Kyselina močová AOX

Kyselina močová AOX
Enzymová, fotometrimetrická metoda s askorbát-oxidázou s ATCS (Advanced Turbidity Clearing
Systém) – minimalizuje turbiditu způsobenou lipemií
Dvousložková souprava, kapalná činidla ke stanovení kyseliny močové v lidském séru, plazmě nebo moči.
REF
D94710
Cont
4x100 ml R1
1x100 ml R2
Zvlášť lze objednat:
D94708
D98485
D98485SV
D98481
D14481
D98481SV
D98482
D14482
D98482SV
D08581
D08581SV
D08582
D08582SV
1 x 3 mL
5 x 3 mL
1 x 3 mL
12 x 5 mL
5 x 5 mL
1 x 5 mL
12 x 5 mL
5 x 5 mL
1 x 5 mL
12 x 5 mL
1 x 5 mL
12 x 5 mL
1 x 5 mL
Uric Acid Standard
Calibrator
Calibrator
Control normal
Control normal
Control normal
Control abnormal
Control abnormal
Control abnormal
Urine Ctrl. normal
Urine Ctrl. normal
Urine Ctrl. abnormal
Urine Ctrl. abnormal
Diacal Auto
Diacal Auto
Diacon N
Diacon N
Diacon N
Diacon P
Diacon P
Diacon P
Diacon Urine Level 1
Diacon Urine Level 1
Diacon Urine Level 2
Diacon Urine Level 2
Parametry měření
Metoda:
Vlnová délka:
Měření:
Teplota:
Vzorek:
Linearita:
Mez detekce:
Mez stanovitelnosti:
Kolorimetrická, enzymová, endpoint, nárůst absorbance
Hg 546 nm, 550 nm
proti blanku
20-25°C, 37°C
Sérum, heparinová nebo EDTA plazma, moč
do 1190 µmol/l
6 µmol/l
18 µmol/l
Princip
kys. močová + 2 H2O + O2
TOOS + 4-AAP + 2 H2O2
urikáza
———>
POD
———>
allantoin + CO2 + H2O2
barevný komplex + 3 H2O
Kyselina močová je působením urikázy oxidována na allantoin. Při reakci vznikající peroxid vodíku reaguje
s 4-AAP a N-ethyl-N-(hydroxy-3-sulfopropyl)-m-toluidinem za vzniku modrofialového komplexu. Intenzita
zbarvení vznikajícího komplexu je přímo úměrná koncentraci kyseliny močové ve vzorku. Přídavek AOX v
reakční směsi potlačuje negativní interferenci kyseliny askorbové.
Vysvětlivky zkratek
4-AAP
POD
TOOS
AOX
= 4-aminoantipyrin
= peroxidáza
= N-ethyl-N-(hydroxy-3-sulfopropyl)-m-toluidin
= askorbátoxidáza
Složení a koncentrace činidel
R1
R2
fosfátový pufr, pH 7,0
TOOS
AOX
fosfátový pufr, pH 7,0
4-AAP
K4[Fe(CN)6]
POD
urikáza
100,0 mmol/l
1,25 mmol/l
> 1,2 kU/l
100,0 mmol/l
1,5 mmol/l
50 μmol/l
> 5 kU/l
>250 U/l
_________________________________________________________________________________________________________________
Rev. 06-1601
Strana 1 (celkem 4)
Příprava činidel
Pro start substrátem jsou činidla připravena k přímému použití.
Start vzorkem není z důvodu kvůli eliminaci kyseliny askorbové askorbátoxidázou během inkubace R1.
Stabilita a skladování činidel
Činidla skladujeme při teplotě 2-8°C. Jsou stabilní po celou dobu exspirace, vyznačené na obalu, zabráníli se kontaminaci po otevření originálního balení. Činidla je nutné ihned po použití dobře uzavřít. Činidla
uchováváme ve tmě! Nezmrazujte!
Činidla lze použít pokud hodnota absorbance nedosáhne hodnoty 0,300 proti vodě při 546 nm.
Vzorek
Sérum, heparinová plazma, lze použít heparinát lithný.
Moč- stanovuje se obvykle ve sbírané moči, pH je nutné upravit na hodnotu pH >8,0. Moč ředíme 1:10
destilovanou vodou. Moč sbírejte do plastových sběrných lahví určených jen pro tento účel, bez
konzervačních přísad.
Kyselina močová je stabilní v séru/plazmě 3 dny při 20-25°C, 1 týden při 4-8°C a 6 měsíců při –20°C.
V moči je kyselina močová stabilní 4 dny při 20-25°C.
Nepoužívajte kontaminované vzorky!
Další potřebný materiál
Fyziologický roztok (9 g/l)
Běžné laboratorní vybavení
Standard
(lze objednat pouze samostatně)
Koncentrace: 357 mmol/l
Skladování:
2 - 8°C
Stabilita:
po celou dobu použitelnosti
Po použití ihned uzavřete! Zabraňte kontaminaci!
Provedení testu
Start činidlem R2
Činidla a vzorky inkubujeme na zvolenou teplotu stanovení.
Pipetujeme:
blank
standard
vzorek
činidlo R1
1000 µl
1000 µl
1000 µl
vzorek
20 µl
standard
20 µl
Destilovaná voda
20 µl
Promícháme, inkubujeme 5 minut minut při 37°C / 20-25°C odečteme A1 vzorku nebo std/cal a přidáme:
činidlo R2
250 µl
250 µl
250 µl
Promícháme, inkubujeme 5 minut při 37°C nebo 10 minut při 20-25°C. Do 30 minut změříme absorbance
A2 vzorku a standardu proti blanku. Dodržujte stejnou inkubační dobu pro všechny vzorky, standardy,
kalibrátory i blank.
Kalkulace
(A2-A1) Vz
--------------- x konc. stand. v µmol/l = Kyselina močová v µmol/l
(A2-A1) St
Výsledky pro vzorky moče násobíme ředěním (11).
Konverzní faktor: mg/dl * 59,48 = µmol/l
_________________________________________________________________________________________________________________
Rev. 06-1601
Strana 2 (celkem 4)
Referenční rozmezí
Sérum/plazma(mmol/l)
Dospělí (4)
Děti(5)
0-30 dní
31-365 dní
1-3 roky
4-6 let
7-9 let
10-12 let
13-15 let
16-18 let
moč (1) mmol/24 h
běžná strava
nízkopurinová strava
ženy
155-357
muži
208-428
59-271
65-319
106-295
118-301
106-325
148-348
130-378
142-389
71-230
71-330
124-330
106-325
106-319
130-342
183-413
124-448
≤ 4,76
≤ 3,57
Každá laboratoř by si měla sestavit vlastní tabulku „normálních hodnot“.
Analytické parametry stanovení
Linearita
Metoda je lineární v rozmezí 18 - 1190 µmol/l. Při vyšší koncentraci je nutno vzorek zředit redestilovanou
vodou nebo roztokem NaCl (o koncentraci 154 mmol/l). Výsledek vynásobíme faktorem ředění.
Přesnost (při 37°C)
Intra-assay
n = 20
Vzorek 1
Vzorek 2
Vzorek 3
Inter-assay
n = 20
Vzorek 1
Vzorek 2
Vzorek 3
Průměr
[µmol/l]
183,8
380,1
648,3
Průměr
[µmol/l]
193,9
383,0
636,4
SD
[µmol/l]
3,0
1,8
2,4
SD
[µmol/l]
2,4
2,4
2,4
CV
[%]
1,74
0,52
0,41
CV
[%]
1,31
0,56
0,39
Interferující látky
Stanovení ruší hemolýza, chylozita. Stanovení ruší protisrážlivá činidla s NaF a EDTA. Stanovení ovlivňuje
věk, alkohol, dieta, fyzická zátěž a některé léky(6).
Neinterferuji až do uvedených koncentrací:
Kyselina askorbová
300 mg/l
Bilirubin
342 µmol/l
Triacylglyceroly
22,6 mmol/l
Hemoglobin
4 g/l
Porovnání metod
Při porovnání Dialab Kyseliny močové AOX (y) s komerčně dostupným testem (x) (107 vzorků) byly
získány následující výsledky:
y = 1.04 x + 5,35 µmol/l; r= 0.999.
Kalibrace
Jako standard doporučujeme použít:
REF
DIACAL AUTO
D98485, D98485SV
Kyselina močová standard
D94708
Hodnoty kalibrátoru jsou návazné na referenční metodu –plynovou chromatografii-izotopovou diluční
hmotovou spektrometrii (GC-IDMS).
Kontrola kvality
Všechna komerční kontrolní séra, kde je uvedena hodnota pro tuto metodu stanovení.
_________________________________________________________________________________________________________________
Rev. 06-1601
Strana 3 (celkem 4)
Doporučujeme používat:
DIACON N
DIACON P
Urine control normal
Urine control abnormal
REF
D98481, D98481SV
D98482, D98482SV
D08581, D0581SV
D08582, D08582SV
Každá laboratořsi musí vypracovat postup nápravných opatření pro případ, že výsledek testu kontroly
bude mimo specifikaci.
Upozornění
1. Činidla jsou konzervována azidem sodným. Zabraňte polknutí a přímému styku činidel s pokožkou
a sliznicemi.
2. Reagent R2 obsahuje biologický materiál. Zacházejte s reagentem jako s potenciálně infekčním
materiálem. Dodržujte zásady SLP.
3. Ve velmi vzácných případech mohou vzorky pacientů s gamopatií vykazovat falešně negativní
výsledky.(7)
4. Léčba N-acetylcysteinem (NAC), acetaminofenem a metamizolem vede k falešně nízkým
výsledkům testu.
5. Pečlivě peostudujte Bezpečnostní list a dodržujte předepsané pokyny pro práci.
6. Výsledek testu musí být vždy porovnán s celkovým stavem pacienta a jeho anamnézou.
7. Pouze pro profesionální použití.
Automatizace
Na požádání jsou k disposici aplikační listy pro běžné typy automatických analyzátorů.
Odpadové hospodářství
Prázdný obal zneškodněte v rámci tříděného odpadu v souladu se zákonem o odpadech.
Literatura
1. Thomas L. Clinical Laboratory Diagnostics. 1st ed. Frankfurt:TH-Books Verlagsgesellschaft; 1998. p.
208-14.
2. Newman DJ, Price CP. Renal function and nitrogen metabolites. In: Burtis CA, Ashwood ER, editors.
Tietz Textbook of Clinical Chemistry. 3rd ed. Philadelphia: W.B Saunders Company; 1999. p. 1204-70.
3. Guder WG, ZawtaB et al. The Quality of Diagnostic Samples. 1st ed. Darmstadt: GIT Verlag; 2001.
p.48-9, 52-3.
4. Newman JD, Price PC. Renal function and nitrogen metabolites. In: Burtis CA, Ashwood ER, editors.
TietzTextbook of Clinical Chemistry. 3rd ed. Philadelphia: W.B Saunders Company; 1999. p. 1250.
5. Soldin SJ, Brugnara C, Wonng EC. Pediatric Reference Intervals, 6th ed. Washington DC; The
American Association for Clinical Chemistry Press, 2007; p. 204-5.
6. Young DS. Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests. 5th ed. Volume 1 and 2. Washington, DC:
The American Association for Clinical Chemistry Press 2000.
7. Bakker AJ, Mücke M. Gammopathy interference in clinical chemistry assays: mechanisms, detection
and prevention. ClinChemLabMed 2007; 45(9): 1240-1243.
DIALAB spol. s r.o.
Nám. Osvoboditelů 1, 153 80 Praha 5
Tel./Fax:257 910 255
257 910 260
257 910 263
e-mail: [email protected]
IČO: 14889200
_________________________________________________________________________________________________________________
Rev. 06-1601
Strana 4 (celkem 4)