ODBĚRY VZORKŮ

ODBĚRY VZORKŮ
Základní pokyny pro odběry biologických vzorků na mikrobiologické
vyšetření
Uchovávání a transport odebraných vzorků
Odběry krve na průkaz protilátek (obecně)
Stanovení protilátek komplementfixační reakcí (KFR)
Stanovení protilátek metodou ELISA nebo NIF
Detekce nukleových kyselin metodou PCR
Odběry krve na antigenemii CMV v periferních leukocytech
Odběrové soupravy
Provedení výtěrů a výplachů z krku, nosu, nasopharyngu, očních spojivek,
tekutiny z puchýřků, stěry z kůže a sliznice
Provedení odběrů při podezření na pandemickou chřipku H1N1
Odběr stolice pro izolaci viru na tkáňových kulturách a záchyt Rotavirů,
Adenovirů a Norovirů ELISA testem
Mozkomíšní mok, další tělní tekutiny (synoviální tekutina, ascites,
tekutina z perikardu apod.)
Moč na záchyt CMV izolací na TK
Pitevní a bioptický materiál
Základní pokyny pro odběry biologických vzorků na mikrobiologické
vyšetření
Zkumavky s odebranými vzorky musí být označeny jménem pacienta, datem odběru a
rodným číslem pacienta.
Ke každému odběru je třeba vyplnit a přiložit žádanku o laboratorní vyšetření s těmito
údaji:
jméno a příjmení pacienta
celé rodné číslo/číslo pojištěnce
zdravotní pojišťovna, u které je pacient pojištěn
diagnóza, pro kterou se žádá o vyšetření (příp. i základní diagnóza, pokud je
odlišná)
druh zaslaného vzorku (materiálu)
datum odběru vzorku
začátek onemocnění (krátká epikríza a výsledek dosavadního základního
vyšetření, je-li to vhodné)
adresu a IČZ ordinujícího zařízení
jméno předepisujícího lékaře, jeho IČL a odbornost
číslo telefonu a faxu, event. e-mail předepisujícího lékaře pro případ nutnosti
bezodkladného sdělení nálezu nebo konzultace
druh požadovaného vyšetření
Údaje o onemocnění jsou nutné pro výběr vhodných vyšetřovacích metod, pro
zhodnocení výsledku, vyslovení závěru a případně dalších doporučení. Ostatní údaje jsou
nutné pro vykazování výkonů zdravotním pojišťovnám
Prosíme o správné a úplné vyplnění žádanky o vyšetření, která vaše vzorky provází.
Pozdější doplňování nebo opatřování chybějících údajů spotřebuje mnoho času, který
jinak můžeme zcela věnovat odborné práci pro Vás a Vaše pacienty.
Uchovávání a transport odebraných vzorků
Všechny odběry biologických materiálů je třeba pro krátkodobé skladování uložit při
teplotě 5°±3°C a při stejné teplotě je co nejrychleji transportovat do laboratoře.
Plnou sraženou krev, která se odebírá pro stanovení protilátek v séru, je možno
skladovat v chladu 1-2 dny. Po této době již může dojít k hemolýze a vzorek není možno
vyšetřit. Pro případ potřeby dlouhodobějšího skladování nebo časově náročnějšího
transportu doporučujeme separovat sérum co nejdříve, při dlouhodobém skladování
oddělené sérum zmrazit na -20°C . Sérum je možno správně zabalené zaslat i poštou.
Klinické materiály na záchyt infekčních agens nebo jejich antigenů (samotné nebo
odebrané do transportního media) je možno uchovávat při +5°± 3°C nejdéle dva dny.
Platí zásada, že čím kratší je interval mezi odběrem a vyšetřením, tím je naděje na
záchyt agens větší. Materiály tohoto druhu nezmražujte! Pokud nemohou být
materiály doručeny do naší laboratoře do 2 dnů, konzultujte další postup
telefonicky.
Klinické materiály pro průkaz DNA nebo RNA můžete rovněž uchovávat při +5°± 3°C
nejdéle dva dny. Pokud nebudou moci být vzorky v této době dopraveny do laboratoře, je
nutné je zmrazit na -20°C, kromě moči, kterou v žádném případě nezmražujte!
Plná krev v EDTA (pro vyšetření PCR a antigenemie CMV) se nesmí zmražovat a musí
být v den odběru transportována k vyšetření.
Klinické materiály určené k detekci genomu enterovirů je nutno dopravit do laboratoře
během 12 hodin po odběru. Případné delší skladování konzultujte telefonicky.
Odebrané vzorky se musí transportovat do laboratoře za chladu v termoboxu. Pokud byly
vzorky předem zmrazeny, je nutný transport ve zmrazeném stavu v termoboxech nebo
termolahvích s ledem nebo suchým ledem.
Odběry krve na průkaz protilátek (obecně)
Odběry krve je třeba provádět pokud možno v časném akutním stadiu onemocnění ještě
před zahájením antiinfekční léčby. Krev odebírejte asepticky, protože bakteriální
kontaminace může způsobit hemolýzu a hemolytická séra nelze k některým vyšetřením
vůbec použít. Je-li třeba vyšetřit druhý vzorek, odebírá se obvykle za 2 až 3 týdny.
Jestliže je vhodnější jiný termín odběru (záleží hlavně na dynamice tvorby protilátek proti
příslušnému agens), laboratoř vám jej doporučí v rámci komentáře k výsledkům prvního
vyšetření. Odebírá se 4-5 ml krve do sterilní zkumavky (bez přísad - EDTA, heparin,
apod.), nejlépe ráno nalačno. Lze použít odběrové zkumavky s aktivátorem
hemokoagulace . Máte-li možnost oddělit sérum po sražení krevního koláče, je
výhodnější a bezpečnější zaslání séra než plné krve. Plná krev se nesmí zmrazit,
protože by došlo k hemolýze, znemožňující většinu sérologických vyšetření.
Stanovení protilátek komplementfixační reakcí (KFR)
Pro vyšetření je zapotřebí odběr dvou vzorků krve pro posouzení vzestupu (poklesu)
hladin protilátek. První vzorek krve je vhodné odebrat co nejdříve po začátku
onemocnění. Pokud je zachován správný interval mezi jednotlivými odběry (obvykle 2 až
3 týdny), je považován za signifikantní 4 násobný rozdíl v titrech protilátek. Jestliže je
zapotřebí provést další odběr v atypickém termínu nebo je výsledek nejasný, uvádíme
příslušné doporučení k jeho provedení v rámci komentáře k výsledkům.
Stanovení protilátek metodou ELISA nebo NIF
Těmito metodami lze většinou zachytit protilátky typu IgM již v prvním vzorku krve a
stanovit tak etiologii onemocnění. Pokud je zapotřebí provést další odběr, uvádíme
příslušné doporučení k jeho provedení v rámci komentáře k výsledkům.
Detekce nukleových kyselin metodou PCR
Vzhledem k nebezpečí falešně pozitivních výsledků (mikrokontaminace negativního
materiálu pozitivním vzorkem) je pro tento typ vyšetřovací metody třeba klást
zvláštní důraz jak na provedení odběru biologického materiálu za přísně
sterilních podmínek do sterilních zkumavek nebo jiných sterilních nádobek, tak
na jeho přísně sterilní zpracování. Pokud na tuto reakci zasíláte plnou krev,
nesmí být odebrána do heparinu (lze použít EDTA).
Biologické materiály, které jsou doporučené pro odběr na vyšetření přítomnosti genomu
jednotlivých agens, jsou následující:
pro průkaz nukleových kyselin HBV, HCV, HDV, HEV a HGV:
plná krev (EDTA, minimálně 1,5 ml ), sérum (minimálně 0,5 ml)
pro průkaz nukleových kyselin herpetických virů (CMV, HSV1 a 2, EBV, VZV,
HHV 6):
plná krev (EDTA, minimálně 1,5 ml), mozkomíšní mok (0,5 ml), moč, sliny,
tekutina z puchýřků, oční stěr apod. - dle klinického obrazu nebo po konzultaci s
našimi pracovníky
pro průkaz nukleové kyseliny Borrelií:
mozkomíšní mok (0,5 ml), exsudát z kloubů, otoků (0,5 ml), seškrab z kožních
lézí (do mikrozkumavky typu Eppendorf), moč (15ml), plná krev – pouze na
začátku akutní fáze (EDTA, minimálně 1,5 ml)
pro průkaz nukleové kyseliny Chlamydia trachomatis:
stěry uretrální, cervikální, nasofaryngeální, z oční spojivky nebo jiné dle klinického
obrazu do našich odběrových souprav, BAL (min. 1 ml), moč (15 -20 ml první
porce moče do sterilní zkumavky; interval od posledního močení alespoň 2 hod.
nebo – optimálně - první ranní moč)
pro průkaz nukleové kyseliny Chlamydia pneumoniae:
BAL (min. 1 ml), sputum, plná krev (EDTA, minimálně 1,5 ml), stěry
nasofaryngeální a z oční spojivky do našich odběrových souprav
pro průkaz nukleové kyseliny Mycoplasma pneumoniae:
BAL (min. 1 ml), sputum
pro průkaz nukleové kyseliny Bordetella pertusis/parapertussis:
nasopharyngeální výtěr nebo aspirát
pro průkaz nukleové kyseliny Enterovirů :
mozkomíšní mok (0,5 -1,0 ml), perikardiální výpotek (1,0 – 2,0 ml), výtěry z krku
do transportního media, plná krev u dětí do 2 let života – pouze v období viremie
(EDTA- min. 1,5 ml)
pro průkaz nukleové kyseliny Papillomavirů:
cervikální výtěr, u mužů stěr ze sulcu coronarius, stěr z dalších podezřelých míst –
do našich odběrových souprav
pro průkaz nukleové kyseliny viru pandemické chřipky H1N1:
výtěr z nazofaryngu a nosu, BAL, výplach, sekční materiál do našich transportních
odběrových souprav
Odběry krve na antigenemii CMV v periferních leukocytech
Na vyšetření je třeba dodat 5 - 10 ml nesrážlivé krve (odebrané do EDTA). Vyšetření
vzorku je vhodné předem telefonicky domluvit a ihned po odběru transportovat do
laboratoře.
Odběrové soupravy
Naše laboratoř vám poskytne na požádání zdarma tyto transportní odběrové soupravy
(TOS):
Transportní medium včetně odběrového tamponu pro:
·
Průkaz virů z výtěrů, stěrů
·
Průkaz Ag chlamydií testem ELISA
·
Průkaz Ag chlamydií testem amplif. ELISA
·
Průkaz DNA chlamydií testem PCR
·
Průkaz DNA papillomavirů testem PCR
·
Průkaz Mycoplasma hominis a Ureaplasma urealyticum
Zkumavky na odběr krve s aktivátorem hemokoagulace na serologická vyšetření
Odběrové nádobky na stolici
Sterilní roztok na provedení výplachu
Provedení výtěrů a výplachů z krku, nosu, očních spojivek , tekutiny z
puchýřků , stěry z kůže a sliznice
Stěry, výtěry i výplachy je možno provést i přímo v ordinaci našeho pracoviště (kromě
stěrů z cervixu uteri a vaginálních stěrů).
Provádí se speciálními odběrovými soupravami, určenými na záchyt mikroorganismů,
které vám na požádání naše laboratoř dodá. Vzhledem k tomu, že viry a chlamydie jsou
intracelulární parazité, je třeba provést stěr poměrně razantně, aby byly setřeny
povrchové buňky sliznice.
Výtěr – výplach z krku, nosu: odběr by měl být proveden co nejdříve po začátku
onemocnění, nejlépe ráno před snídaní a hygienou dutiny ústní. Máte-li možnost - zvláště
u malých dětí - provést výplach, dejte mu přednost. Výtěr: sterilním tamponem se
důkladně vytřou patrové oblouky (ne mandle!) otáčivým energickým pohybem tak, aby
se epiteliální buňky dostaly na co největší povrch tamponu. Druhým tamponem se setře
sliznice nosu obou nosních dírek opět krouživým pohybem, z co největší vzdálenosti
od vchodu. Oba tampony - z nosu i krku - se zalomí sterilně do téže zkumavky s
transportním mediem tak, abychom se nedotkli té části dřevěné špejle, která zůstane ve
zkumavce s mediem. Zkumavka se pečlivě zazátkuje. Při onemocnění dolních cest
dýchacích odebírejte BAL, bronchiální výplach, méně vhodné je sputum.
Odběry z očních spojivek se provádějí krouživým pohybem co největší plochou
tamponu, který se poté sterilně zalomí do zkumavky s odběrovým mediem a pečlivě
zazátkuje . Je-li přítomen výraznější sekret, nejprve ho sterilním tamponem setřete, pak
teprve provádějte samotný odběr. Pro každé oko použijte zvláštní tampon. Pokud není
nutné oči odlišit, je možné oba tampony zalomit do jedné zkumavky.
Stěry z kůže a sliznice se provádějí před ošetřením dezinfekčním nebo léčebným
prostředkem. Razantně valivým pohybem setřete lézi a zvláště oblast rozhraní léze a
zdravé kůže/sliznice. Tampon se poté sterilně zalomí do zkumavky s odběrovým mediem
a pečlivě zazátkuje.
Tekutinu z puchýřků lze setřít po protržení puchýřku sterilním tamponem, který se
poté sterilně zalomí do zkumavky s odběrovým mediem a pečlivě zazátkuje. Tekutinu lze
také odsát sterilní injekční jehlou a stříkačkou. Nasátou tekutinu vstříkneme opatrně pod
hladinu odběrového media nebo na stěnu zkumavky s mediem tak, aby nedošlo ke
zpěnění a nevznikl aerosol. Vyhneme se tak šíření infekčního agens vzduchem. Tekutinu
z puchýřku je možno zaslat rovněž přímo ve stříkačce, kterou byla odebrána (ponechat
na stříkačce nasazenou jehlu, zabodnutou do gumové zátky).
Uretra: výtěr se provede z hloubky min. 4 cm pomalým krouživým pohybem
dakronovým (drsným) tamponem na aluminiovém drátku, který se zahne nebo zastřihne
do transportní zkumavky a velmi těsně uzavře. Výtěr u mužů se provádí nejdříve 1
hodinu po močení. Je-li přítomen exsudát, je třeba jej předem setřít.
Cervix uteri: nejprve se setře hlen sterilním tamponem, který se zahodí. Vlastní odběr
se provededalším tamponem, event. kartáčkem (pokud je obsažen v soupravě) pomalým
krouživým pohybem z ústí cervixu v místě, kde je již cylindrický epitel. Podle návodu na
odběrové soupravě se tampon opatrně zalomí do transportní zkumavky a velmi těsně
uzavře.
POZOR!!! U gravidních žen se nesmí používat k odběrům kartáček, který je
součástí některých souprav, ale jen tenký tampon, určený ke stěrům z uretry !
Provedení odběrů při podezření na pandemickou chřipku H1N1:
Poskytujeme odběrovou soupravu REMEL, která obsahuje odběrové médium, 1 silnější
tampon a 1 slabší tampon. Tato souprava se před použitím uchovává při pokojové
teplotě. Největší výtěžnost má odběr v akutní fázi infekce, tj. v prvých třech dnech od
začátku klinických příznaků, provedený ráno nalačno, před hygienou dutiny ústní.
Odebírá se nasopharyngeální výtěr a výtěr z nosu, případně BAL, výplach a sekční
materiál.
Nasopharyngeální výtěr:
Před výtěrem necháme pacienta zakašlat. Silnějším tamponem provedeme krouživým
pohybem stěr zadní stěny nosohltanu tak, aby se setřelo co nejvíce epiteliálních buněk.
Je nutno vyhnout se mandlím! Tampon vložíme do odběrového media a asi uprostřed
špejli zalomíme o okraj zkumavky, aniž bychom se v tomto místě špejle dotkli. Slabším
tamponem vytřeme obě nosní dírky a špejli zalomíme stejným způsobem do téže
zkumavky s odběrovým mediem, kde již je tampon z nosohltanu.
Sekční materiál:
Provést odběr nejdéle do 24 hod. po exitu.
Lze odebrat: při nálezu hemorrhagické tracheitidy stěr z nejvíce postižených míst, malou
část trachey se sliznicí (cca 1x1 cm), marginální zónu pneumonického ložiska. Vždy do
zkumavky s odběrovým mediem.
Vzorky v odběrovém mediu ihned uložíme do chladničky (+2 až +8 st.C.).
NESMÍ SE ZMRAZIT!
Odběr je zapotřebí opatřit vyplněnou žádankou s údaji o klinických příznacích,
přiloženou k soupravě. Transportujeme max. do 48 hodin do laboratoře, stále
při teplotě +2 až+8 st.C (v termoboxu).
Odběr stolice pro izolaci viru na tkáňových kulturách a pro záchyt
Rotavirů, Adenovirů a Norovirů ELISA testem
Odebírá se přibližně 1 g stolice ( tj. asi velikost lískového oříšku) do sterilní zkumavky
nebo parazitologické nádobky. Výtěr tamponem nebo rektální rourkou lze provést pouze
výjimečně u silně průjmových stolic, není-li jiný odběr možný (např. u malých dětí).
Odběr stolice na stanovení antigenů Helicobacter pylori
Odběr se provádí do čisté dobře uzavíratelné nádobky. Podle konzistence stolice se
odebírá cca 500 µl tekuté nebo polotuhé stolice nebo cca 1g (tj. asi velikost lískového
oříšku) tuhé stolice.
Nevhodně odebrané vzorky: Vodnatá, průjmová stolice, stolice v transportním mediu,
odběr tamponem (čistým i s konzervačním roztokem), odběr během léčby nebo do 2
týdnů po léčbě inhibitory protonové pumpy, antimikrobiálními látkami, preparáty s
bismutem. Při odběru menšího množství je nebezpečí falešně negativních
výsledků.
Mozkomíšní mok, další tělní tekutiny (synoviální tekutina, ascites ,
tekutina z perikardu apod.)
Odebírá se minimálně 0,5 ml mozkomíšního moku pro PCR reakci, pro ostatní reakce od
1,5 ml tělníchtekutin do sterilní zkumavky dle množství požadovaných vyšetření.
Moč na záchyt CMV izolací na TK
Odebírá se 5-10 ml moče, u novorozenců stačí 1-2 ml ( nejlépe ranní, první proud) do
sterilní zkumavky.
Pitevní a bioptický materiál
Odebírá se kousek postiženého orgánu (ne povrchová část, která bývá kontaminována
bakteriální flórou) do sterilní nádobky, s následným převrstvením odběrovým mediem
nebo sterilním fyziologickým roztokem. Materiál je nutno co nejdříve zaslat do laboratoře
k vyšetření.