Kvalitativní chemická analýza moči - Katedra analytické chemie

Modulární výuka jako nástroj odezvy vzdělávacího systému na potřeby praxe
CZ.1.07/2.2.00/28.0029
Návod do laboratorního cvičení z klinické analytické chemie
Kvalitativní chemická analýza moči
Analýza moči má značný význam zejména pro posuzování funkce ledvin, ale i jiných orgánů
jako jsou např. játra nebo pankreas. Kvalitativní vyšetření se provádí nejčastěji pomocí
diagnostických proužků (DP), indikátorových tablet nebo zkumavkovými reakcemi. Hlavními
parametry určovanými při kvalitativní analýze moči jsou: pH, bílkoviny (proteiny), glukóza,
acetonové látky (ketony) a přítomnost krve. Dalším důležitým kvalitativním parametrem
určovaným z moči je přítomnost vyšší koncentrace lidského choriového gonadotropinu
(hCG), která diagnostikuje těhotenství.
pH moči
Udržování stálého pH, resp. acidobazické rovnováhy je základní podmínkou životních
procesů. Stanovení pH se provádí co nejdříve, aby nedošlo k rozmnožení mikroorganismů,
které je spojeno s produkcí amoniaku (vznikajícího rozkladem močoviny), a tím vede ke
zvýšení pH. Referenční hodnota je 5,5 – 6,5. Test na diagnostických proužcích (DP PHAN) je
založen na reakci směsného acidobazického indikátoru (0,71 % methylčerveň a 12,1 %
bromthymolová modř) s barevným přechodem z oranžové přes žlutou a zelenou do modré
v rozmezí pH 5 – 9. Hodnotu pH lze odečíst s přesností 0,5 jednotky pH.
proteiny v moči
Přítomnost proteinů v moči nazýváme proteinurií a rozlišujeme tři stavy proteinurie:
přechodný, funkční a patologický. Přechodná proteinurie se objevuje např. při horečce malých
dětí nebo u rychle rostoucích dětí a souvisí se změnami v oblasti bederní páteře. Funkční
proteinurie bývá způsobena tělesnou nebo duševní námahou, těhotenstvím, teplotními výkyvy
nebo některými léky. Příčinou patologické proteinurie jsou chronické záněty ledvin, nefrózy,
horečnatá onemocnění, těžké srdeční a cévní choroby, požití toxických látek apod. Hlavní
složkou proteinů v moči je albumin. Referenční hodnota je < 0,2 g/24 hodin, resp. < 0,1 g/l.
Test na diagnostických proužcích (DP PHAN) je založen na změně barvy acidobazického
indikátoru (0,21 % tetrabromofenolftalein ester, 0,35 % bromthymolová modř) vlivem
proteinů. Test je zejména citlivý na albumin, podstatně nižší citlivost vykazuje vůči
globulinům, mukoproteinům nebo hemoglobinu.
glukóza v moči
Glukóza je nejčastějším cukrem v moči (u kojených dětí ještě laktóza). Do moči se dostává
glomerulární filtrací, ale většina glukózy je vstřebávána v ledvinových tubulech zpět do krve.
Kapacita tubulárních buněk pro resorpci glukózy je 8 – 11 mmol/l v plazmě. Pokud je tato
Modulární výuka jako nástroj odezvy vzdělávacího systému na potřeby praxe
CZ.1.07/2.2.00/28.0029
kapacita (tzv. ledvinový nebo renální práh) překročena, dostává se glukóza do moči. Při
posuzování výsledků je potřeba mít na paměti, že ledvinový práh má značné individuální
kolísání. Glukosurie (vylučování cukrů v moči) může znamenat nesprávnou rychlost podání
při infuzi nebo při diabetes mellitus, v těhotenství, při onemocnění ledvin a jater, akutní
pankreatitidě nebo při nádorových onemocněních. Referenční hodnoty glykosurie jsou 0,11 –
0,83 mmol/l v ranní moči (někdy se uvádí do 0,56 mmol/l). Test na diagnostickém proužku
(DP PHAN) je založen na enzymové reakci glukosoxidázy (1,3 %) a peroxidázy (1,3 %),
které oxidují glukózu, a následné reakci s tetramethylbenzidinem (21 %) za vniku zeleného
zbarvení.
ketony v moči
Vylučování ketolátek močí se označuje jako ketonurie. Mezi základní ketolátky zahrnujeme
kyselinu acetooctovou, kyselinu 3-hydroxymáselnou a aceton. Tyto vznikají v játrech jako
meziprodukt při metabolismu lipidů a vylučují se v poměru aceton : kyselina acetooctová :
kyselina 3-hydroxymáselná 0,78 : 0,2 : 0,02. Tento poměr je téměř konstantní, proto obvykle
stačí sledovat jen aceton a zbytek dopočítat. U pacientů v těžkém šoku (nedostatek kyslíku)
může dojít k změně tohoto poměru. Průkaz ketolátek v moči má velký význam pro včasné
rozpoznání metabolické dekompenzace diabetiků. Za normálních okolností (pokud pacient
nehladoví) je koncentrace ketolátek pod mezí detekce užívaných metod. Zvýšené koncentrace
se pak vyskytují u hladovění, u redukčních diet, při námaze, horečnatých onemocněních apod.
Test na diagnostickém proužku (DP PHAN) je založen na principu Legalovy reakce, kdy
reagují ketolátky s nitroprussidem sodným (4,9 %) v alkalickém prostředí za tvorby červenofialového zbarvení, a je citlivější na kyselinu acetooctovou než aceton (barevná srovnávací
stupnice je kalibrována rovněž na kyselinu acetooctovou).
krev v moči
Za normálních okolností se krevní barvivo v moči nevyskytuje. Nález krve v moči nazýváme
hematurie a rozdělujeme ji na erytrocyturii a hemoglobinurii. V případě erytrocyturie se může
jednat o zánět ledvin, močové kameny, hemofilii, úrazy a operace močových cest apod.
Hemoglobinurie znamená přítomnost hemoglobinu v moči a dochází k ní při všech stavech
provázených intravaskulárním rozpadem erytrocytů, např. při akutní hemolytické anemii, při
popáleninách, při otravách chlorečnany nebo některými houbami apod. Test na diagnostickém
proužku (DP PHAN) je založen na peroxidasové aktivitě hemoglobinu, který katalyzuje
oxidaci indikátoru (1,5 % tetramethylbenzidin) organickým hydroperoxidem obsaženým
v reagenční zóně (15,2 % kumenhydroperoxid). Test je vysoce citlivý na hemoglobin.
lidský choriový gonadotropin (hCG)
Lidský choriový gonadotropin (hCG) je glykoprotein ze skupiny hormonů gonadotropinů. Ve
chvíli, kdy se oplodněné vajíčko zahnízdí do zbytnělé děložní sliznice, začínají první buňky,
které tvoří základ placenty, uvolňovat do krevního oběhu chemické látky a hormony, které
zabrání příchodu další menstruace. Jde hlavně o hCG, který také jako jeden z prvních
ukazatelů prokáže, zda je žena těhotná. Přítomnost hCG lze zjistit jednoduchým vyšetřením
Modulární výuka jako nástroj odezvy vzdělávacího systému na potřeby praxe
CZ.1.07/2.2.00/28.0029
z krve a moči. U zhruba 5 % budoucích maminek lze tento hormon v určující hodnotě nad
5 mUI/ml najít v krvi již 3. týden po poslední menstruaci, což je asi 8. den po oplodnění. Ve
většině případů lze tento hormon v krvi určit již 11. den po oplodnění. Také těhotenské
testy jsou založeny na přítomnosti tohoto hormonu, který se v době, kdy je již vajíčko
bezpečně uhnízděno v děloze, objeví i v moči. Koncentrace hCG v těle budoucí
maminky během prvního trimestru velmi rychle narůstá. Jeho množství v krvi se zpočátku
zdvojnásobuje každé 2 – 3 dny. Proto je možné, že těhotenský test může být negativní a druhý
den již naopak pozitivní. Vrchol hladiny hCG v krvi těhotné ženy nastává kolem 9. – 10.
týdne těhotenství a pak mírně opadá. Po 25. týdnu hodnota hCG již zůstává stabilní až do
porodu. Jeho vylučování močí končí asi 7. den po porodu, tj. po vypuzení plodu a placenty.
Hladina hodnoty hCG na začátku těhotenství a její vývoj:
Doba od početí
Doba od poslední menstruace
mIU/ml
7 dní (1. týden)
14 dní
21 dní
28 dní
35 – 42 dní
43 – 64 dní
57 – 78 dní
17 – 24 týden
Od 25 týdne
21 dní (3 týdny)
28 dní (4 týdny)
35 dní (5 týdnů)
42 dní (6 týdnů)
49 – 56 dní (7 – 8 týdnů)
57 – 78 dní (8 – 11 týdnů)
79 – 100 dní (11 – 15 týdnů)
Druhý trimestr
Třetí trimestr
0–5
3 – 426
18 – 7 340
1080 – 56 500
7 650 – 229 000
25 700 – 288 000
13 300 – 253 000
4 060 – 65 400
3 640 – 117 000
Těhotenský test GS Mamatest je založen na přímé reakci hCG se specifickou protilátkou
a dále s barvivem, které vytváří v případě vazby barevný proužek. Kromě toho test obsahuje
i tzv. kontrolní zónu, která slouží k důkazu, že reakce mohla proběhnout. Vyhodnocení se
potom provádí následujícím způsobem:
Výsledek (T = test, C = kontrola)
Vyhodnocení
negativní výsledek
Modulární výuka jako nástroj odezvy vzdělávacího systému na potřeby praxe
CZ.1.07/2.2.00/28.0029
pozitivní výsledek
neplatný výsledek
ÚKOL
Proveďte kvalitativní diagnostiku moči pomocí diagnostických proužků PHAN a pomocí
těhotenského testu GS mamatest.
POSTUP
Se všemi vzorky pracujte jako s potenciálně infekčním materiálem – v rukavicích!
Diagnostika pomocí DP PHAN (pH, proteiny, glukóza, ketony, krev):
1. Vyjměte z tuby jen tolik proužků, kolik potřebujete. Tubu ihned zavřete původní zátkou
obsahující sušidlo. Nedotýkejte se rukou reakčních zón.
2. Proužek krátce ponořte do vyšetřované moči (1 – 2 s) tak, aby všechny reagenční zóny
byly smočeny.
3. Proužek otřete hranou o okraj nádoby a následně ještě hranu osušte buničinou, aby byla
odstraněna přebytečná moč. Proužek ponechte ve vodorovné poloze.
4. Po cca 1 minutě vyhodnoťte zbarvení reagenčních zón vizuálně srovnáním s barevnou
stupnicí na tubě DP PHAN.
Diagnostika pomocí těhotenského testu GS mamatest:
1. Otevřete sáček s testovacím proužkem. Ponořte testovací proužek do vzorku moči tak, aby
šipka směřovala do vzorku. Po 10 sekundách proužek vyjměte a položte jej na vodorovný,
čistý a suchý povrch.
2. Pozitivní výsledek lze pozorovat již po 1 minutě. Pro potvrzení negativního výsledku je
třeba vyčkat 3 minuty. Výsledek testu nelze odečíst po uplynutí delší doby jak 5 minut.