Strep A - Medisco

D-CRP – W11M
C-reaktivní protein (CRP)
Semikvantitativní rychlý test na detekci C-reaktivního proteinu v plné krvi, séru
nebo plazmě.
ÚČEL POUŽITÍ
DIMA® CRP Test je semikvantitativní rychlý test na detekci a monitorování hladiny
CRP v plné krvi, séru nebo plazmě. Hodnota cut-off tohoto testu je 10µg/ml.
Tento test je určen pouze pro profesionální použití.
ÚVOD
CRP, tedy C-reaktivní protein, je proteinem akutní fáze. Je klasickým markerem,
který lze použít na detekci zánětlivé reakce v těle. CRP je syntetizován játry a je
indukován prozánětlivými cytokiny, zvláště interleukinem-6. Plazmou se CRP dostává
na místa zánětu, kde aktivně působí při přirozené imunitní odpovědi. Systemický
zánět je obvykle spojen se zvýšením koncentrace CRP v krvi. Zvláště mohou zvýšení
CRP indukovat bakteriální infekce, sterilní poškození tkání, např. po chirurgickém
zásahu, trauma nebo extrémní fyzický stres, nádory, především ve stádiu metastáze
a některá autoimunitní onemocnění a také maligní systemická onemocnění
(Hodgkinův a ne-Hodgkinův lymfom). Pro diagnostické účely je CRP často používá
na rozlišení mezi virovými a bakteriálními infekcemi, jelikož vyšší zvýšení CRP
vyvolává bakteriální infekce. CRP se také často používá pro monitorování
terapeutického efektu např, antibiotické léčby. CRP Test je imunochromatografický
test, založený na dvou specifických protilátkách proti lidskému CRP. Uspořádání
testovacích linií podle koncentrace umožňuje rychlé semikvantitativní stanovení CRP
ve vzorcích plné krve, séra a plazmy.
PRINCIP TESTU
Konec testovacího stripu se ponoří do testovaného vzorku, který je zředěn roztokem
pufru. Vzorek se pak pohybuje přes strip zespodu směrem vzhůru. Pokud testovaný
vzorek obsahuje CRP, naváže se na první protilátky proti CRP, které jsou
konjugovány s koloidním zlatem obarveným červeně. Červený komplex CrPprotilátka – zlato, společně s tekutým vzorkem, vzlíná přes membránu, která má
předem naneseny linie s různým množstvím druhé protilátky proti CRP. Komplex
CRP-protilátka – zlato se váže druhou protilátku, což vede ke tvorbě červených linií.
Počet vytvořených červených linií závisí na koncentraci CRP ve vzorku. Více CRP
obsaženého ve vzorku vytvoří více viditelných linií. Na konci membrány se vytvoří
červená kontrolní linie, která indikuje, že test proběhl správně. Vytvoření kontrolní
linie není závislé na koncentraci CRP ve vzorku. Absence červené kontrolní linie
indikuje nevalidní výsledek. Takový test musí být opakován.
každý test obsahuje zbarvené
konjugáty a reaktivní reagencie
předem navázané v dané oblasti.
plastové zkumavky
obsahují roztok pufru s nízkou
koncentrací azidu sodného jako
konzervační látky (pod 01%)
Kapiláry (10µl)
pro odměření vzorku
Návod na použití
tato instrukce
ODBĚR A UCHOVÁVÁNÍ VZORKU
Příprava
Před provedením testu se ujistěte, že jsou všechny složky
vytemperovány na pokojovou teplotu (viz pokyny k uchovávání). Chladný
roztok pufru nebo kondenzace vlhkosti na membráně může mít vliv na
výsledek.
1. Vyndejte zkumavku s roztokem pufru z balení. Označte si ji jménem
pacienta nebo ID.
Otevřete šroubovací uzávěr.
Odběr vzorku krve
2. Vzorek odeberte podle standardního postupu.
• Nenechte vzorky v teplotě místnosti po dlouhou dobu. Vzorky séra a plazmy
lze skladovat při 2-8°C až po 3 dny. Na delší dobu je třeba je uložit na -20°C.
Vzorky plné krve z venipunkce je třeba uchovávat při 2-8°C, pokud se test
provede do 2 dnů od odběru. Nezmrazujte vzorky plné krve. Plná krev
odebraná z prstu se musí použít hned.
• Nechte vzorky před testováním vytemperovat na pokojovou teplotu.
Zmrazené vzorky musí být úplně rozmraženy a dobře před testem promíchány.
Zabraňte opakovanému zmrazení a rozmrazení vzorků.
• Krev s EDTA, citrátem nebo heparinem se může také použít. Před
provedením testu musí být patřičně zředěna dodaným pufrem.
DODANÉ REAGENCIE A MATERIÁLY
jednotlivě balené testovací
stripy v aluminiovém obalu
 Nelijte vzorek na reakční zónu.
 Nedotýkejte se reakční zóny na destičce, abyste nezpůsobili kontaminaci.
 Všechny vzorky pacientů je třeba považovat za schopné přenosu infekčního
onemocnění. Dodržujte pokyny práce s mikrobiologicky nebezpečným
materiálem po celou dobu testování a při likvidaci vzorků.
 Roztok pufru obsahuje azid sodný, který může reagovat s mědí nebo
olovem za tvorby potenciálně explozivních azidů kovů. Při likvidaci proto
použijte velké množství vody, aby se zabránilo jejich vzniku.
 Používejte ochranné pomůcky, jako je laboratorní plášť, jednorázové
rukavice a ochranu očí, pokud testujete vzorky.
 Test uchovávejte a transportujte při teplotě 2-30°C.
 Vlhkost a vysoké teploty mohou mít nevratný vliv na výsledek.
 Testovaný materiál používejte ve shodě s místními předpisy pro tento druh
materiálu.
 Použití tohoto testu s dodržením všech standardních pravidel nepředstavuje
žádné nebezpečí.
3. Pomocí dodané kapiláry odeberte objem 10 μl vzorku krve. Je důležité, aby
se kapilára naplnila až do horního okraje. Z hygienických důvodů držte
kapiláru držákem na kapiláry nebo pinzetou. Obdobně může být krev také
nabrána mikropipetou. Mějte na paměti, že v případě použití mikropipety nebo
jiných kapilár musí být vždy objem vzorku přesně 10 μl. Vzorek krve zřeďte
hned, aby se zabránilo srážení.
Ředění vzorku / Stabilita vzorku
4. Dejte krví naplněnou kapiláru do plastové zkumavky s ředícím pufrem.
Obdobně se může 10 μl vzorku přidat přímo mikropipetou do pufru.
5. Uzavřete zkumavku a třepejte vzorkem silně v ruce asi 10 sekund, aby se
krev uvolnila z kapiláry a vzorek se dobře promíchal s roztokem pufru.
MATERIÁL NUTNÝ ALE NEDODANÝ
 Minutka
 Centrifuga – pro použití vzorků séra/plazmy
6. Nechte zředěný vzorek v klidu asi 1 minutu.
7. Vzorek se pak může použít ihned nebo se může až na 8 hodin uložit.
UPOZORNĚNÍ








POUZE PRO profesionální použití jako IN VITRO DIAGNOSTIKUM!
Nepoužívejte po datu expirace na obalu.
Nepoužívejte tyčinku, pokud byl obal porušen.
Testovací strip musí zůstat uzavřen až do použití, jelikož je citlivý na vlhkost!
Nepoužívejte test, pokud byl obal porušen!
Nemíchejte reagencie z různých šarží.
Pouze pro jednorázové použití!
Nejezte, nepijte nebo nekuřte v pracovní místnosti, kde nakládáte se vzorky nebo
testem.
 Nechte všechny složky před použitím vytemperovat na pokojovou teplotu (1530°C).
 Neponořujte strip více než je po značku MAX!
1
POSTUP TESTU
Po otevření aluminiového obalu se musí test provést rychle, jelikož je
citlivý na vlhkost.
1. Otevřete aluminiový obal a vyndejte testovací strip za konec označený
zkratkou CRP. Nedotýkejte se prsty části pro výsledek.
2. Otevřete zkumavku s ředěným vzorkem a vložte druhý konec testovacího
stripu do tekutiny. Zajistěte ponoření stripu maximálně po vyznačenou linii
MAX, ne více. Zabraňte, aby jakýmkoliv způsobem došlo namočení pole pro
výsledek.
D-CRP – W11M
C-reaktivní protein (CRP)
3. Nechte testovací strip minimálně 10 sekund v naředěném vzorku, dokud lehce
růžově zbarvená fronta nebude vidět v poli pro výsledek.
4. Vyndejte strip a položte ho na rovnou podložku, která ho nebude vysušovat (např.
na obal testu). Obdobně může testovací strip zůstat ve zkumavce. Začněte počítat
čas.
5. Počkejte, až se objeví zbarvené linie. Výsledek odečítejte po 5 minutách. Držte se
přesně této časové hranice, aby se zajistilo korektní semikvantitativní vyhodnocení.
INTERPRETACE VÝSLEDKU
Pamatujte, že se tento test musí vyhodnotit přesně po 5 minutách!
Pro interpretaci výsledků si prohlédněte linie, které se vytvořily v bílém poli na
membráně.
Poznámka
Test odečítejte pouze jednou, po 5 minutách. U imunochromatografie a
kinetiky rychlých testů je přirozené, že se intenzita všech linií časem snižuje.
Pokud se test odečte později, není dále zajištěna přesnost semikvantitativní
interpretace, jelikož se nízké koncentrace mohou považovat za vyšší.
KONTROLA KVALITY
• Interní kontroly postupu jsou zahrnuty v testu. Zbarvená linie, která se objeví
v kontrolním úseku (C), je považována za vnitřní pozitivní kontrolu postupu,
která potvrzuje, že byl použit dostatečný objem vzorku a správná technika
postupu.
• Externí kontroly nejsou v soupravě dodány. Je doporučeno, aby si každé
pracoviště použilo podle správné laboratorní praxe vlastní pozitivní a negativní
kontroly a ověřilo si vlastní provedení testu.
OMEZENÍ POSTUPU
• CRP není specifickým markerem určité choroby. Jako všechna in vitro
diagnostika, nelze ani zde výsledek interpretovat samostatně, ale musí být dán
do souvislosti s dalšími klinickými známkami. Často se zvýšené CRP objevuje
před zjevnými symptomy, takže je třeba mít na paměti časový průběh.
• Individuální variabilita hodnot CRP je relativně vysoká. Obecně mohou být
hodnoty > 10 μg/ml považovány za zvýšené u většiny pacientů.
• Tento test není vhodný u rozlišení rizika u srdečních onemocnění. Pro to není
dostatečně citlivý.
OČEKÁVANÉ HODNOTY
Plazmatické hladiny CRP se zvyšují během 6 až 8 hodin po vzniku akutního
stavu, jako např. bakteriální infekce nebo traumatu, a dosahuje vrchol asi po
48 hodinách. Hladiny rychle padají po zastavení způsobujícího vlivu, poločas
CRP je 48 hodin.
Obvykle má vliv závažnost zánětu a aktivita zánětu na rozsah zvýšení CRP.
Hodnoty 10 až 40 μg/ml často odpovídají slabému zánětu, jako je lokální
bakteriální infekce, absces, slabé trauma, maligní tumory, většina virových
onemocnění atd. Až 100 μg/ml CRP indikuje závažné onemocnění se
zánětem, které obvykle vyžaduje okamžitý léčebný zásah.
Hodnoty vyšší než 100 μg/ml se vyskytují u bakteriální sepse nebo velkých
chirurgických zákroků (Thomas, 2008).
Pozitivní výsledek:
Pokud se objeví více než jedna linie (tedy než kontrolní linie C), je tento vzorek
pozitivní, což znamená, že byl ve vzorku detekován CRP. Počet vytvořených linií (T1,
T2 a T3) je závislé na koncentraci CRP. Čím více linií je viditelných, tím je
koncentrace CRP ve vzorku větší.
• 1 červená testovací linie (T1) a 1 červená kontrolní linie (C):
Při koncentracích CRP asi 10 μg/ml a vyšších se objeví ve spodní části testovací
linie, která je na začátku slabá. Navíc se objeví kontrolní linie. Se zvyšující se
koncentrací CRP se intenzita barvy linie zesiluje.
• 2 červené testovací linie (T1 a T2) a 1 červená kontrolní linie (C):
Asi od 40 μg/ml se objevuje druhá slabě zbarvená linie v testovací zóně nad první
testovací linií.
• 3 červené testovací linie (T1, T2 a T3) a 1 červená kontrolní linie (C):
Asi od 80 μg/ml se objevuje třetí slabá linie nad prvními dvěma testovacími liniemi.
Diagram výše ukazuje tvorbu testovacích linií v závislosti na koncentraci CRP.
Můžete vidět, jak se počet linií zvyšuje se zvyšující se koncentrací CRP. Intenzita
barvy je slabší, když se začne linie objevovat a sílí se stoupající koncentrací CRP.
Pamatujte, že intenzita barvy těchto tří linií je různá. Můžete vidět na obrázku, že je
linie s koncentrací v nejnižší části (T1) nejintenzivněji zbarvená. Střední (T2) a
zvláště horní testovací linie (T3) jsou výrazně méně zbarvené. Oproti intenzitě barvy
testovacích linií je intenzita barvy kontrolní linie nezávislá na koncentraci CRP a
konstantně je sytě červená.
CHARAKTERISTIKY PROVEDENÍ
Tento test byl kalibrován oproti mezinárodnímu referenčnímu standardu
lidského CRP WHO 85/506. Detekční limit testu CRP Test je nastaven tak,
aby dala koncentrace 10 μg/ml v neředěném vzorku po zředění dodaným
pufrem pozitivní červenou linii.
Pokud obsahuje neředěný vzorek více než 40 μg/ml CRP, objeví se druhá
linie. U koncentrací vyšších než 80 μg/ml CRP se objevuje třetí červená linie.
Tato rozmezí koncentrací mohou být ověřena srřovnáním s kvantitativním
referenčním testem.
„Hook efekty“ se nevyskytovaly až do koncentrace 2,000 μg/ml CRP. Při této
koncentraci ukazujte test výsledek >80 μg/ml.
LITERATURA
1. Macy EM, Hayes TE & Tracy RP (1997): Variability in the measurement of
C-reactive Protein in healthy subjects; implications for reference intervals and
epidemiological applications. Clin. Chem. 43, 52-58.
2. Thomas L, Labor und Diagnose, 7. Auflage (2008), TH- Books
Verlagsgesellschaft mbH, Frankfurt/Main.
SYMBOLY
Jednorázové
použití
Pouze pro
diagnostiku in vitro
Obsah
Negativní výsledek:
Objeví se pouze červená kontrolní linie (C). Koncentrace CRP ve vzorku
je <10 μg/ml.
Číslo šarže
Neplatný výsledek:
Není viditelná sytě červená kontrolní linie (C) v horní části políčka na membráně.
V takovém případě není test validován, i když jsou třeba testovací linie viditelné.
Takový test musí být opakován.
2
Rev 2.1-06/12/2010
MM27.1.2011
Datum expirace
+30°C
+2°C
Uchovávejte za
pokojové teploty