stáhnout

Lipáza - F
Kolorimetrie
Kat. číslo
166 200
Velikost balení
5 x 20 ml R1
Referenční hodnoty (37°C)
1 x 25 ml R2
≤ 1,0 μkat/l
Kolorimetrická metoda, kinetika.
Poznámka: Uvedená data jsou pouze doporučením, každá
laboratoř by si měla stanovit vlastní referenční rozmezí.
Princip
Postup stanovení
Metoda
Kinetické stanovení
následující přeměnu:
lipázy,
která
katalyzuje
1,2-o-dilauryl-rac-glycero-3-glutaro-(6- metylresorufin)ester
lipáza,kolipáza
←—→
1,2-o-dilauryl-rac-glycerol+ glutaro(6-metylresorufin)ester
glutaro(6-metylresorufin)ester —→kyselina glutarová +
metylresorufin
Syntetický substrát DGMRE je lipázou štěpen na
žlutě zbarvený produkt – metylresorufin. Nárůst
absorbance je měřen fotometricky.
Reakce je vysoce specifická pro humánní enzym.
Složení reagencií
Good´s pufr (pH 8,0)
taurodeoxycholát
deoxycholát
CaCl2
kolipáza
vínanový pufr (pH 4,0)
taurodeoxycholát
DGMRE
emulgátory
R1
R2
40 mmol/l
3,4 mmol/l
2,6 mmol/l
12 mmol/l
1mg/l
1,5 mmol/l
3,4 mmol/l
0,13 mmol/l
Reagencie lze použít pro manuální stanovení (viz
níže) nebo na většině analyzátorů. Aplikace na
vyžádání.
Vlnová délka:
Teplota:
Kyveta :
Činidlo R1
Vzorek, kalibrátor
1 000 μl
20 μl
Opatrně promíchejte a inkubujte 1 až 5 minut a poté
pipetujte:
Činidlo 2
250 μl
Opatrně promíchejte a po dvouminutové inkubaci
začněte sledovat změnu absorbance po dobu 2
minut.
Vypočítejte změnu absorbance za minutu ΔA.
Výpočet katalytické koncentrace
ΔA/min vzorek
Katalyt. koncen. lipázy (μkat/l) = ——————
x c
ΔA/min kalib.
Upozornění

580 nm (578 nm)
37°C
1 cm
Pouze pro použití in vitro.
c = koncentrace kalibrátoru v μkat/l
Stabilita reagencií
Reagencie jsou stabilní do uvedeného data
exspirace, pokud jsou skladovány při teplotě 2-8°C
a chráněny před světlem.
Přepočítávací faktor
U/l x 0,0167 = μkat/l
Kalibrace a kontrola
Příprava pracovního činidla
Činidla R1 a R2 jsou připravena k použití.
Vzorek
Pro kalibraci je doporučen multikalibrátor Greiner
(kat.číslo 280 000).
Ke kontrole použijte kontrolní séra Unitrol I a
Unitrol II.
Nehemolytické sérum, plasma (heparin)
Stabilita:
24 hodiny při 15-25°C
5 dnů při 2-8°C
1 rok při -20°C
5/2006
1
Greiner Diagnostic GmbH – Unter Gereuth 10 – D 79353 Bahlingen – Germany
www.greiner-diagnostic.com
Charakteristika stanovení (37°C)
■ Linearita
Likvidace odpadu
Podle místních legislativních nařízení.
Stanovení je lineární do hodnoty katalytické
koncentrace lipázy 5 μkat/l. Pokud je tato hodnota
překročena, opakujte stanovení se vzorkem
ředěným 2x (1 + 1)fyziologickým roztokem (NaCl
9g/ l). Výsledek vynásobte 2.
■ Mez detekce
Literatura
1.
2.
0,05 μkat/l
■ Přesnost
Přesnost v sérii
n=40
průměr
(U/l)
vzorek 1
13,4
vzorek 2
58,9
vzorek 3
103
Celková přesnost
n=40
průměr
(U/l)
vzorek 1
13,4
vzorek 2
58,9
vzorek 3
103
SD (U/l)
CV( %)
3.
0,24
0,60
1,50
1,81
1,01
1,45
4.
SD (U/l)
CV( %)
0,24
0,49
0,65
1,81
0,82
0,83
5.
6.
■ Korelace
Srovnání reagencií Greiner bylo provedeno
s komerčně dostupnými reagenciemi na 67
pacientských vzorcích s těmito výsledky:
korelační koeficient
r = 0,999
lineární regrese
y = 0,96 x – 1,15 U/l
7.
Lorentz K, Lipase in: Thomas L, editor –
Clinical laboratory Diagnostics 1st ed,
Frankfurt, TH-Books Verlagsgesselschaft;
1998, p.95-7
Moss DW, Henderson AR. Digestive
enzymes of pancreatic origin. In:Burtis
CA, Ashwood ER, editors. Tietz Textbook
of Clinical Chemistry. 3 rd ed.
PhiladelphiaW.B Saunders Company;
1999, p.689-708
Tietz N, Shuey DF. Lipase in serum – the
elusive enzyme – an overview, Clin Chem
1993, 39, 746-56
Lott J, Patel ST, Sawhney AK,
Kazmierczak SC, Love JE. Assays of
serum lipase: analytical and clinical
considerations. Clin Chem 1986. 32, 12901302
Leybold A, Junge W. Importance of
colipase for the measurement of serum
lipase activity. Adv Clin Enzymol 1986, 4,
60-7
Bongström B. The action of bile salts and
other detergents on pancreatic lipaseand
the interaction with colipase. Biochemica
and Biophysica Acta 1977,488, 381-91
Gargouri Y, Julien R, Bois A, Verger R,
Sarda L. Studies on the detergent
inhibition of pancreatic lipase activity. J of
Lipid Research 1983, 24, 1336-42
Interference




Kyselina askorbová – neinterferuje do
koncentrace 1700 μmol/l.
Triacylglyceroly – neinterferují do
koncentrace 11,5 mmol/l.
Bilirubin – neinterferuje do koncentrace
1020 μmol/l.
Hemoglobin - neinterferuje do koncentrace
500 mg/dl.
5/2006
2
Greiner Diagnostic GmbH – Unter Gereuth 10 – D 79353 Bahlingen – Germany
www.greiner-diagnostic.com