IMMUNOQUICK Adenovirus

IMMUNOQUICK® Adenovirus-Rotavirus Combo
Rychlotest pro detekci Rotavirů a Adenovirů z lidské stolice.
POUŽITÍ
IMMUNOQUICK® Adenovirus-Rotavirus Combo testovací kazetka je rychlý imunochromatografický kvalitativní test pro detekci Rotavirů
a/nebo Adenovirů z lidské stolice. Tento kit je určen k použití jako pomocný prostředek v diagnostice rotavirové a adenovirové infekce.
Tento test je určen pouze pro in vitro diagnostiku.
ÚVOD
Rotavirus je nejčastějším původcem akutních gastroenteritid, hlavně u malých dětí. Jeho objevení v roce 1973 a spojení s gastroenteritidami
reprezentuje velmi důležitý pokrok ve studování gastroeneteridid, které nejsou způsobeny akutní bakteriální infekcí. Rotavirus se přenáší
fekoorální cestou s inkubační dobou 1-3 dny. Ačkoli je odběr vzorků během 2-5 dne onemocnění ideální pro detekci antigenu, může být rotavirus
stále nalezen i když průjem pokračuje po delší dobu. Rotavirální gastroenteritidy mohou mít za následek úmrtnost populace nejvíce rizikových
skupin jako jsou děti, staří lidé a lidé se špatnou obranyschopností organismu. V mírném podnebí se rotavirové infekce vyskytují hlavně v
zimních měsících. Byly hlášeny endemie a epidemie postihující několik tisíc lidí. U hospitalizovaných dětí trápících akutní střevní onemocnění je
až 50% vzorků pozitivních na rotaviry. Viry se množí v buněčném jádru a mají tendenci být druhově specifickým hostitelem působícím
charakteristický cytopatický účinek (CPE). Protože je extrémně složité rotavirus kultivovat, není obvyklé isolovat viry k diagnostikování infekce.
Místo toho byly vyvinuty techniky detekce viru ze stolice.
Adenovirus je dalším nejčastějším původcem gastroenteritid. Akutní průjmové onemocnění malých dětí je nejčastější choroba na světě a je hlavní
příčinou úmrtnosti v rozvojových zemích. Výzkum ukázal, že střevní adenoviry, především Ad40 a Ad41, jsou hlavními příčinami průjmů mnoha
těchto dětí, na druhém místě jsou rotaviry. Tyto virové patogeny byly izolovány po celém světě a mohou způsobovat průjmy u dětí ve věku kolem
1 roku. Infekce mají najčastější záchyt u dětí mladších 2 let, avšak byly nalezeny u všech věkových kategorií. Další studie ukazují, že adenoviry
jsou přisuzovány 4-15% všech hospitalizovaných případů virových gastroenteritid.
Rychlá a přesná diagnóza adenovirů je nápomocna ke stanovení etiologie gastroenteritid a vedení léčby pacienta. Další diagnostické techniky
jako je elektronová mikroskopie (EM) a hybridizace nukleové kyseliny jsou drahé a složité. Vzhledem k povaze adenovirové infekce nejsou tyto
drahé a náročné testy nutné.
PRINCIP TESTU
Souprava IMMUNOQUICK® Adenovirus-Rotavirus Combo představuje kvalitativní, laterální průtokovou imunoesej pro detekci Rotavirů
a/nebo Adenovirů ze vzorků lidské stolice.
V tomto testu jsou Rotaviry detekovány pomocí specifických protilátek proti Rotavirům, zatímco Adenoviry jsou detekovány pomocí
specifických protilátek proti Adenovirům. Po přidání vzorku (stolice naředěná pufrem) se barevně označené protilátky zachytí na příslušných
virech, jestliže jsou obsaženy ve vzorku. Směs migruje na membráně vzestupně chromatograficky a za pomoci vzlínání reaguje specifická
protilátka s Rotaviry nebo Adenoviry v příslušné testovací zóně na membráně.
Přítomnost barevného proužku v reakční zóně (T) určené pro Rotavirus indikuje pozitivní výsledek na Rotaviry. Přítomnost barevného proužku v
reakční zóně (T) určené pro Adenoviry indikuje pozitivní výsledek pro Adenoviry. Jestliže se vyskytují obě virózy, jsou přítomny proužky v (T)
zónách pro Rotaviry i Adenoviry. Nepřítomnost barevných proužků znamená negativní výsledek.
V testu je zahrnuta i interní kontrola, a to barevný proužek, který se vždy objeví v kontrolní reakční zóně (C) indikující to, že byl aplikován
dostatečný objem vzorku, a že došlo k dostatečnému zvlhčení membrány.
POSKYTOVANÝ MATERIÁL
- 25 testovacích kazet balených individuálně - každý test obsahuje barevné konjugáty a reaktivní činidla potaženy na odpovídajících zónách.
- 25 kartiček pro odběr vzorku
- 25 zkumavek s pufrem (0,1 M Phosphate buffered saline (PBS) a 0,02% sodium azide) na ředění vzorků
- 25 jednorázových pipet
- návod k použití
POŽADOVANÝ, ALE NEDODÁVANÝ MATERIÁL
- hodiny nebo časovač
- centrifuga pro úpravu vzorků
SKLADOVÁNÍ A STABILITA
Test by měl být skladován při teplotě 2 – 30 °C až do data expirace uvedeném na obalu. Testovací kazety musí být uloženy v ochranném obalu až
do doby provedení testu. NEZMRAZUJTE. Nepoužívejte, pokud je evidentní mikrobiální kontaminace. Biologická kontaminace dávkovacího
zařízení, nádobek nebo reagencií může způsobit falešné výsledky.
BEZPEČNOSTNÍ OPATŘENÍ
- pouze pro in vitro diagnostiku
- test provádějte dle přiloženého návodu k použití
- nepoužívejte po uplynutí doby expirace
- test je určen pouze na jedno použití. Nepoužívejte opakovaně.
- nepoužívejte nebo nemíchejte reagencie s různých souprav a šarží
- nepoužívejte reagencie ze souprav jiných výrobců
- nepoužívejte zařízení, pokud je fóliový obal otevřen nebo poškozen
- se vzorky nakládejte jako s potenciálně biologicky nebezpečným materiálem. Při manipulaci se vzorky a reagenciemi nejezte, nepijte a nekuřte
Při provádění testu používejte ochranné pracovní prostředky, jako jsou rukavice, ochranné brýle a laboratorní plášť. Dodržujte stanovená
bezpečnostní opatření, týkající se mikrobiologických rizik, ve všech prováděných postupech a řiďte se standardními postupy pro správnou
likvidaci vzorku a kontamin. prostředků.
- zabraňte možnému potřísnění a vzniku aerosolu
- ředící pufr obsahuje nízké množství sodium acid pod deklaračním limitem.
- vlhkost a nesprávná teplota mohou nepříznivě ovlivnit výsledky
- složky testu (tj. protilátky/chemikálie) nepředstavují žádné nebezpečí, jsou-li dodrženy instrukce pro použití testu.
- všechny materiály použité k provedení testu by měly být upraveny z cílem zajistit inaktivaci patogenních agens
- prosím, informujte pacienta, jak sbírat a ředit vzorky stolice
ODBĚR VZORKU A JEHO SKLADOVÁNÍ
- Souprava IMMUNOQUICK® Adenovirus-Rotavirus Combo je pro použití pouze s lidským vzorkem stolice.
- Virová detekce je dokonalejší při odběru vzorku na počátku příznaků. Je prokázáno, že k maximální produkci rotavirů ve stolici pacientů s
gastroenteritidou dochází 3-5 dní po 1. příznacích. Jestliže jsou vzorky odebrány déle než na počátku průjmových příznaků, množtsví antigenu
nemusí průkazně vykázat pozitivní výsledek nebo nemusí být spojeny z průjmovou příhodou.
Testování by mělo být provedeno ihned po odebrání vzorku. Vzorky nenechávejte v laboratorní teplotě delší dobu než je nutné. Vzorky skladujte
při teplotě 2-8 °C do 72h.
- Před provedením testu nechte vzorek vytemperovat na laboratorní teplotu.
- V případě nutnosti transportu vzorku se řidte regulačními pravidly týkajícími se transportu vzorku lidského původu.
PRACOVNÍ POSTUP
Vzorky a testovací souprava by měly být před provedením testu minimálně 15 – 30 minut uchovány při laboratorní teplotě.
Odběr vzorku a příprava
1) Použijte kartičky na odběr vzorku, které jsou součástí soupravy. Postupujte podle návodu uvedeného na kartičce. Pro odběr vzorku mohou být
použity i jiné čisté a suché odběrové nádobky. Nejlepších výsledků dosáhnete testováním během 6. hodin po odběru vzorku.
2) - v případě pevných vzorků - odšroubujte a vyjměte aplikátor z ředící zkumavky, tak, aby jste nevylili roztok ze zkumavky. Odeberte vzorek
vložením aplikátoru do nejméně 3. různých míst stolice, tak aby jste získali přibližně 50 mg stolice (odpovídá velikosti 1/4 hrášku).
- v případě kapalných vzorků - držte pipetu svisle, odsajte vzorek stolice a přeneste 2 kapky (přibližně 50 µl) do zkumavky pro odběr vzorku
obsahující extrakční pufr.
3) Vraťte aplikátor do zkumavky a zašroubujte pevně víčkem. Dejte pozor, aby jste neporušili špičku ředící zkumavky.
4) Důkladně promýchejte odběrovou zkumavku se vzorkem a extrakčním pufrem. Takto připravený vzorek v odběrové zkumavce může být
skladován 6 měsíců při -20°C, jestliže není testován během 1 hodiny po přípravě.
Testování
1) Vyjměte testovací kazetu z jejího obalu a umístěte ji na čistý a rovný povrch. Označte test pro jeho identifikaci. Pro nejlepší výsledky je třeba
provést test během 1 hodiny.
2) Za použití papírového kapesníku ulomte špičku ředící zkumavky. Zkumavku držte svisle, odeberte 2 kapky roztoku a vložte do jamky pro
vzorek na testovací kazetě.
Poznámka: Dejte pozor, aby nevnikly vzduchové bubliny do jamek pro vzorky a nedávejte žádný roztok do výsledkového okna.
Jakmile začne test pracovat, bude barva vzlínat v membráně.
3) Čekejte na objevení barevných proužků. Výsledky by měly být přečteny po 10 minutách. Neinterpretujte výsledky po 20 minutách.
Poznámka: Jestliže vzorek nevzlíná kvůli přítomnosti částic, centrifugujte extrahovaný vzorek obsažený ve zkumavce s extrakčním pufrem.
Odeberte 80 µl supernatantu, přidejte do jamky pro vzorek na nové testovací kazetě a postupujte podle instrukcí uvedených výše.
INTERPRETACE VÝSLEDKŮ
Pro čtení výsledků sledujte barevné linie, které se objeví v okně pro čtení výsledků.
POZITIVNÍ výsledek pro Rotaviry, Adenoviry nebo obojí
Rotavirus pozitivní: Přítomnost barevné linky v kontrolní zóně (C) a další barevné linky v zóně pro Rotavirus (T).
Adenovirus pozitivní: Přítomnost barevné linky v kontrolní zóně (C) a další barevné linky v zóně pro Adenovirus (T).
Rotavirus a Adenovirus pozitivní: Přítomnost barevné linky v kontrolní zóně (C) a 2. barevných linek v zónách pro Adenovirus (T) a Rotavirus (T).
Poznámka: Barevná intenzita testovacích linií (Rota/Adeno) se může lišit v závislosti na koncentraci přítomné látky ve vzorku. Proto by jakýkoli
barevný odstín v testovací zóně měl být považován jako pozitivní výsledek. Tímto kvalitativním testem nelze určit množství obsažené látky.
NEGATIVNÍ výsledek - Přítomnost barevné linky pouze v zóně C. Absence barevných linek v zónách T.
NEPLATNÉ výsledky - Absence barevného proužku v zóně C. Pokud se po provedení testu neobjeví žádný kontrolní proužek v prostoru
membrány, určeném pro vyhodnocování výsledku, je výsledek považován za neplatný. V tomto případě je doporučeno provést opakované
vyšetření vzorku za využití nové testovací membrány.
Nedostatečný objem vzorku, nedostatečné vzlínání vzorku nebo špatný postup, jsou nejčastější příčiny neplatných výsledků. Zkouška se musí
provézt znovu s novým testem. Jestliže přítomnost viditelných částic potlačuje migraci, měly by být odstraněny centrigugací nebo sedimentací.
Přeneste část vzorku do zkumavky, nechte sedimentovat částice během krátké centrifugace a pipetujte přibližně 80 µl supernantantu do jamky pro
vzorek na nové testovací kazetě. Nebo nechce částice usadit ve svislé poloze zkumavky, použijte 80 µl z horní části kapaliny. Jestliže problém
přetrvává, přerušte testování a kontaktujte svého distributora.
Poznámka: Když jsou testovány vzorky stolice, může se objevit nažloutlé pozadí díky barvě vzorků stolice. To je přijatelné pokud to není v
rozporu s výkladem výsledku testu. Test je neplatný, jestliže pozadí nezmizí a zakrývá čtení výsledku.
KONTROLA KVALITY
Do testu je integrována interní kontrola (kontrolní proužek (C)), která umožňuje kontrolu nad tím, zda bylo použito dostatečné množství
supernatantu, a že byl dodržen správný pracovní postup. Kontrolní kalibrátor není součástí soupravy; nicméně, správná laboratorní praxe
doporučuje použít pozitivní a negativní kontroly pro kontrolu správného provedení testování.
OMEZENÍ TESTU
- Souprava IMMUNOQUICK® Adenovirus-Rotavirus Combo je pouze pro in vitro použití a pro kvalitativní detekci Rotavirů a Adenovirů.
- Definitivní klinická diagnóza by neměla být určena pouze na základě jednoho testu, měla být určena na základě výsledků testů pacientů v
souladu s jejich klinickou historií a v souladu s výsledky dalších laboratorních testů.
- Jestliže jsou výsledky testu negativní a klinické příznaky přetrvávají, doporučuje se další testování za pomoci jiných klinických metod.
Negativní výsledek nevylučuje možnost nízké koncentrace virových částic rotavirů nebo adenovirů.
CHARAKTERISTIKA TESTU
Analytická citlivost/ detekční limit
Rozsah měření (nejnižší a nejvyšší zjistitelná koncentrace)
Preciznost, výtěžnost / reprodukovatelnost, přesnost
Nejsou žádná data k dispozici. Veškeré informace jsou velmi vítány!
Relativní citlivost a specificita IMMUNOQUICK testu
Výsledné hodnoty rychlotestu IMMUNOQUICK® Adenovirus-Rotavirus Combo byly stanoveny porovnáním s metodou latexové aglutinace.
Pro Rotavirus bylo určeno 382 vzorků a pro Adenovirus 239 vzorků. Výsledky jsou uvedené v následující tabulce:
Tabulka: Rotavirus rychlotest vs. latexová aglutinace
Tabulka: Adenovirus rychlotest vs. latexová aglutinace
Zkřížená reaktivita
Zkřížená reaktivita s následujícími organismy byla studována u 1.0 x 109 organismů/ml.
Následující organismy byly negativní při testování soupravou IMMUNOQUICK® Adenovirus-Rotavirus Combo.
LITERATURA
1. Wadell, G. Laboratory Diagnosis of Infectious Diseases: Principles and Practices. New York: Springer-Verlag, Volume II, 1988: 284-300.
2. Wilhelmi I, Roman E, Sanchez-Fauquier A. Viruses causing gastroenteritis. Clin Microbiol Infect. April. 2003, vol.9:247-262.
3. Cubitt, WD (1982) Rotavirus Infection: An Unexpected Hazard in Units Caring for the Elderly. Geriatric Medicine Today 1: 33-38.
4. Wood, D. J., K. Bijlsma, J. C. de Jong, and C. Tonkin. “Evaluation of a Commercial Monoclonal Antibody-Based Enzyme Immunoassay for
Detection of Adenovirus Types 40 and 41 in Stool Specimens.” Journal of Clinical Microbiology, June 1989; 27(6): 1155-1158.
5. Thomas, Eva. E., D. Roscoe, L. Book, B. Bone, L. Browne, and V. Mah. “The Utility of Latex Agglutination Assays in the Diagnosis of
Pediatric Viral Gastroenteritis.” Am. J. Clin. Pathol. 1994; 101:742-746.
Použité symboly
Pozor, čtěte návod
Testy v soupravě
Výrobce
Použití pouze in vitro
Datum expirace
Pouze na 1 použití
Skladujte mezi 2-30°C
Číslo šarže
Katalogové číslo