, predimplantačnej genetickej diagnostike a skríningu
II.trimestra.
V prednáškach slovenských a českých autorov
(16 prednášateľov) sa analyzovali najaktuálnejšie
otázky prenatálnej diagnostiky :
vyšetrenia biochemické a sonografické v I. trimestri
možnosti získania medzinárodného certifikátu
vyšetrenia nuchalnej translucencie a nosovej
kosti
možnosti skríningu I. trimestra na Slovensku
výber skríningových stratégií z pohľadu kvality
a efektivity
prenatálny skríning a prenatálna diagnostika
v II. trimestri
predimplantačná genetická diagnostika
prvé výsledky a postupy v súvislosti s rozvojom
asistovanej reprodukcie
IV. Martinské dni imunológie, ktoré sa konali: 29. marca – 1. apríla 2006 v Kine
Strojár, Vajanského námestie 2 v Martine.
Organizátormi podujatia boli nasledovné spoločnosti: Slovenská lekárska spoločnosť, Slovenská spoločnosť pre alergológiu a klinickú imunológiu, Slovenská imunologická spoločnosť, Martinská fakultná nemocnica, Martin, Jesseniova LF UK,
Martin, Spolok lekárov v Martine, Martinské centrum imunológie s.r.o., Martin.
Hlavné témy, ktorým bolo venované podujatie: Imunodeficity, Autoimunitné
ochorenia, Alergia a astma, Imunológia vo vzťahu k iným medicínskym odborom
– neuroimunológia, Aktuálne problémy v odbore.
Podujatie bolo organizované za predsedníctva:
Doc. MUDr. Peter Pružinec, CSc.
hlavný odborník MZ SR pre KIA
Doc. MUDr. Vladimír Pohanka, PhD.
predseda SSAKI
Prof. Ing. Miroslav Ferenčík, DrSc.
predseda SIS
Doc. MUDr. Mojmír Vrlík, CSc.
riaditeľ MFN
Prof. MUDr. Ján Danko, CSc.
dekan LF UK
Prof. MUDr. Július Mazuch, DrSc.
Predseda Spolku lekárov Martine
IMMUNUTECH a Beckman Coulter Company, sa aktívne zúčastnil podujatia ako
hlavný sponzor. Prezentovali sme svoje výrobky a výrobky spoločnosti The Binding
Site na stánku lokalizovanom v susedstve významných farmaceutických firiem
a pripravil sympózium pod názvom: „VYBRANÉ LABORATÓRNE METÓDY IMUNOLÓGII“ na ktorom odzneli prednášky:
1. Říčařová, B.: Nové možnosti laboratórneho stanovenia voľných ľahkých
reťazcov – princíp a použitie metódy Freelite.
2. Kružík, P.: Meranie aktivácie bazofilov.
Aj napriek tomu, že podujatie bolo adresované v hlavnej miere odborníkom z lekárskej praxe, obe prednášky sa stretli s patričným ohlasom, čomu nasvedčovala
diskusia po ich skončení. Diskusie o významne využitia nami dodávaných výrobkov potom pokračovali aj v ďalších dňoch podujatia v priestoroch stánku našej
firmy. Najväčší ohlas spôsobila prezentácia metódy Freelite pre rýchle a presné
imunodinostické stanovenia voľných ľahkých reťazcov kappa a lambda v sére pacientov.
TICHOMÍR TORDA
Omluva redakce:
Čim prispeje my k zisťovaniu vrodených
vývojových vád?
Naša spoločnosť Beckman Coulter a Immunotech
ponúka imunodiagnostické súpravy pre screening
vrodených vývojových vád v prvom trimestri na
stanovenie PAPP-A, free beta-hCG a v druhom
trimestri súpravy na stanovenie AFP, hCG a free
Estriol .
V předchozím čísle časopisu došlo u článku Princip
a využití metody Freelite TM
k tiskové chybě tabulky
Navrhovaný laboratorní
protokol pro vyšetřování při
podezření na mnohočetný
myelom (str. 6, obrázek 6).
Všem, kteří obdrželi neopravené verze časopisu se
tímto velice omlouváme
a uvádíme opravu.
MÁRIA GAVELOVÁ
VAŠE REDAKCE
Konferencia bola ohodnotená 5 kreditmi CME.
E- MAIL: [email protected]
15
Kde se můžeme setkat
(červen - září 2006)
Konference/seminář s účastí společnosti Immunotech formou stánku
31. 5. – 2.6. 2006
12. – 13. 6. 2006
Cechtuma 2006 (kongres)
Praha
Seminář Moravskoslezského kraje
Žermanice
31. 5. – 3. 6. 2006
12. – 16. 9. 2006
XX. Olomoucké hematologické dny
Olomouc
XX. Biochemický zjazd
Piešťany
7. – 9. 6. 2006
17. – 19. 9. 2006
XXIV. Setkání biochemiků Královéhradeckého,
Pardubického a Jihočeského regionu
Písek
FONS 2006 (konference)
Pardubice
MARKÉTA KRUPAŘOVÁ,

Časopis - Beckman Coulter

Transkript

Podobné dokumenty

Informační leták - Beckman Coulter

Časopis - Beckman Coulter