ÚČEL POUŽITÍ Testovací proužek DIMA CRP je semikvantitativní

ÚČEL POUŽITÍ
Testovací proužek DIMA® CRP je semikvantitativní rychlý test pro detekci a
sledování hladiny CrP ve vzorcích plné krve, séra a plazmy. Limit tohoto testu je 10
μg/ml. Test je určen pouze pro odbornou in vitro diagnostiku.
ODBĚR VZORKŮ A PŘÍPRAVA
Příprava
Před provedením testu je třeba zajistit, aby všechny komponenty byly vytemperovány
na pokojovou teplotu (viz skladování). Studený roztok pufru nebo kondenzace vlhkosti
na membráně mohou vést k neplatným výsledkům testu.
1. Ze soupravy vyjměte zkumavku s roztokem pufru. Uveďte na ní jméno nebo
identifikační číslo. Otevřete šroubovací uzávěr.
SOUHRN
CrP (C-reaktivní protein) je protein akutní fáze. Je klasickým markerem, který lze
použít pro detekci zánětlivé reakce v organismu. Syntéza CrP probíhá v játrech a je
indukována prozánětlivými cytokiny, zvláště interleucinem-6. Plazmou se CrP
dostává do místa zánětu, kde se aktivně podílí na přirozené imunitní odpovědi
organismu. Systémový zánět je obvykle doprovázen zvýšenou hladinou CrP v krvi.
Zvýšení hladiny CrP mohou vyvolat bakteriální infekce, poškození sterilní tkáně
např. po chirurgickém zákroku, trauma nebo extrémní fyzická zátěž, nádory v
metastázující fázi, některé autoimunitní choroby a také maligní systémová
onemocnění (Hodgkinův a non-hodgkinský lymfom). Pro diagnostické účely se CrP
často používá pro rozlišení mezi virovou a bakteriální infekcí, protože zvýšení
hladiny CrP je výraznější při bakteriálních infekcích. CrP se také často používá pro
sledování terapeutického účinku například antibiotické léčby. Vytvoření linií testu v
závislosti na koncentraci umožňuje rychlé semikvantitativní stanovení CrP ve
vzorcích plné krve, séra a plazmy.
Odběr vzorku krve
2. Odeberte vzorek podle standardních postupů.
• Vzorky nenechávejte delší dobu při pokojové teplotě. Vzorky séra a plazmy lze
skladovat až 3 dny při teplotě 2–8 °C. V případě dlouhodobého skladování vzorky
uchovávejte při teplotě nižší než -20 °C. Plnou krev odebranou ze žíly skladujte při
teplotě 2–8 °C, jestliže má být test proveden do 2 dnů od odběru. Vzorky plné krve
nezmrazujte. Plnou krev odebranou z bříška prstu je nutné testovat okamžitě.
• Před provedením testu vzorky nechte vytemperovat na pokojovou teplotu.
Zmrazené vzorky je nutné před provedením testu zcela rozmrazit a dobře
promíchat. Vzorky opakovaně nezmrazujte ani nerozmrazujte.
• Také lze použít krev s přídavkem EDTA, citrátu nebo heparinu. Před provedením
testu je třeba ji příslušným způsobem zředit pomocí dodaného pufru.
3. Pomocí dodané kapiláry odeberte 10 μl vzorku krve. Je důležité, aby kapilára typu
end-to-end byla naplněna až po horní konec. Z hygienických důvodů uchopte
kapiláru pomocí držáku na kapiláry nebo pinzetou. Krev lze také odebrat pomocí
mikropipety. Poznámka: V případě použití mikropipet nebo jiných kapilár musí být
aplikováno přesně 10 μl vzorku. Vzorek krve je nutné ihned zředit, aby nedošlo ke
koagulaci.
PRINCIP
Okraj testovacího proužku se ponoří do testovaného vzorku, který je zředěn
roztokem pufru. Vzorek se nyní pohybuje podél testovacího proužku zespodu
nahoru. Pokud testovaný vzorek obsahuje CrP, zachytí se na první protilátce proti
CrP navázané na červené koloidní částice zlata, které slouží k barevnému označení.
Červený komplex CrP-protilátka-zlato spolu s kapalným vzorkem difundují přes
membránu, která je rozdělena liniemi s různým množstvím druhé protilátky proti CrP.
Komplex CrP-protilátka-zlato se zachytí na druhé protilátce za vzniku červených linií.
Počet linií závisí na koncentraci CrP ve vzorku. Čím více CrP vzorek obsahuje, tím
více červených linií se objeví. Na konci membrány se vytvoří červená kontrolní linie,
která značí, že test byl řádně proveden.
Červená linie se musí vždy objevit v oblasti kontrolní (C). Slouží jako procesní
kontrola a potvrzuje, že bylo naneseno dostatečné množství vzorku a indikuje, že je
zvlhčení membrány dostatečné a postup byl správný.
Ředění vzorku / stabilita vzorku
4. Do plastové zkumavky se zřeďovacím pufrem vložte kapiláru typu end-to-end
naplněnou krví. Alternativně lze přímo do pufru přidat vzorek o objemu 10 μl pomocí
mikropipety.
5. Zkumavku uzavřete a vzorek intenzivně ručně třepte 10 vteřin, aby došlo k uvolnění
krve z kapiláry a následnému dokonalému smíchání vzorku se zřeďovacím pufrem.
4. Zředěný vzorek nechte stát přibližně 1 minutu.
6. Vzorek lze použít ihned nebo ho lze uložit na dobu až 8 hodin.
MATERIÁLY
Dodané materiály
• Testovací proužek DIMA® CRP
• Plastové zkumavky
• Kapiláry typu end-to-end (10 μl)
• Návod k použití
REAGENCIE
Testovací proužek obsahují signalizační částice potažené protilátkami proti CRP i
protilátky proti CRP umístěné na membráně.
PREVENTIVNÍ OPATŘENÍ
• Jen pro profesionální diagnostiku in vitro
• Jen pro jednorázové použití
• Složky testovací sady nezmrazujte
• Testovací složky nepoužívejte po uvedené exspirační době (viz fóliový sáček a
etiketa na kartonu)
• Test nepoužívejte, je-li sáček poškozen
• Tam, kde se používají zkušební vzorky a testovací sady, nejezte, nepijte a nekuřte
• Se všemi vzorky zacházejte tak, jako by obsahovaly infekční materiál
• Během celého testu dodržujte stávající preventivní opatření pro mikrobiologická
rizika i standardní postup ke správné likvidaci vzorků
• Při manipulaci se zkušebními vzorky noste ochrannou výstroj, jako je laboratorní
plášť, jednorázové rukavice a ochranné brýle
• Použitý test byste měli odstranit podle místních předpisů
• Vlhkost a vysoké teploty mohou ovlivnit výsledky testů
• Všechny reagencie musí mít před použitím pokojovou teplotu (15-30 °C).
• Do reakční zóny neaplikujte kapalný vzorek.
• Nedotýkejte se reakční zóny, aby nedošlo ke kontaminaci.
• Testovací sadu skladujte a přepravujte při teplotě 2-30 °C
• Testovací proužek musí zůstat v uzavřeném obalu až do použití
• Po 5 minutách test vyhodnoťte
• Křížové kontaminaci různých vzorků zabráníte tím, že pro každý vzorek vezmete
novou palstickou zkumavku a kapiláru
• Testovací proužek neponořujte více než po značku MAX
• Pufr na ředění vzorků obsahuje azid sodný, při jeho reakci s olovem nebo mědí
může dojít ke vzniku potenciálně výbušných azidů kovů. Roztoky při likvidaci vždy
vylévejte s velkým množstvím vody, aby nedocházelo ke tvoření azidů
• Potenciálně infekční materiály (např. protilátky) nebo jiné látky testu (např.
chemikálie) nejsou při správném zacházení podle návodu nebezpečné.
• Tato souprava obsahuje produkty živočišného původu. I při certifikované znalosti
původu a / nebo zdravotního stavu zvířat nelze zcela zaručit nepřítomnost
patogenních agens. Doporučuje se proto, aby tyto produkty byly považovány za
potenciálně infekční a dodržela se obvyklá bezpečnostní opatření (např. varování
před požitím nebo inhalací)
Potřebné materiály, které nejsou součástí balení
• Stopky
• Odstředivka
PROVEDENÍ TESTU
Test, reagencie, vzorek anebo externí kontroly musí mít před zahájením testu
pokojovou teplotu (15-30 °C). Zkouška by měla být provedena ihned po otevření
foliového sáčku, protože test je citlivý na vlhkost
1. Testovací proužek vyjměte z fóliového sáčku a co nejdříve jej použijte, nejpozději
do 1 hodiny. Nejlepších výsledků dosáhnete, pokud test provedete okamžitě po
otevření fóliového sáčku.
2. Zkumavku se zředěným vzorkem otevřete a testovací proužek vložte druhým
koncem do kapaliny. Testovací proužek nesmí být ponořen nad linii označující
maximální hloubku ponoření (linie MAX). V žádném případě nesmí dojít k
přímému namočení pole pro výsledek testu bočním postříkáním nebo příliš
hlubokým ponořením testovacího proužku.
3. Testovací proužek nechte minimálně 10 vteřin ve zředěném vzorku, dokud se v
poli pro výsledek testu neobjeví narůžovělé čelo kapaliny.
4. Testovací proužek vyjměte a položte ho na rovný povrch, který nebude testovací
proužek vysušovat (např. obal testu). Testovací proužek může také zůstat ve
zkumavce. Spusťte stopky.
5. V průběhu testu se bude membrána postupně zbarvovat. Výsledek odečtěte za
5 minut. Tento čas se musí dodržet, aby se zajistilo, že semikvantitativní výsledky
jsou správné.
SKLADOVÁNÍ A TRVANLIVOST
Testovací sadu uchovávejte při teplotě 2-30 °C. Test spotřebujte do data expirace
natištěném na fóliovém sáčku. Test až do použití ponechejte v uzavřeném fóliovém
sáčku. Nemrazit. Při uložení testovací soupravy v chladu může dojít k flokulaci solí v
roztoku pufru. Kvalita výrobku tím však většinou není ovlivněna.
1
VYHODNOCENÍ TESTU
Test se musí vyhodnotit přesně za 5 minut!
Pro vyhodnocení výsledků si prosím prohlédněte způsob uspořádání linií v bílém poli
membrány.
KONTROLA KVALITY
Interní kontrola jakosti
Test obsahuje interní kontrolu postupu. Červená linie, která se objeví v oblasti
kontrolní linie (C), se považuje za interní pozitivní kontrolu postupu. Potvrzuje, že
bylo naneseno dostatečné množství vzorku a indikuje, že je zvlhčení membrány
dostatečné a postup byl správný.
Poznámka: Test vyhodnoťte za 5 minut, a to pouze jednou. Pro imunochromatografii
a kinetiku rychlých testů je zcela přirozené, že se intenzita všech linií během času
zvyšuje. Je-li test vyhodnocen později, nelze již zajistit správnou semikvantitativní
interpretaci výsledku testu, protože nízké koncentrace by mohly být velmi
nadhodnocené.
Externí kontrola jakosti
Pro každou testovací sadu se doporučuje použít pozitivní a negativní externí
kontrolu, kromě toho je to nutné z hlediska vašich interních laboratorních postupů.
Testovací souprava neobsahuje prvky externích kontrol.
OMEZENÍ
• CrP není specifický marker pro určitou chorobu. Ke zvýšení CrP často dochází
ještě před objevením symptomů, a proto je třeba zvažovat i dočasné souvislosti.
• Stejně jako u všech diagnostických vyšetření by se neměla klinická diagnóza
opírat jen o výsledek jednoho testu, ale měla by být lékařem provedena po
vyhodnocení všech klinických a laboratorních nálezů.
• Intraindividuální variace hodnot CrP je relativně vysoká. Obecně se hodnoty > 10
μg/ml považují u většiny pacientů za zvýšené.
• Test není vhodný pro rozvrstvení rizika koronárních srdečních chorob. Pro tento
účel není dostatečně citlivý.
OČEKÁVANÉ HODNOTY
Hladiny CrP v plazmě se zvyšují během 6 až 8 hodiny po akutní příhodě, např. po
bakteriální infekci nebo traumatu, a obvykle dosahují maxima během 48 hodin po
výskytu příhody. Hladiny po příhodě rychle klesají s tím, že poločas CrP je 48 hodin.
Závažnost zánětu a aktivity zánětu často ovlivňují míru zvýšení hladiny CrP. Hodnoty
10 až 40 μg/ml často doprovázejí mírný zánět, např. při místní bakteriální infekci,
lehčím traumatu, maligních nádorech, u většiny virových onemocnění atd. Hladiny
CrP dosahující hodnoty 100 μg/ml indikují závažné onemocnění se zánětem, který
obvykle vyžaduje okamžitou léčbu.
Hodnoty nad 100 μg/ml lze detekovat např. při bakteriální sepsi nebo po rozsáhlých
chirurgických zákrocích.2
CHARAKTERISTIKY VÝKONU
Test byl kalibrován pomocí mezinárodního referenčního standardu lidského CrP
(WHO 85/506). Limit detekce pro test CRP je nastavený tak, aby se při koncentraci
10 μg/ml v nezředěném vzorku po jeho naředění dodaným pufrem vytvořila červená
pozitivní linie.
Pokud je koncentrace CrP v nezředěném vzorku vyšší než 40 μg/ml,
objeví se druhá červená linie. V případě koncentrace CrP vyšší než 80 μg/ml se
objeví třetí červená linie. Tato koncentrační rozmezí lze potvrdit ve srovnání s
kvantitativním referenčním testem.
Hook efekty nebyly prokázány do koncentrace CrP ve výši 2 000 μg/ml. Při této
koncentraci test indikoval výsledky >80 μg/ml.
POZITIVNÍ VÝSLEDEK: Objeví-li se vedle kontrolní linie (C) další linie, výsledek
testu lze považovat za pozitivní. To znamená, že ve vzorku byl detekován CrP.
Vytvoření linií výsledku testu (T1, T2 a T3) závisí na koncentraci CrP. Čím více linií
se objeví, tím větší je koncentrace CrP ve vzorku.
• 1 červená linie testu (T1) a 1 červená kontrolní linie (C):
Při koncentraci CrP vyšší než 10 μg/ml se v dolní části kromě kontrolní linie objeví i
linie testu, která je zpočátku nevýrazná. Se zvyšující se koncentrací CrP se intenzita
barvy linie zvyšuje.
LITERATURA
1. Macy EM, Hayes TE & Tracy RP (1997): Variability in the measurement of Creactive Protein in healthy subjects; implications for reference intervals and
epidemiological applications. Clin. Chem. 43, 52-58.
2. Thomas L, Labor und Diagnose, 7. Auflage (2008), TH- Books Verlagsgesellschaft
mbH, Frankfurt/Main.
• 2 červené linie testu (T1 a T2) a 1 červená kontrolní linie (C):
Nad první linií testu se objeví druhá nevýrazná barevná linie testu od koncentrace
přibližně 40 μg/ml.
VYSVĚTLENÍ SYMBOLŮ
• 3 červené linie testu (T1, T2 a T3) a 1 červená kontrolní linie (C):
Nad prvními dvěma liniemi testu se objeví třetí nevýrazná barevná linie testu od
koncentrace přibližně 80 μg/ml.
Na obrázku je znázorněn vznik linií testu v závislosti na koncentraci CrP. Můžete
vidět, jak se počet linií testu zvyšuje se zvyšující se koncentrací CrP. Když se linie
začínají objevovat, intenzita zbarvení je nevýrazná, ale zvyšuje se se zvyšující se
koncentrací CrP.
Diagnostický zdravotnický
prostředek in vitro
Pro jednorázové použití
Dostačuje pro
Spotřebujte do
Kód šarže
Výrobce
Všimněte si prosím, že se všechny tři linie liší intenzitou zbarvení. Na obrázku
můžete vidět, že v uvedeném koncentračním rozmezí má spodní linie (T1)
nejintenzivnější barvu. Prostřední (T2) a především horní linie testu (T3) jsou
výrazně méně zbarvené. Oproti intenzitě zbarvení linií testu je barva kontrolní linie
nezávislá na koncentraci CrP a je stále tmavě červená.
+30°C
+2°C
Teplotní omezení
Viz návod k použití
Rev.:3.0 – (CS) – 29/07/2014 (LET)
NEGATIVNÍ VÝSLEDEK: Linie se objeví pouze v oblasti kontrolní (C). Nezobrazí-li
se žádná linie v testovacích oblastech (T1, T2, T3), koncentrace CRP ve vzorku je
<10 μg/ml.
Dovozce pro ČR a SR: DOT diagnostics, s.r.o.
Ruzyňská 519/16; CZ - 161 00 Praha 6
Tel.: +420 235 318 612; Fax: +420 235 18 614
e-mail: [email protected] / www.dotdiag.cz
NEPLATNÝ VÝSLEDEK: Kontrolní linie se neobjeví. Nejpravděpodobnější příčinou
toho, že se neobjevila kontrolní linie je nedostatečné množství vzorku, prošlé testy
nebo chybný postup. Zkontrolujte provedení testu a test zopakujte. Pokud problém
přetrvává, sadu ihned přestaňte používat a kontaktujte lokálního distributora.
Distribuce a prodej:
QUICKSEAL INTERNATIONAL, s.r.o.
Korytná 47; CZ – 100 00 Praha 10 - Česká republika
Tel.: +420 607 751 430
e-mail: [email protected] / www.quickseal.eu
2