dřeň helment

Cytogenetika
• 1. Postnatální (periferní lymfocyty)
• 2. Prenatální (amniocyty, fibroblasty z plodové
vody, chorium, placentální tkáň,
pupečníková krev, sekční materiál.)
• 3. Preimplantační (buňky rýhujícího se embrya)
• 4. Onkologická (kostní dřeň, periferní lymfocyty,
nádorová tkáň)
Indikace ke chromozomálnímu
vyšetření
•
•
•
•
•
•
•
Infertilita, dysfertilita
Růstové selhání u dětí
Psychomotorická retardace u dětí
Selhání pohlavního dozrávání
Dysmorfické rysy u dětí
VVV u novorozenců
Expozice účinkům mutagenů (mutageneza)
Mutageneza
Vyšetření zaměřené na detekci změn
v genomu po po expozici různých
mutagenů .
Sledují se zlomy, gapy,
double minutes.
Provádí se specializovaná vyšetření
zaměřená na výměnu sesterských
chromatid.
Syndromy s defektem reparačního mechanizmu DNA
1.
2.
3.
4.
Xeroderma pigmentosum
Ataxia teleangiectasia
Bloomův syndrom
Fanconiho anemie
Častá přítomnost
cytogenetických anomálií
Většinou AR dědičnost
Kultivace a zpracování lymfocytů periferní krve
1.Nasazení krevního
vzorku do média
2. Kultivace
3. Zástava mitotického
dělení
4. Hypotonie
5. Fixace
6. Příprava preparátu
7. Barvení
Typy chromozomálních aberací
• Numerické
• Strukturální
Numerické chromozomální aberace
1.
Polyploidie (triploidie 69,XXX)
2. Aneuploidie - trisomie (47,XXY;47,XX,+21)
- monosomie (45,X)
3. Marker chromozomy
4. Mozaiky
Vznik polyploidie
Strukturální chromozomální aberace
Zahrnující jeden chromozom: delece
duplikace
ring
inverze
isochromosom
Zahrnující více chromozomů: translokace
robertsonské
reciproké
Delece
Duplikace
Ring chromozom Inzerce
Inverze
Isochromosom
Paracentrická Pericentrická
Robertsonská translokace
Reciproká
translokace
Incidence
1 : 800
Vznik Downova syndromu: 1. Volná trisomie – meiotická
nondisjunkce
2. Translokační forma
3. Mozaika – mitotická
nondisjunkce
Detekce trisomie chromozomu 21. Zpracováno technikou
interfázní FISH na nekultivovaných amniocytech a
klasickou metodou z kultivovaných fibroblastů.
Meioza
Fertilizace
Meioza
Fertilizace
Trisomie 18 – Edwardsův syndrom
90 % meiotická nondisjunkce
10 % mozaicismus
Parciální trisomie – vzácné
Incidence: 1:8000
Mikrocefalie
Krátké sternum
Ztluštění kůže na šíji
Pedes equinovarus
Flexní deformity prstů
Kardiovaskulární defekty
Závažná MR
a další VVV
Trisomie 13 – Patauův syndrom
Deleční syndromy
Incidence: 1:50000
Cri-du-chat
5p-
80-85 % de novo delece
10-15 % důsledek translokace
u rodičů
Charakteristický pláč u novorozenců
Závažná MR, hyperaktivita
Mikrocefalie
Dysmorfické rysy: asymetrická tvář, krátké filtrum
Chromozomální vyšetření u rodiny s
balancovanou přestavbou
Karyotypy rodičů:
46,XX
46,XY,t(5;18)(p13.3;q21.3)
Karyotyp probanda:
46,XX,del(5)(p13.3pter.)
Diagnostika nebalancované přestavby u plodu
der(18)t(5;18)(p13.3;q21.3)
Wolf-Hirschorn syndrom
Incidence: 1:50000
Typická facie: „Greek helmet face“
Růstová retardace
Mentální retardace
90 % de novo delece 4p16
10 % důsledek translokace u rodičů
Nejčastější gonozomální aberace
Vznik: meiotická nondisjunkce
mitotická nondisjunkce - mozaiky
Techniky v prenatální diagnostice
• Invazivní:
•
•
•
•
Amniocentéza
CVS
Kordocentéza
Fetoskopie
• Neinvazivní:
• Ultrazvuk
• Jiné typy zobrazování
(MI, retgen)
Fetální buňky v
mateřském oběhu
Identifikace rizika před početím
CHR chromosomalní, SGD monogenní, MCM polygenní
+ spojeno, - nespojeno, (+) může být spojeno
Věk matky nad 35
Příbuzenský sňatek
Etnický původ
Positivní rodinná
anamnéza
• Onemocnění matky,
medikace
•
•
•
•
• CHR
+
• +
• -
SGD
+
+
+
-
MCM
+
(+)
+
+
Identifikace rizika během těhotenství
CHR chromosomalní,SGD monogenní, MCM
polygenní
• Abnormální UZ
• AFP screening
• Jiné biochemické
markery
• Expozice teratogením
látkám
•
•
•
•
CHR
(+)
(+)
(+)
• -
SGD
(+)
(+)
-
MCM
+
(+)
-
-
+
Indikace k AC
•
•
•
•
Věk matky nad 35
Positivní biochemický screening
Abnormální UZ
Pozitivní rodinná anamnéza (přenašečství
balancované chromozomální translokace,
předchozí gravidita postižena
chromozomální aberací)
Vyšetření prováděná z plodové vody
• Chromozomální
• Biochemická
(enzymatická)
• DNA analýza
(vyloučení
infekce,monogenních
onem.)
• FISH na interfázních
jádrech
Indikace ke kordocentéze
•
•
•
•
•
•
•
•
•
Vyšší týdny gravidity (nad 20. týden)
Hemofilie A and B *
Závažná kombinovaná imunodeficience
Srpková anemie, beta thalasemie*
Fetální infekce
Suspektní mozaicismus
In utero transfuse u Rh isoimmunizace
Selhání kultivace v případě AC
Závažný patologický nález na UZ
Vyšetření z choriových klků
• Metoda 1. trimestru gravidity
• Výhody: včasná karyotypizace plodu
• Nevýhody: výskyt placentálního
mozaicismu
riziko spontánního abortu 1-2 %
Výsledky vyšetření
pacientky s nálezem mozaiky
Vyšetření
UZ
Výsledky
Výrazný edém podkoží v oblasti šíje - nuchální
translucence 6.6 - 10 mm (12. týden gravidity)
Karyotyp
46,XX [11]/47,XX,+18 [2]
CVS přímá
FISH (CEP 18 )
disomické buňky : trisomickým
17
:
1
Karyotyp
46,XX,-18,+ mar [10]/
46,XX,-18,-21,+ 2mar [2]
FISH (CEP 18)
46,XX,-18,+ idic(18)
CVS kult.
disomické buňky : trisomickým
9
:
4
Karyogram z kultivované choriové tkáně u
pacientky s chromosomální přestavbou
FISH na kultivovaných fibroblastech z choriové
tkáně u pacientky s nálezem mozaiky
Druhy mozaik
• A generalizovaný
• B CPM (obě linie
zastoupeny v
placentě)
• C CPM(v
placentě
zastoupena jen
jedna linie)
• D potvrzený
embryonický
Kalousek, D. K., (1992)
Prader-Willi Syndrom
•
•
•
•
hypotonie
počáteční neprospívání
faciální dysmorfie
opožděný
psychomotorický vývoj
• hypogonadismus
• poruchy stravování
• Mikrodelece na
paternálním homologu
chrom. 15
Angelman Syndrom
•
•
•
•
hypotonie
třesy
nekoordinované pohyby
faciální dysmorfismus
• závažná MR
• opožděný vývoj
• delece na mat. kopii
chrom. 15
Mikrodelece u pacienta se syndromem PraderWilli
SNRPN/ Tel 15q
Metylačně senzitivní analýza
Prokázaná isodisomie u pacientky s Angelmanovým
syndromem
dítě
matka
otec
Patologické důsledky
uniparentální disomie
• Recesivní onemocnění
zděděné od jednoho z
rodičů
• IRR, spontánní abort
• Imprintingový efekt
(Prader-Willi
syndrom)
Princip FISH
Denaturace
Hybridizace
Vizualizace
Použití metody FISH
• Klinická genetika: postnatální
prenatální
• Onkologická genetika: hematoonkologická
nádorová
• Preimplantační genetika
• Mapování genomu
Možnosti využití FISH v PD
Detekce gonozomů u pacienta s mozaikou
Klinefelterova sy prováděná na
kultivovaných lymfocytech.
Mikrodeleční syndromy
detekované FISH
• DiGeorge
• Prader Willi Angelman
• 22q11.2
• 15q11-13
•
•
•
•
•
•
•
•
•
•
Williams Beuren
Smith-Magenis
Wolf Hirschhorn
Miller-Dieker
Cri-du-Chat
7q11.23
17p11.2
4p16.3
17p13.3
5p15.2-15.3
Pacient s prokázanou mikrodelecí
7q11.23
Detekce mikrodelece 7q11.23 u pacienta
se syndromem Williams Beuren
Princip CGH
Použití CGH v klinické genetice
• Zjišťování původu marker chromosomu
• Zjišťování původu nadbytečného chrom.
materiálu u derivovaných chromosomů
• Detekce větších delecí (Mb)
• V případě inverzí a přestaveb „de novo“
ověřování zachování genetického materiálu
Karyogram plodu s derivací de
novo
Comparative genomic hybridization
Comparative genomic hybridization
M- FISH
Osmibuněčné embryo
- stádium vhodné k biopsii blastomer
Preimplantační cytogenetická
diagnostika
1. biopsie blastomery z
8 buněčného embrya
2. biopsie blastocysty
FISH na embryu ve dvoubuněčném stádiu
použitá sonda CEP 21 (Vysis)