part 2 - QCNet

Bio-Rad Laboratories Therapeutic Drug Monitoring
Therapeutic Drug
Monitoring
SSRIs by HPLC
Dny kontroly kvality a
speciálních metod HPLC Bio-Rad
Lednice
8.-9. Listopadu 2012
Dr. Reiner Krey
Bio-Rad Laboratories
Mnichov, Německo
Therapeutic Drug Monitoring by HPLC
Kvantitativní stanovení
•
Neuroleptics (Neuroleptika)
•
RAPsyD = Rapid Analysis of Psychoactive
Drugs (Rychlá analýza psychoaktivních drog)
•
Antiepileptics (Antiepileptika)
•
Benzodiazepines/Tricyclic Antidepressants
(Benzodiazepiny / Tricyklická antidepresiva)
•
Dr. Reiner Krey
Bio-Rad Laboratories GmbH, Munich
Selective Serotonin Uptake Inhibitors
(SSRIs=Selektivní inhibitory zpětného vychytávání
serotoninu)
Online sample preparation for TDM
Příprava vzorku pro HPLC analýzu
• Pacientské vzorky:
moč nebo vzorky séra s velkým množstvím
různých látek
• Příprava vzorku:
separace látek patřících do stejné skupiny
• Proces přípravy vzorku:
preparační kolonka, degradace, derivatizace
• HPLC analýza:
vysoce selektivní separace látek
Proč používat on-line přípravu vzorku?
• snadnější manipulace
• krátká doba mezi přijetím vzorku a odesláním výsledkem
• snížení rizika záměny pacientských vzorků, méně manuálních kroků
• nižší spotřeba reagencií
Dr. Reiner Krey
Bio-Rad Laboratories GmbH, Munich
Princip online přípravy vzorku
MF 1
MF 2
Sérum + Int. Std.
Extrakční kolona:
Extr. Column
odpad
Analytická kolona:
Anal. kolona
- C8 materiál
- „velké“ částice pryskyřice:
přibližně 20 µm
- vazba analytů
- uvolnění analytů z vazebných
proteinů
- odmytí ostatních látek
- definované podmínky pro
analytickou kolonu
Zpětný proplach extrakční kolony
X
Dr. Reiner Krey
Bio-Rad Laboratories GmbH, Munich
detektor
- C18 materiál
- velikost částic pryskyřice:
3-5 µm
- separace analytů - léků
HPLC – požadavky na systém
Požadavky na systém (otevřený HPLC):
• 2 HPLC pumpy
• 6-ti cestný spínací ventil
•
Extrakční kolona a prefilter
jsou dostatečné k
uskutečnění 100 analýz
Příprava vzorku
Dr. Reiner Krey
Bio-Rad Laboratories GmbH, Munich
Analýza vzorku
HPLC – požadavky na systém
HPLC přístrojové požadavky pro Online Metodu:
• Dvě HPLC pumpy:
Binární nebo kvartérní pumpa bývá nedostačující => je tedy nutné použít
dvě nezávislé pumpy
Moderní pumpy s automatickou regulací toku snižují spotřebu reagencií
• Spínací ventil
Systém musí umožňovat časovou regulaci injekčního a druhého
přepínacího ventilu
• Autosampler
Autosampler s pipetovací funkcí pro přidání interního standardu sníží
manuální práci obsluhy
Dr. Reiner Krey
Bio-Rad Laboratories GmbH, Munich
Analytické kroky
Krok 1:
Odstředíme 600 µl vzorku (sérum/plasma), kalibrátoru,
kontrol
Krok 2:
500 µl supernatantu přeneseme do zkumavek v
autosampleru
Krok 3:
Přidáme Vnitřní Standard a zamícháme
Pro autosampler bez pipetovací funkce
Krok 4:
Umístíme zkumavky se vzorky do autosampleru
Krok 5:
Spustíme analýzu
Dr. Reiner Krey
Bio-Rad Laboratories GmbH, Munich
SSRIs pomocí HPLC
Selective Serotonin Reuptake Inhibitors
(Selektivní inhibitory zpětného vychytávání serotoninu)
SSRIs
HPLC
s přípravou vzorků on-line
Dr. Reiner Krey
Bio-Rad Laboratories GmbH, Munich
Klinické souvislosti
Selektivní inhibitory zpětného vychytávání Serotoninu (SSRI)
• Léky s antidepresivní účinky
• Blokují transportní protein pro Serotonin na synaptické štěrbině
=> Blokují zpětné vychytávání Serotoninu (neurotransmitéru) do buněk
=> Zvyšují koncentraci Serotoninu na synaptických štěrbinách v
centrálním nerovovém systému
• Velmi selektivní pro transportní protein Serotoninu
=> nízké nežádoucí účinky (např. na rozdíl od tricyklických antidepresiv)
• SSRIs jsou v současné době standardním antidepresivem
• Terapeutické monitorování léčby
=> oddálený efekt po začátku terapie: TDM pro sledování spolupráce
=> snižování nákladů použitím minimální efektivní dávky
Dr. Reiner Krey
Bio-Rad Laboratories GmbH, Munich
Návrh soupravy
Nový kit vytvořený pro TDM
SSRIs pro HPLC
Specifické:
Kalibrátory
Kontroly
Vnitřní standard
Analytická kolona
Mobilní fáze
Extrakční kolona
Benzo/TCA pro HPLC
Specifické:
Kalibrátory
Kontroly
Vnitřní standard
Dr. Reiner Krey
Bio-Rad Laboratories GmbH, Munich
RAPsyD pro HPLC
Specifické:
Kalibrátory
Kontroly
Vnitřní standard
Návrh soupravy pro TDM
Nový kit vytvořený pro TDM
•
TDM pro HPLC Základní souprava
- TDM Mobilní fáze 1
- TDM Mobilní fáze 2
- TDM Extrakční souprava 1 (Extrakční kolona 1)
•
TDM Analytická kolona
• Benzo/TCA Kalibrátor -Set A, B, C, D
• RAPsyD Kalibrátor -Set A, C
• SSRIs Kalibrátor -Set A, B, C, D, E, F
• TDM Vnitřní Standard (IS 1, 2, 3, 4, 5)
• TDM Mobilní fáze 3 (používá se jako MF 1 pro SSRI Kal A)
• TDM Extrakční souprava 2 (Extrakční kolona 2 pro SSRI Kal D, F)
Dr. Reiner Krey
Bio-Rad Laboratories GmbH, Munich
SSRIs sady kalibrátorů
13/17 Analytů v šesti kalibračních sadách
• Kalibrátor A:
Prosinec 2012
- O-Desmethyl-Venlafaxine
- Venlafaxine
- N-Desmethyl-Venlafaxine (inactive metabolite)
• Kalibrátor B:
dostupné
- Citalopram
- Fluvoxamine
- Desmethyl-Citalopram (inactive metabolite)
• Kalibrátor C:
1. čtvrtletí 2013
- Norfluoxetine
- Fluoxetine
Fluorescenční-Detekce
UV-Detekce
Fluorescenční-Detekce
Fluorescenční-Detekce
Odpovídající dvoustupňové kontrolní sady jsou k dispozici
Dr. Reiner Krey
Bio-Rad Laboratories GmbH, Munich
SSRIs sady kalibrátorů
13/17 Analytů v šesti kalibračních sadách
• Kalibrátor D:
Prosinec 2012
UV-Detekce
- Paroxetine
- Mirtazapine
- Reboxetine
- Desmethyl-Mirtazapine (neaktivní metabolit)
• Kalibrátor E:
1. čtvrtletí 2013
UV-Detekce
- Hydroxy-Bupropion
- Duloxetine
- Bupropion
• Kalibrátor F:
dostupné
- Sertraline
- Desmethyl-Sertraline
UV-Detekce
(20% activity of Sertr.)
Odpovídající dvoustupňové kontrolní sady jsou k dispozici
Dr. Reiner Krey
Bio-Rad Laboratories GmbH, Munich
Bio-Rad TDM pro HPLC
AED soupravy
pro HPLC
Antiepileptika
Kalibrátor A:
-
Sultiam
Zonisamid
10-OH-Carbazepin
Desmethylmethsuximid
Lamotrigin
Oxcarbazepin
RAPsyD pro
HPLC
Benzo/TCA pro HPLC
Neuroepileptika
Kalibrátor A (TCA):
Kalibrátor A:
-
Norclozapin
Olanzapin
Quetiapin
Clozapin
Kalibrátor C:
- 9-OH-Risperidon
- Risperidon
Antidepresiva
-
Nordoxepine
Desipramine
Nortriptyline
Nortrimipramine
Norclomipramine
Doxepine
Imipramine
Amitriptyline
Clomipramine
Trimipramine
SSRI‘s pro
HPLC
Antidepresiva
Kalibrátor A:
- O-Desmethyl-Venlafaxine
- Venlafaxine
Kalibrátor B:
- Citalopram
- Fluvoxamine
Kalibrátor C:
- Norfluoxetine
- Fluoxetine
Kalibrátor B:
Kalibrátor B:
Kalibrátor D:
-
-
- Paroxetine
- Mirtazapine
- Reboxetine
Ethosuximid
Primidon
Phenobarbital
Carbamazepin-Epoxid
Phenytoin
Carbamazepin
Oxazepam
Alprazolam
Chlordiazepoxide
Desalkylflurazepam
Nordiazepam
Trazodone
Kalibrátor C:
Kalibrátor C:
- Felbamat
- Clonazepam
- Flunitrazepam
Online &
manuální
postup
Dr. Reiner Krey
Bio-Rad Laboratories GmbH, Munich
Kalibrátor D:
- Bromazepam
- Lorazepam
- Temazepam
Kalibrátor E:
- Hydroxy-Bupropion
- Duloxetine
- Bupropion
Kalibrátor F:
- Sertraline
Děkuji za pozornost!
Dr. Reiner Krey
Bio-Rad Laboratories GmbH, Munich